Setzen Sie zunächst den Sensordeckel auf eine leere 96-Well-Empfängerplatte und legen Sie sie in den Zellkultur-Inkubator. Richten Sie das Gerät aus, montieren Sie es auf dem Sensordeckel und verbinden Sie es über das mitgelieferte USB-Kabel mit dem Hub, wodurch ein Recypher-Sandwich entsteht. Gehen Sie nun auf die Lucid Lab-Website und klicken Sie auf die Schaltfläche Neues Experiment in der oberen rechten Ecke, um ein neues Experiment zu erstellen.
Nennen Sie den Titel des Experiments und geben Sie alle relevanten experimentellen Notizen für die Studie ein. Schaffen Sie als Nächstes Well-Bedingungen in Behandlungsgruppen. Wenn Sie beispielsweise die Auswirkungen unterschiedlicher Serumkonzentrationen in den Medien auf die Sauerstoffverbrauchsrate testen, wählen Sie im Gruppennamen die zu verwendenden Zwischenserumkonzentrationen aus und fügen Sie weitere Serumprozentwerte hinzu, indem Sie auf die Plus-Schaltfläche klicken.
Weisen Sie dann zu, welche Vertiefungen einen bestimmten Serumprozentsatz erhalten, und wählen Sie ein Farbmuster für diese Vertiefungen aus. Klicken Sie auf die Schaltfläche Gruppe hinzufügen, um bei Bedarf weitere Gruppen hinzuzufügen. Definieren Sie als Nächstes die Platteneinrichtung und wählen Sie das entsprechende Gerät und den Plattenstil aus.
Klicken Sie dazu auf die Schaltfläche Platte hinzufügen, wählen Sie das Gerät aus und wählen Sie den Plattentyp aus. Wählen Sie die Behandlung aus und klicken Sie auf die entsprechende Vertiefung. Klicken Sie nun auf die Schaltfläche Jetzt starten, um das Experiment zu starten.
Vergewissern Sie sich, dass die Anzeige auf der Website und die Leuchtdiode an der Hub-Zentrale durchgehend grün leuchten. Lassen Sie das System 15 bis 60 Minuten laufen, um zu testen, ob jeder Sensor gut kalibriert ist und Luftsauerstoff erkennt. Nehmen Sie anschließend das Gerät aus dem Sensordeckel und legen Sie es kopfüber in den Inkubator, damit der Motor des Geräts zurückgesetzt werden kann.
Setzen Sie nun die Platte mit dem Sensordeckel wieder in die Zellkulturhaube ein, zusammen mit einer 96-Well-Platte, die die RPE-Kulturen enthält. Ändern Sie das Medium in der Platte mit RPE-Kulturen auf das gleiche Medium und Volumen für alle Wells, um die Ausgangswerte für den Sauerstoffverbrauch für jedes Well zu erhalten. Übertragen Sie dann den Sensordeckel auf die Platte mit den Zellkulturen und setzen Sie den Standarddeckel auf die Platte mit den Zellkulturen auf die leere 96-Well-Empfängerplatte, um die Sterilität des Standarddeckels zu erhalten.
Setzen Sie die Platte mit den Zellkulturen und den Sensordeckel wieder in den Zellkultur-Inkubator ein. Richten Sie das Gerät aus, montieren Sie es auf dem Sensordeckel und verbinden Sie es über das mitgelieferte USB-Kabel mit dem Hub. Vergewissern Sie sich, dass die Anzeigen auf der Website-Oberfläche und dem Hub grün leuchten.
Lassen Sie das Gerät mindestens 12 bis 24 Stunden lang den Sauerstoffverbrauch oder die OCR an jeder Vertiefung messen, um eine OCR zu erfassen. Tauchen Sie nach dem Experiment den Messdeckel 10 Minuten lang in 70 % Ethanol in eine Zellkulturhaube, um ihn zu sterilisieren. Sobald das Ethanol und das Wasser vollständig verdunstet sind, setzen Sie den Sensordeckel auf eine neue 96-Well-Empfängerplatte.
