Positionieren Sie die anästhesierte Maus in einem stereotaktischen Rahmen. Identifizieren Sie Bregma und Lambda und stellen Sie sicher, dass zwischen den beiden Orientierungspunkten ein Höhenunterschied von nicht mehr als 100 Mikrometern besteht. Finde und markiere die berechneten Koordinaten auf dem Schädel mit einem sterilen Bleistift.
Erstellen Sie um die Koordinaten herum einen Umriss des zwei mal zwei Millimeter großen Kraniotomiefensters. Nachdem Sie die Anästhesietiefe überprüft haben, verwenden Sie einen Hochgeschwindigkeitsbohrer, um ein zwei Millimeter mal zwei Millimeter großes Kraniotomiefenster zu erstellen. Tragen Sie 0,5 bis 1 Milliliter normale Kochsalzlösung auf, um ein Austrocknen der Gehirnoberfläche zu verhindern.
Entfernen Sie die Dura mit einer Spritzennadel und einer feinen Pinzette. Verwenden Sie anschließend einen Hochgeschwindigkeitsbohrer, um ein separates Bohrloch für die Referenzelektrode der Silikonsonde zu erstellen, das in der Regel ein bis zwei Millimeter vom Schädelfenster entfernt ist. Tragen Sie 0,2 Milliliter Silikonkleber mit geringer Toxizität auf den Schädel auf, um die Kraniotomie vollständig abzudichten.
Befestigen Sie den Kopf der Maus mit der Kopfplatte und den Schrauben an der elektrophysiologischen Aufnahmeanlage. Dann beschichten Sie den Silikonsondenschaft mit Fluoreszenzfarbstoff, damit die Sondenbahn nach dem Experiment rekonstruiert werden kann. Montieren Sie danach die Sonde am Manipulator und stellen Sie den gewünschten Winkel ein.
Um die Aufzeichnungssonde auf die Gehirnoberfläche in der Mitte des Schädelfensters abzusenken, führen Sie die Sonde manuell bis zu einer Tiefe von etwa 300 Mikrometern ein. Sobald Sie in diese Tiefe eingeführt sind, senken Sie die Sonde langsam automatisch auf 200 Mikrometer pro Minute auf die Zieltiefe ab, um Gewebeschäden zu minimieren. Tragen Sie zum Schluss Mineralöl auf die Gehirnoberfläche innerhalb des Kraniotomiefensters auf, um ein Austrocknen zu verhindern.
Zeichnen Sie dann die Daten der Siliziumsonde und des ECOG bei 30 Kilohertz mit einem Intan-Aufzeichnungscontroller auf. Die meisten aufgezeichneten Neuronen verringerten ihr Feuern während der Sevofluran-Anästhesie. Das VLPAG-Feuern nahm von zu Studienbeginn bis während der Sevofluran-Behandlung signifikant ab.
Diese Abnahme war über alle VLPAG-Neuronen hinweg konsistent.
