In-vitro-Kultivierung von Plasmodium falciparum und Sorbit-Synchronisation für die Transfektion zur Entschlüsselung von Kompensationsmechanismen mit CDPK1

Kultivieren Sie zunächst den NF54-Stamm von Plasmodium falciparum in 2%Hämatokrit von O+humanen Erythrozyten in einem supplementierten vollständigen RPMI-Medium. Für die Sorbit-Synchronisation pelletieren Sie die asynchronen Parasiten in einem konischen 50-Milliliter-Röhrchen bei 2.300 g für drei Minuten bei Raumtemperatur. Nach dem Verwerfen des Überstands werden die parasitierten roten Blutkörperchen mit neun Volumina 5%Sorbit 10 Minuten lang bei 37 Grad Celsius inkubiert.

Nach der Inkubation pelletieren Sie die roten Blutkörperchen, wie zuvor gezeigt, und entsorgen Sie das Sorbit. Waschen Sie die mit Sorbit behandelten Parasiten mit unvollständigen RPMI- und RPMI-Medien ohne AlbuMAX und Natriumbicarbonat. Inkubieren Sie sie anschließend in vollständigem RPMI, um die Parasiten im Ringstadium zu erhalten.