Führen Sie zunächst den Mausschwanz in die obere Öffnung des Rückhalteschlauchs ein. Ziehen Sie die Maus langsam in das Rohr und platzieren Sie den Stecker vor der Maus, um ein Entweichen zu verhindern. Um eine Rückhaltehülle für eine kleinere Maus herzustellen, schneiden Sie am Nasenende des Kegels ab, um sicherzustellen, dass die Nase der Maus nicht verstopft wird und sie genügend Platz zum Atmen hat.
Schneide dann die Rückseite des Kegels ähnlich der Länge der Maus ab. Platzieren Sie die Maus wie zuvor beschrieben in den Schlauchhalter. Während du den Schwanz der Maus festhältst, lass die Maus in den Kegel laufen.
Schieben Sie den Rückhaltekegel in das Rohr. Stellen Sie sicher, dass der Schwanz der Maus ganz aus der Rückseite des Schlauchs herausragt und die Maus im Kegel Platz zum Atmen hat. Befestigen Sie den Röhrenstopfen unmittelbar vor der Nasenöffnung des Konus.
Füllen Sie das konische 15-Milliliter-Rohr mit warmem Wasser. Platzieren Sie den Schlauchrückhalteapparat mit der Maus darin auf der erhöhten Plattform. Tauchen Sie den Schwanz der gefesselten Maus mindestens eine Minute lang in warmes Wasser, bis die Seitenvenen deutlich erweitert und sichtbar sind.
Legen Sie das unverschlossene Adeno-assoziierte Virus (AAV) mit 1,7 Millilitern Mikrozentrifugenröhrchen in das Röhrchengestell. Führen Sie die Nadel mit der dominanten Hand senkrecht in die Röhre ein. Sobald sich die Nadel in der Röhre befindet, halten Sie die Röhre mit der nicht dominanten Hand.
Heben Sie dann den Schlauch und die Spritze gleichzeitig auf Augenhöhe an, wobei Sie darauf achten, dass die Nadel die Schlauchwand nicht berührt. Legen Sie beide Arme auf den Tisch und ziehen Sie die Dosis langsam in die Spritze. Stoßen Sie Luftblasen aus der Spritze über ein saugfähiges Einwegkissen aus.
Halten Sie das Injektor 40 Sekunden lang gedrückt, um es aufzuwärmen. Nachdem Sie sichergestellt haben, dass die Schwanzvenen deutlich sichtbar sind, entfernen Sie den Schlauchrückhalteapparat von der erhöhten Plattform und legen Sie ihn direkt auf den Tisch. Positionieren Sie die Maus mit den Füßen nach unten im Rückhaltesystem, um die Handhabung des Schwanzes zu erleichtern.
Wischen Sie den Schwanz schnell mit Gaze ab, um ihn zu trocknen. Wischen Sie dann den Schwanz mit einem Alkoholtupfer ab und trocknen Sie ihn erneut mit trockener Gaze ab. Drehen Sie den Schwanz ca. 90 Grad nach links oder rechts, so dass eine der beiden Seitenadern nach oben zeigt.
Suchen Sie eine geeignete Injektionsstelle im mittleren Drittel des Schwanzes. Halten Sie den Schwanz mit der nicht dominanten Hand mit Daumen und Zeigefinger unmittelbar distal zur Injektionsstelle. Falten Sie den Schwanz über den Zeigefinger, so dass die Injektionsstelle flach auf dem Zeigefinger liegt.
Ziehen Sie dann den Schwanz zurück, um ihn zu dehnen, und die Injektionsstelle ist vollständig horizontal. Halten Sie die Spritze mit dem Zeige- und Mittelfinger der dominanten Hand auf beiden Seiten des Zylinderflansches der Spritze, während Sie den Daumen am Kolben halten. Legen Sie beide Hände auf den Tisch und platzieren Sie die Nadel direkt auf und parallel zum Schwanz und zur Vene, wobei die Fase nach oben zeigt.
Üben Sie nun Druck nach unten auf die Nadel aus und schieben Sie sie nach vorne in die Vene, um die AAV-Lösung in die Vene zu injizieren. Ziehen Sie nach der Verabreichung der Dosis die Nadel langsam zurück und üben Sie sofort mindestens 10 Sekunden lang Druck mit Gaze auf die Injektionsstelle aus, bis die Blutung aufhört. Die histologische Bildgebung des fluoreszierenden Reporterproteins nach der Injektion zeigte, dass tdTomato in der Leber und im Quadrizeps diffus exprimiert wurde, was darauf hindeutet, dass AAV9 verschiedene Regionen beider Gewebe erreichte und transduzierte.
