PCR-Verifizierung von transgenen Parasiten mit gewünschter Modifikation des cdpk1-Locus zur Aufklärung von Plasmodium falciparum Kinase-Resistenzmechanismen

Behandeln Sie zunächst die transformierten Plasmodium falciparum-Parasiten mit den gewünschten Medikamenten. Nach zwei bis drei Tagen Parasitenwachstum zentrifugieren Sie 500 Mikroliter Kultur in einem Mikrozentrifugenröhrchen bei 2.400 g für fünf Minuten. Um die Erythrozyten zu lysieren, inkubieren Sie einen Milliliter der resuspendierten Parasiten mit 10 Mikrolitern 10 % Saponin bei vier Grad Celsius für fünf Minuten.

Nach dem Zentrifugieren der Zellen wird der Überstand verworfen, um das Parasitenpellet zu erhalten. Waschen Sie das Parasitenpellet mit einem Milliliter PBS und resuspendieren Sie das Pellet in 50 Mikrolitern DNAse und RNAse-freiem Wasser. Erhitzen Sie das resuspendierte Pellet fünf Minuten lang bei 95 Grad Celsius und zentrifugieren Sie es 10 Minuten lang bei 16.200 g bei vier Grad Celsius.

Übertragen Sie den Überstand mit der Parasiten-DNA in ein frisches Röhrchen.