In vivo Infektionsprozess von Pinus pinaster-Sämlingen mit Kiefernholznematoden

Zu Beginn stellen Sie die Suspensionen von gemischten Kiefernholznematoden im Lebensstadium auf 1000 Nematoden pro Milliliter ein. Zählen Sie die Nematoden auf einem konkaven Objektträger unter dem binokularen Mikroskop mit bis zu 40-facher Vergrößerung. Entfernen Sie vor der Inokulation von Nematoden manuell die Nadeln aus einem Abschnitt unterhalb der oberen fünf Zentimeter des Kiefernstamms und machen Sie mit einem sterilisierten Skalpell einen oberflächlichen Längsschnitt.

Legen Sie ein Stück sterilisierte Baumwolle in die Wundzone, um 0,5 Milliliter Nematodensuspension aus Kiefernholz aufzunehmen, und fixieren Sie es mit einem transparenten Streifen, um die Feuchtigkeit aufrechtzuerhalten. Pflegen Sie das Gewächshaus unter feuchten Bedingungen und gießen Sie häufig. Verfolgen Sie das Fortschreiten der Kiefernwelkekrankheit regelmäßig und bewerten Sie die Symptomatik, indem Sie den Prozentsatz der verfärbten und welken Nadeln quantifizieren.

20 Tage nach der Inokulation schneiden Sie die Sämlinge an der Basis des Stängels ab, um flüchtige Bestandteile zu extrahieren. Legen Sie die Setzlinge in braune Papiertüten und frieren Sie sie bei minus 20 Grad Celsius ein. Die erfolgreiche Infektion von Kiefernsetzlingen mit dem Kiefernfadenwurm führte etwa 20 Tage nach der Infektion zu Symptomen der Kiefernwelkekrankheit.