Laden Sie zunächst die NMR-Pulsprogramme in das Verzeichnis auf dem Computer herunter, der das NMR-Spektrometer bedient, und passen Sie die TopSpin-Version an. Laden Sie die NMR-förmigen Impulse in das Verzeichnis herunter und stellen Sie sicher, dass die TopSpin-Version entsprechend aktualisiert wurde. Nachdem Sie die spektralen Breiten und die entsprechenden Erfassungszeiten bestimmt haben, geben Sie edc in der TopSpin-Software in ein neues Verzeichnis ein, um das HSQC-Experiment zu kopieren.
Um die Pulssequenzparameter zu öffnen, klicken Sie auf die drei Punkte neben dem PULPROG-Parameter, um das Pulsprogramm auf Stickstoff-15 R1 rho Experiment zu ändern. Doppelklicken Sie auf das Impulsprogramm, klicken Sie auf PULPROG auf den Datensatz setzen und bestätigen Sie mit OK. Geben Sie ased ein, um die Parameter der Impulssequenz zu öffnen. Geben Sie alle fehlenden Gradientenstärken und Gradientenlängen ein, wie in der Impulssequenz angegeben.
Geben Sie als Nächstes für den Schleifenzähler L3 die Hälfte des Eintrags Stickstoff-15 TD in das Erfassungsparameterfenster ein. Geben Sie für den Schleifenzähler L6 die Anzahl der aufgezeichneten Relaxationsdatenpunkte für die Anpassung der Relaxationskurve ein. Legen Sie die adiabatische TanhTan_half fest.
nl-Impuls als Form des Stickstoff-15 SP8-Impulses. Stellen Sie dann die adiabatische TanhTan_half2nd ein. nl-Impuls als Form des Stickstoff-15 SP9-Impulses.
Stellen Sie sicher, dass die Pulslängen ausreichend lang für die Adiabatizität sind, wobei P8 auf 3.000 Mikrosekunden eingestellt ist. Legen Sie dann die Interscan-Wiederherstellungsverzögerung D1 auf mindestens zwei Sekunden oder länger fest. Stellen Sie die Dummy-Scans auf mindestens 64 ein.
Legen Sie als Ausgangspunkt die Anzahl der Scans auf vier fest und verwenden Sie ein Vielfaches von vier, wenn das Signal-Rausch-Verhältnis zu niedrig ist. Stellen Sie O1 auf die kalibrierte Trägerfrequenz ein, O2P auf 176 ppm und kopieren Sie das O3P aus dem Protonenstickstoff-15-HSQC-Experiment. Stellen Sie nun die Impulslänge P7 auf die zuvor kalibrierte 90-Grad-Impulslänge ein.
Kopieren Sie dann den Impulsleistungspegel des 90-Grad-Impulses auf PLW3 und PLW7. Stellen Sie anschließend die Pulslängen P1 und P19 auf die 90-Grad-Protonenpulslänge ein. Legen Sie die Anzahl der Inkremente in der indirekten Dimension fest, TD entspricht L3 durch zwei mal L6. Stellen Sie als Nächstes den geformten Impuls SP5 auf eine I-BURP2-Form und die Impulslänge P15 auf 2.000 Mikrosekunden ein.
Öffnen Sie dann die Anzeige des Formwerkzeugs, indem Sie auf das E neben dem I-BURP2-förmigen Impuls im Parameterfenster der TopSpin-Impulssequenz klicken. Um den geformten Puls zu simulieren, klicken Sie auf die Schaltfläche NMR-Simulation starten. Überprüfen Sie die Länge des geformten Pulses und den Rotationswinkel im Simulationsfenster und klicken Sie auf NMR-SIM starten, um fortzufahren.
Überprüfen Sie den Anregungsbereich in der Simulation und wählen Sie die geeignete I-BURP2-Pulslänge, um die spektrale Dispersion des Protons abzudecken und gleichzeitig eine Anregung des Wassers zu vermeiden. Stellen Sie P15 auf die geformte Pulslänge aus dem Simulationsfenster mit dem besten I-BURP2-Puls ein. Stellen Sie nun SPOFFS5 ein, um die Trägerfrequenz des I-BURP2-Impulses anzupassen, und verschieben Sie den Anregungsbereich nach links oder rechts, um Störungen der Wassermagnetisierung zu vermeiden.
Öffnen Sie dann das Bruker-Formwerkzeug und klicken Sie auf NMR-Simulation starten, um die entsprechende Leistungsstufe des geformten Impulses zu bestimmen. Stellen Sie die I-BURP2-Pulslänge auf die geformte Pulslänge ein und beachten Sie die weiche rechteckige 90-Grad-Protonenpulslänge, die im Simulationsfenster angezeigt wird. Geben Sie calcpowlev ein, um die Leistungsdifferenz in Dezibel zwischen dem harten 90-Grad-Protonenpuls und dem weichen rechteckigen 90-Grad-Protonenpuls zu berechnen.
Kopieren Sie den Leistungspegel des harten 90-Grad-Protonenpulses auf SPW5 und passen Sie ihn an, indem Sie die gespeicherte Differenz in Dezibel hinzufügen. Um die Leistungsstärke des Spin-Lock zu bestimmen, berechnen Sie die entsprechende 90-Grad-Stickstoff-15-Pulslänge. Verwenden Sie calcpowlev, um den Leistungsunterschied in Dezibel zwischen der Spin-Lock-Leistung und dem harten 90-Grad-Stickstoff-15-Impuls zu berechnen.
Kopieren Sie den Leistungspegel des harten 90-Grad-Stickstoff-15-Impulses auf PLW7 und passen Sie den Spin-Lock-Leistungspegel PLW8 an, indem Sie die berechnete Leistungsdifferenz addieren. Kopieren Sie den Leistungspegel des Spin-Lock-PLW8 in die Leistungsstufen SPW8 und SPW9. Um den Leistungspegel des Stickstoff-15-Entkopplungsimpulses zu bestimmen, verwenden Sie calcpowlev, um die Leistungsdifferenz zwischen der Leistung des 90-Grad-Stickstoff-15-Entkopplungsimpulses und dem 90-Grad-Stickstoff-15-Hartimpuls zu berechnen.
Kopieren Sie den Leistungspegel des 90-Grad-Stickstoff-15-Hartimpulses PLW7 auf den Entkopplungsleistungspegel PLW31 und passen Sie ihn an, indem Sie die berechnete Leistungsdifferenz in Dezibel addieren. Zur Temperaturkompensation fügen Sie die Leitungsdefinition TEMP_ in das Impulsprogramm ein. Stellen Sie P18 auf die maximale Dauer des Spin-Locks ein, der im Stickstoff-15 R1 rho-Experiment verwendet wurde.
Im Fall von Stickstoff-15 enthalten Kohlenstoff-13-markierte Proben die Linie definiert LABEL_CN im Pulsprogramm. Stellen Sie P4 auf die berechnete Impulslänge ein. Verwenden Sie calcpowlev, um die Leistungsdifferenz in Dezibel zwischen P4 und dem harten Kohlenstoff-13-Impuls zu berechnen.
Kopieren Sie den Leistungspegel des harten Kohlenstoff-13-Impulses auf PLW4 und addieren Sie die berechnete Leistungsdifferenz in Dezibel. Kopieren Sie PLW4 nach PLW2. Um die geeigneten Relaxationsverzögerungen für die Abtastung zu bestimmen, führen Sie die ersten acht freien Induktionszerfälle (FIDs) durch und verarbeiten Sie sie.
Wählen Sie vplist-Einträge aus, bei denen die Spitzenintensität des Experiments mit der längsten Verzögerung auf mindestens eins über e, aber nicht weniger als 25 % im Vergleich zum Experiment mit der kürzesten Verzögerung abnimmt. Geben Sie rga in die Befehlszeile ein, um die Empfängerverstärkung zu bestimmen. Starten Sie einen Testlauf des Nitrogen-15 R1 rho-Experiments, indem Sie zg in die Befehlszeile eingeben.
Vergewissern Sie sich, dass das Wassersignal für alle Verzögerungen unterdrückt wird. Überprüfen Sie außerdem Inkrement neun, das zweite Inkrement des Quadraturerkennungsschemas.
