Überprüfen Sie zunächst die Sequenz der gewünschten Gene, die aus den medikamentös behandelten Plasmodium falciparum-Parasiten isoliert wurden. Nach dem Verdünnen der parasitierten Erythrozyten fügen Sie ein entsprechendes Volumen hinzu, um insgesamt 50 Parasiten in 10 Millilitern Medium zu erreichen, wobei ein Hämatokrit von 2 % gewährleistet wird. Geben Sie dann 100 Mikroliter dieses Mediums mit 50 Parasiten in jede Vertiefung der 96-Well-Platte.
Stellen Sie die Platte in einen luftdichten, mit Mischgas gespülten Secador. Und inkubieren bei 37 Grad Celsius, wobei die Medien alle zwei Tage aufgefüllt werden. Ersetzen Sie das Medium jeden siebten Tag durch ein vollständiges RPMI mit 2 % Hämatokrit, bis die Parasiten auftreten.
Kippen Sie die 96-Well-Platte in einem 45-Grad-Winkel, damit sich die roten Blutkörperchen absetzen können. Entfernen Sie das Medium vorsichtig mit einer Mehrkanalpipette aus jeder Vertiefung. Beobachten Sie eine Farbänderung zu Gelb oder Dunkelrot in Vertiefungen, die Parasiten enthalten, was im Kontrast zur rosa Farbe des Mediums in parasitenfreien Vertiefungen steht.
Nehmen Sie als Nächstes eine kleine Menge Kultur aus dem Brunnen, der die Farbveränderung zeigt, und bereiten Sie einen Abstrich auf einem beschrifteten Objektträger vor. Betrachten Sie den Objektträger nach der Giemsa-Färbung unter dem Mikroskop. Den Inhalt der Vertiefung, in der Parasiten beobachtet wurden, in einen T25-Kolben umfüllen und inkubieren, um die Parasiten vier bis fünf Tage lang wachsen zu lassen.
Sobald die Parasitämie zwei bis 3 % Saponin erreicht, lysieren Sie 500 Mikroliter Parasitenkultur. Und extrahieren Sie das genetische Material des Parasiten.
