Fibrinogen-PAGE für die Analyse fibrinogenolytischer Wirkstoffe in Erdnusswurm-Homogenat

Bereiten Sie zunächst ein Gel für Fibrinogen-Phagen vor und geben Sie es zusammen mit der Leimform in den Elektrophoresetank. Gießen Sie 1.300 Milliliter Elektrophoreselösung in den Tank und nehmen Sie den Kamm aus dem Gel. Mischen Sie 5 Mikroliter 5x nicht denaturierenden Ladepuffer mit je 20 Mikrolitern fibrinogenolytischem Enzym und Erdnusswurm-Homogenat.

Laden Sie die Mischung in das vorbereitete Gel und leiten Sie die Elektrophorese bei 80 Volt für 30 Minuten oder 120 Volt für 20 Minuten ein. Entferne das Gel aus der Leimform und fülle es in eine Plastikbox. Geben Sie Tris-HCL und Triton in die Schachtel und inkubieren Sie sie auf einem Shaker bei 60 bis 70 U/min für 10 Minuten.

Entfernen Sie den Waschpuffer und inkubieren Sie das Gel mit 50 Millilitern 0,05 molaren Tris-HCL. Nach dem Entfernen des Puffers inkubieren Sie das Gel mit 50 Millilitern Färbung, gefolgt von einer Entfärbungslösung bei 60 bis 70 U/min für jeweils 30 Minuten. Das Erdnusswurm-Homogenat wies Banden auf, die Molekulargewichten von 25, 33, 43 und 70 Kilo-Dalton oder höher entsprachen.