Besorgen Sie sich zunächst die Sorbit-synchronisierten Ringstadien-Parasiten von Plasmodium falciparum. Bereiten Sie 50 Milliliter 2x Cytomix-Puffer vor und verdünnen Sie ihn 1 zu 1 mit sterilem Wasser. Waschen Sie dann 100 Mikroliter gepackte parasitierte Erythrozyten zweimal mit 5 Millilitern 1X Cytomix-Puffer und zentrifugieren Sie sie drei Minuten lang bei Raumtemperatur bei 994 G.
Nach dem Entfernen des Puffers geben Sie 50 Mikrogramm jedes Plasmids in die Zellen, gefolgt von einem entsprechenden Volumen von 2x Puffer. Stellen Sie das Volumen auf 400 Mikroliter mit 1x Puffer ein, bevor Sie die vorbereitete Lösung für jede Transfektion in 0,2 Zentimeter große Küvetten überführen. Elektropopolieren Sie dann die Zellen vorsichtig.
Nach der Elektroporation werden die Zellen mit vollständigem RPMI-Medium in einem T25-Kolben mit einem Gesamtvolumen von 15 Millilitern gemischt und inkubiert. Als nächstes zentrifugieren Sie die transfizierten Parasiten in einem konischen 50-Milliliter-Röhrchen bei 994 G für drei Minuten. Waschen Sie die Parasiten nach dem Entfernen des Überstands mit 10 Millilitern unvollständigem RPMI.
Kultivieren Sie sie zwei Tage lang mit frischem, vollständigem RPMI und füllen Sie das Medium nach 24 Stunden wieder auf. Nach 48 Stunden ist das vollständige RPMI aus jedem Kolben zu entfernen. Resuspendieren Sie die Kultur in vollständigem RPMI, das mit Medikamenten hinzugefügt wurde.
Inkubieren Sie die Kultur in einem T75-Kolben zusammen mit 400 Mikrolitern frischer roter Blutkörperchen für zwei Wochen Am 14. Tag aliquotieren Sie 200 Mikroliter der transfizierten Kultur in ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen. Zentrifugieren Sie das Röhrchen bei 500 g fünf Minuten lang bei Raumtemperatur. Nachdem Sie den Überstand abgesaugt haben, übertragen Sie die Zellen auf einen Objektträger und legen Sie einen weiteren Objektträger in einem 45-Grad-Winkel darauf, um einen Abstrich zu machen.
Tauchen Sie den Objektträger nach der Methanolfixierung 20 Minuten lang in Giemsa-Fleck. Waschen Sie die Rutsche unter fließendem Wasser und trocknen Sie sie gründlich ab. Betrachten Sie den Objektträger unter einem Lichtmikroskop bei 100-facher Vergrößerung nach dem Auftragen von Immersionsöl.
Sobald die Parasiten sichtbar sind, füllen Sie das Medium täglich für zwei bis drei Tage auf.
