In Teilen unterstützt durch Zuschüsse der National Institutes of Health (R01 NS37253 und N01 NS055167) und der National Multiple Sclerosis Society (RG 3288-A6).

1. Vorbereiten CFA-emulgierten Antigen <ol><li> Meerschweinchen-MBP gelöst (hergestellt nach dem Verfahren von Swanborg1 und in lyophilisierter Form bei 4 ° C) in Phosphatpuffer (PBS) in einer Konzentration von 2 mg / ml. Wenn synthetisiert MBP-Peptiden (MBP 60-80, SHHAARTTHYGSLPQKSQR) 2 verwendet werden, Herstellung einer 2 mg / ml Lösung. Erstellen Sie eine angemessene Menge an Antigen-Lösung (0,1 ml pro Maus immunisiert werden) in ein Glas Spritze mit Luer-Lok. </li><li> Malen ein Volumen von komplettem Freund-Adjuvans H37Ra (0,1 Gew.%) (CFA, Difco Laboratories) gleich der Antigen-Lösung in ein anderes Glas Spritze mit Luer-Lock versehen. </li><li> Verbinden Sie die beiden Glasspritzen mit einem Drei-Wege-Hahn. Mischen der Lösung mit dem MBP CFA, indem die Kolben hin und her. Halten Sie die Bewegung, bis eine Emulsion entsteht. </li><li> Um zu testen ob eine Emulsion bilden, schieben Sie die gesamte Mischung in eine Spritze. Trennen Sie die leere Spritze, ziehen ter Kolben etwas zurück, und entladen Sie einen Tropfen der restliche Emulsion in ein Becherglas mit sauberem Wasser bei Raumtemperatur. Wenn die Emulsion Tropfen intakt bleibt auf der Oberfläche des Wassers wird eine Emulsion gebildet wird. Wenn die Emulsion Tropfen verteilt, schließen Sie die Spritzen und setzen Sie die Mischbewegung. </li><li> Verwenden Sie eine 1 ml Kunststoff-Spritze für die Immunisierung Prozess bis zur Auslieferung einer genauen Dosis von Antigen zu gewährleisten. Um die Antigen-Emulsion auf die Kunststoff-Spritze zu übertragen, ziehen Sie den Kolben und setzen Sie die leere Kunststoff-Spritze in die Öffnung des Drei-Wege-Hahn, wo die vorherige Glasspritze wie in 1,4 getrennt wurde. </li><li> Füllen Sie den Kunststoff-Spritze an den Rand, indem Sie den Kolben der Spritze Glas. Legen Sie den Kolben der Spritze zurück und Kunststoff zurückzudrängen überschüssige Emulsion bis zum Erreichen der 1,2 ml-Marke auf dem Kunststoff-Spritze. Dieses Manöver stellt sicher, dass keine Luftblase im Inneren der Kunststoff-Spritze ist gefangen. </li><li> Entfernen Sie die Kunststoff-Spritze aus dem Dreiwegehahn. Attach ein # 26-Gauge-Nadel auf die Kunststoff-Spritze. Drücken Sie den Kolben bis zur 1-ml-Marke, so dass die Emulsion jetzt füllt das Hohlraumvolumen der Nadel. </li></ol> 2. Die Immunisierung von Mäusen Donor Hinweis: Weibliche C57BL / 6 Mäuse sind in der Regel mit Antigen-Emulsion in vier Standorten in den Flanken injiziert, nach den Methoden ursprünglich von McFarlin der Gruppe 3 an den National Institutes of Health entwickelt. Für einen erfahrenen Untersucher kann eine Person führen Sie die ganze Aufgabe. Für Anfänger kann Hilfe erbeten, so dass eine Person die Maus hält und die andere Person tut der Injektion. Alternativ kann die Maus in Narkose für die Injektion. <ol><li> Halten Sie die Maustaste fest am Hals Haut und halten den Schwanz wieder zwischen den 4 und 5. Finger, so dass die Thorax und Abdomen leicht zugänglich sind. </li><li> Stecken Sie die Nadel der Spritze 1 ml Kunststoff an einem Standort in den Brustkorb leicht über dem rechten Achselhöhle (der moverwenden) und injizieren 0,05 ml des Antigens Emulsion subkutan. Eine kleine Ausbuchtung der weißlich CFA kann durch die blasse Haut zu sehen. Wiederholen Sie das gleiche für den Standort in den Brustkorb etwas oberhalb der linken Achselhöhle. </li><li> Lassen Sie den Schwanz und nehmen von dem rechten Fuß (der Maus) zu halten, drehen Sie ihn und halten ihn zwischen dem 4. und 5. Finger. Suchen Sie die Stelle knapp unterhalb der Rippe Fall in der rechten Flanke und injizieren 0,05 ml der Antigen-Emulsion. </li><li> Lassen Sie den rechten Fuß, Drehen Sie die Maus in die andere Richtung und halten Sie den linken Fuß (der Maus) zwischen dem 4. und 5. Finger. Suchen Sie die Stelle knapp unterhalb der Rippe Fall in der linken Flanke und injizieren 0,05 ml der Antigen-Emulsion. </li><li> Wechseln zu einem frischen Nadel nach der Injektion von 10 Mäusen, oder wenn die Nadel wird abgestumpft. </li></ol> 3. Isolierung von Lymphknotenzellen für Tissue Culture 7 bis 10 Tage nach der Immunisierung <ol><li> Sieben bis 10 Tage nach der Immunisierung, opfern die Mäuseund entfernen Sie die Lymphknoten. Die bevorzugte Methode der Euthanasie ist durch CO 2-Inhalation. Nach der Tötung der Maus lag auf dem Rücken auf einem Brett mit Dissektion die Gliedmaßen ausgestreckt und an der Tafel mit Stiften. Die Mäuse werden mit einem Spray aus 70% Ethanol angefeuchtet. </li><li> Einen Schlitz in der Haut in Längsrichtung in der Mitte von dem unteren Ende des Bauches bis unter das Kinn mit einer sterilen Schere und Pinzette. </li><li> Schneiden des Bauches Haut vor dem Bereich der Leiste auf jedem Bein. Ziehen Sie festzunageln und die Haut, das Aussetzen der inguinalen Lymphknoten. </li><li> Schneiden Sie die Haut entlang der Vordergliedmaßen (links und rechts), so dass die Haut wieder abgezogen werden kann und bis in die axillären Lymphknoten in der Nähe der Achselhöhle merken sich aussetzen. </li><li> Mit zwei Paar Zangen zusammenarbeiten, wegzuziehen das Bindegewebe bedeckt und um die inguinalen Lymphknoten. Wenn das Bindegewebe gelöscht werden, legen Sie ein Pinzette unter der Lymphknoten und ziehen weg vom Körper. Legen Sie dieLymphknoten in einer 35 mm Petrischale mit sterilem PBS gefüllt. </li><li> Ziehen Sie die Bindegewebe, die in beiden Achsel-Lymphknoten Betrieb von zwei Pinzetten. Isolieren Sie die Lymphknoten und legen Sie sie in der Petrischale. Seien Sie sehr vorsichtig, um nicht die Blutgefäße über den Bereich, wie Blutungen Identifizierung der Lymphknoten sehr schwierig macht zu brechen. </li><li> Nachdem alle Lymphknoten gesammelt werden, bewegen Sie die Petrischale auf einem Bio Kapuze. Break und necken die Lymphknoten auseinander mit den beiden Paaren von Zangen, Schleifen einen gegen den anderen. Alternativ können die Lymphknoten von mit dem flachen Ende des Kolbens von einer 3 ml Kunststoffspritze Drücken gegen die Lymphknoten auf dem Boden der Petrischale gebrochen werden. </li><li> Übergeben der neckte Lymphknoten Zellsuspension durch ein Nylonnetz der Membrane und Trümmer zu entfernen. </li><li> Make-up den Lymphknoten Zellsuspension auf 50 ml mit sterilem PBS. Zentrifugieren bei 1000 rpm für 10 Minuten. Das Pellet in Kulturmedium. Führen Sie eine tragfähige cell zu zählen und stellen Sie die Konzentration auf 4 x 10 6 Zellen / ml. UseRPMI 1640 mit 10% fötalem Kälberserum, 2 mM L-Glutamin, 1 mM MEM Natriumpyruvat, 0,1 mM MEM nicht-essentielle Aminosäuren, 100 U / ml Penicillin, 100 ug / ml Streptomycin, 10 mM Hepes-Puffer und 5 x ergänzt 10 -5 M 2-ME. Pre-warm die Kultur vor dem Resuspendieren der Zellen. </li><li> Kultur die Zellen in 24-well-Platten mit 2 ml pro Well (Endzellkonzentration 8 x 10 6 Zellen / Vertiefung). In Antigen zu jeder Vertiefung in einer Endkonzentration von 100 ug / ml. Legen Sie die Platte in einer Kultur 37 ° C Inkubator mit 5% CO 2. Inkubieren Zellen für 5 Tage. </li></ol> 4. Ernte Cultured Lymphknotenzellen 5 Tage nach Beginn der Kulturen <ol><li> Mischen Sie die Zellen in jeder Vertiefung durch Auf-und Abpipettieren mit einer Pasteur-Glaspipette oder einem kleinen Volumen Pipette. Ernten der Zellen in ein 50 ml Zentrifugenröhrchen. </li><li> Zentrifugation der Zellen bei 1000 UpM für 10 Minuten. Resuspend das Zellpellet in einem kleinen Volumen von PBS. </li><li> Zählen von Zellen und stellen Sie die Lebendzellkonzentration bis 2,5 x 10 8 Zellen / ml mit sterilem PBS. Zeichnen Sie die Zellen in eine Spritze mit einem # 26-Gauge-Nadel ausgestattet. </li><li> Legen Sie eine Wärmelampe über den Käfig des Empfängers Mäusen zu helfen, erweitern sich die Schwanzvene. </li><li> Mit einem Maus-Halter, erweitern den Schwanz der Maus durch den Schlitz in der Halterung. Ziehen Sie den Schwanz zu verlängern. Suchen Sie die Vene. </li><li> Spritzen 0,2 ml / Maus der Zellsuspension, die gleich 5 x 10 7 Zellen. </li></ol> 5. Antigen-Challenge von Empfängermäuse 20 Tage nach Zell Transfer und die Entwicklung von Krankheitssymptomen <ol><li> Challenge-Empfänger Mäuse keine Anzeichen von Krankheit mit dem Antigen. Die Verfahren sind die gleichen wie bei Abschnitt 2 &quot;Immunisierung von Spender Mäuse&quot;. </li><li> Beobachten Sie die Entwicklung der paralytischen Erkrankung von 7 bis 10 Tage nach antigene Herausforderung. <ol><li> Krankheit beginnt mit Schwäche in den Schwanz. Krankheit wird als 1 benotetwenn der Schwanz wird schlaff. Krankheit wird als 2 eingestuft, wenn die Maus in einer hinteren Extremität gelähmt ist. Krankheit wird 3 benotet, wenn beide Hinterbeine gelähmt sind und die Maus zieht beide Hinterbeine beim Crawlen nach vorn. Krankheit wird 4 benotet, wenn die Maus verliert Einsatz beider Vorderbeine, so dass die Maus völlig unbeweglich. Krankheit wird 5 benotet, wenn die Maus ist moribund und der Körper rollt sich zusammen. Der Tod wird als Krankheit Klasse 6 4 erzielte. </li></ol></li><li> MBP-spezifischen EAE in C57BL / 6 Mäusen nach diesem Protokoll induzierte einphasig ist. Die Mäuse können von der Krankheit genesen, aber nicht unterziehen spontane Rückfälle. </li></ol> 6. Repräsentative Ergebnisse Mäuse, die empfangen grundiert und in vitro-expandierten Spender Lymphknotenzellen entwickelten keine EAE Krankheitssymptome, was ihre Widerstandsfähigkeit gegen Krankheiten Induktion. Jedoch schwere Erkrankung nach Antigen-Challenge (Tabelle I), entwickelt, was die Fähigkeit der Antigen-Challengebei der Umkehrung der Resistenzmechanismus. Zwei Besonderheiten des antigenen Herausforderung beachten sind die Dosen des Antigens und die Kinetik der Herausforderung, Krankheit auszulösen. Sehr niedrige Dosis des Antigens erforderlich ist, wie in Tabelle III gezeigt. Überraschenderweise konnten Mäuse, die Spenderzellen erhielt ein Jahr zuvor noch eine schwere Krankheit, wenn mit dem Antigen (Tabelle IV) in Frage gestellt. Diese beiden Beobachtungen lassen aber auf die Einbeziehung von &quot;langlebigen&quot; T-Zellen bei der Aufrechterhaltung EAE Widerstand. Dieses Protokoll gilt auch für viele EAE resistent Mausstämmen 4. <img alt="Abbildung 1." src="/files/ftp_upload/3778/3778fig1.jpg" /> Abbildung 1. Flussdiagramm der experimentellen Design für die Induktion von EAE in renommierten beständig Mausstämmen. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Klinische EAE nach dem adoptiven Transfer </td><td colspan="3"><strong&gt; Klinische EAE nach antigene Herausforderung </td></tr><tr><td> Belasten </td><td> Antigen </td><td> Häufigkeit </td><td> Av. Krankheit Klasse (Bereich) </td><td> Av. Tag Einsetzen (Bereich) </td><td> Häufigkeit </td><td> Av. Krankheit Klasse (Bereich) </td><td> Av. Tag Einsetzen (Bereich) </td></tr><tr><td> SJL </td><td> MBP </td><td> 21/21 </td><td> 4.0 (3-5) </td><td> 8.0 (6-10) </td><td> ND </td><td> ND </td><td> ND </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> MBP </td><td> 0/10 </td><td> - </td><td> - </td><td> 7/7 </td><td> 3.85 (3-5) </td><td> 9.28 (9-10) </td></tr><tr><td> Balb / c </td><td> MBP </td><td> 0/7 </td><td> - </td><td> - </td><td> 5/5 </td><td> 3.2 (3-4) </td><td> 7.0 (7) </td></tr><tr><td> C3H/HeJ </td&gt; <td> MBP </td><td> 0/7 </td><td> - </td><td> - </td><td> 4/4 </td><td> 3.2 (3-4) </td><td> 8.0 (8) </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> MBP 60-80 </td><td> 0/4 </td><td> - </td><td> - </td><td> 4/4 </td><td> 2.75 (2-4) </td><td> 10.2 (9-11) </td></tr></tbody></table> Tabelle I. Induktion von MBP-vermittelte EAE in C57BL / 6 Mäusen. Adoptiven Transfer von grundiert und in vitro-expandierten Spenderzellen induzierte keine EAE in C57Bl / 6 Mäusen. Antigene Herausforderung Post Zell-Transfer gemacht, die Mäuse anfällig für Krankheiten Induktion. Av., Durchschnittlich. ND, nicht getan. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Klinische EAE nach antigene Herausforderung </td></tr><tr><td> Priming Antigen </td><td> Challenge-Antigen </td><td> Häufigkeit </td><td> Av. Krankheit Klasse (Bereich)</td><td> Av. Tag Einsetzen (Bereich) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> CFA allein </td><td> 0/3 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> OVA-CFA </td><td> 0/3 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> MBP-CFA </td><td> 3/3 </td><td> 4.0 (4.0) </td><td> 7.7 (7-9) </td></tr></tbody></table> Tabelle II. Spezifität der Antigen-Herausforderung. Empfänger-Mäuse wurden mit der Priming-Antigen sowie andere irrelevante Antigene in Frage gestellt. Nur die Priming-Antigen schwere Erkrankung induziert. OVA: Hühner-Ovalbumin. Av., Durchschnittlich. <table border="1"><tbody&gt; <tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Klinische EAE nach antigene Herausforderung </td></tr><tr><td> Challenge-Antigen-Dosen (ug / Maus) </td><td> Häufigkeit </td><td> Av. Krankheit Klasse (Bereich) </td><td> Av. Tag Einsetzen (Bereich) </td></tr><tr><td> 200 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 8.25 (7-9) </td></tr><tr><td> 100 </td><td> 4/4 </td><td> 3.67 (3-4) </td><td> 7.5 (7-8) </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 4/4 </td><td> 3.25 (3-4) </td><td> 8.25 (7-10) </td></tr><tr><td> 25 </td><td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.25 (8-9) </td></tr><tr><td> 10 </td><td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.76 (8-9) </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 4/4 </td><td> 2.5 (2-3) </td><td> 9.75 (9-10) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2/4 </td><td> 1.0 (1.0) </td><td&gt; 16 (14-18) </td></tr><tr><td> 0 </td><td> 0/4 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle III. Challenge-Antigen-Dosen für die Induktion der Krankheit erforderlich ist. Verschiedene Konzentrationen von MBP verwendet werden, um Empfängermäuse herausfordern wurden getestet. Av., Durchschnittlich. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Klinische EAE nach antigene Herausforderung </td></tr><tr><td> Challenge-Antigen </td><td> Tag der Challenge- </td><td> Häufigkeit </td><td> Av. Disease Klasse (Bereich) </td><td> Av. Tag des Beginns (Bereich) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 5 </td><td> 3/4 </td><td> 1.33 (1-2) </td><td> 9.67 (9-10) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 10 </td&gt; <td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.25 (7-9) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 15 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 7.25 (7-8) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 25 </td><td> 4/4 </td><td> 4.0 (4.0) </td><td> 8.0 (7-9) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 35 </td><td> 4/4 </td><td> 3.5 (3-4) </td><td> 7.5 (7-8) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 60 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 9.0 (8-10) </td></tr><tr><td colspan="5"> -------------------------- </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 343 </td><td> 3/3 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 10.33 (10-11) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 445 </td><td> 3/3 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 7.0 (7.0) </td></tr></tbody></table> Tabelle IV. Kinetik der Antigen-Herausforderung. Empfänger Mäuse wurden zu verschiedenen Zeitpunkten nach Punkt herausgefordert verabschiedenIVE-Zell-Transfer. Av., Durchschnittlich.

<ol>
	<li>Swanborg, R. H., Sabato, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+allergic+encephalomyelitis.">Experimental allergic encephalomyelitis.</a> Methods in Enzymology. 162, 413-421 (1988).</li><li>Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+myelin+basic+protein-specific+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice:+Mapping+of+T+cell+epitopes+and+T+cell+Vb+gene+segment+usage.">Induction of myelin basic protein-specific experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice: Mapping of T cell epitopes and T cell Vb gene segment usage.</a> J. Neuroscience Research. 45, 690-699 (1996).</li><li>McCarron, R., McFarlin, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptively+transferred+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+SJL/J,+PL/J,+and+(SJL/J+x+PL/J)F1+mice.+Influence+of+I-A+haplotypes+on+encephalitogenic+epitope+of+myelin+basic+protein.">Adoptively transferred experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL/J, PL/J, and (SJL/J x PL/J)F1 mice. Influence of I-A haplotypes on encephalitogenic epitope of myelin basic protein.</a> J. Immunol. 141, 1143-1149 (1988).</li><li>Shaw, M. K., Kim, C., Ho, K. -. L., Lisak, R. P., Tse, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+adoptive+transfer+and+antigenic+challenge+induces+consistent+murine+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice+and+other+reputed+resistant+strains.">A combination of adoptive transfer and antigenic challenge induces consistent murine experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice and other reputed resistant strains.</a> J. Neuroimmunol. 39, 139-150 (1993).</li><li>Krishnamoorthy, G., Saxena, A., Mars, L. T., Domingues, H. S., Mentele, R., Ben-Nun, A., Lassmann, H., Dornmair, K., Kurschus, F. C., Liblau, R. S., Wekerle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin-specific+T+cells+also+recognize+neuronal+autoantigen+in+a+transgenic+mouse+model+of+multiple+sclerosis.">Myelin-specific T cells also recognize neuronal autoantigen in a transgenic mouse model of multiple sclerosis.</a> Nat. Med. 15, 626-632 (2009).</li><li>Anderson, A. C., Reddy, J., Nazareno, R., Sobel, R. A., Nicholson, L. B., Kuchroo, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-10+plays+an+important+role+in+the+homeostatic+regulation+of+the+autoreactive+reperteroire+in+na&#239;ve+mice.">IL-10 plays an important role in the homeostatic regulation of the autoreactive reperteroire in na&#239;ve mice.</a> J. Immunol. 173, 828-834 (2004).</li><li>Anderton, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treg+and+T-effector+cells+in+autoimmune+CNS+inflammation:+a+delicate+balance+easily+disturbed.">Treg and T-effector cells in autoimmune CNS inflammation: a delicate balance easily disturbed.</a> Eur. J. Immunol. 40, 332-334 (2010).</li><li>Arnon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+allergic+encephalomyelitis+-+susceptibility+and+suppression.">Experimental allergic encephalomyelitis - susceptibility and suppression.</a> Immunol. Rev. 55, 5 (1981).</li><li>Billiau, A., Heremans, H., Vandekerckhove, F., Dijkmans, R., Sobis, H., Meulepas, E., Carton, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+experimental+allergic+encephalomyelitis+in+mice+by+antibodies+against+IFN-g.">Enhancement of experimental allergic encephalomyelitis in mice by antibodies against IFN-g.</a> J. Immunol. 140, 1506-1510 (1988).</li><li>Arbomson-Leeman, S., Alexander, J., Bronson, R., Corroll, J., Southwood, S., Dorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+encephalomyelitis-resistant+mice+have+highly+encephalitogenic+myelin+basic+protein+(MBP)-specific+T+cell+clones+that+recognize+a+MBP+peptide+with+high+affinity+for+MHC+class+II.">Experimental autoimmune encephalomyelitis-resistant mice have highly encephalitogenic myelin basic protein (MBP)-specific T cell clones that recognize a MBP peptide with high affinity for MHC class II.</a> J. Immunol. 154, 388-398 (1995).</li><li>Reddy, J., Illes, Z., Zhang, X., Encinas, J., Nicholson, L., Sobel, R. A., Wucherpfennig, K. W., Kuchroo, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin+proteolipid+protein-specific+CD4+CD25++regulatory+cells+mediate+genetic+resistance+to+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Myelin proteolipid protein-specific CD4+CD25+ regulatory cells mediate genetic resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 15434-15439 (2004).</li><li>Korn, T., Reddy, J., Gao, W., Bettelli, E., Awasthi, A., Petersen, T. R., Backstrom, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin-+specific+regulatory+T+cells+accumulate+in+the+CNS+but+fail+to+control+autoimmune+inflammation.">Myelin- specific regulatory T cells accumulate in the CNS but fail to control autoimmune inflammation.</a> Nature Med. 13, 423-431 (2007).</li><li>Shaw, M. K., Li, J., Ho, P. P., Hao, H., Lisak, R. P., Tse, H. Y., Broglie, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+myelin+basic+protein-specific+adoptive+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice.+Longevity+of+donor+T+cells+and+lack+of+disease+relapses.">Induction of myelin basic protein-specific adoptive experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice. Longevity of donor T cells and lack of disease relapses.</a> Neuroimmunology Research Focus. , 175-191 (2007).</li></ol>

Keine finanzielle Angaben.

Studien von EAE in Mäusen verwenden oft die neuroantigens, Myelin-basisches Protein (MBP), Proteolipidprotein (PLP) oder von Myelin Oligodendrozyten Protein (MOG). Frühere Studien meist MBP verwendet. PLP stimuliert die starke und konsistente Antworten von SJL-Mäusen. In jüngerer Zeit ist der gemeinsame MOG Neuroantigen verwendet, weil B6-Mäuse anfälliger für Krankheiten Induktion mit diesem Antigen sind. Viele der gezielten Gen-Maus-Stämme sind auf der B6 genetischen Hintergrund. Interessanterweise sind B6-Mäu...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Meerschweinchen-Rückenmark </td><td> Rockland Immuno-Chemicals, Inc. Gilbertsville, PA 19525 <a href="http://www.rockland-inc.com" target="_blank">www.rockland-inc.com</a> </td><td> GP-T065 </td><td> eingefroren </td></tr><tr><td> Freundsches Adjuvans, komplett H37Ra </td><td> Difco Laboratories Detroit, MI </td><td> 231131 </td><td></td></tr><tr><td> Multifit-Austausch in der Lage Spritze </td><td> BD <a href="http://www.bd.com/us" target="_blank">www.bd.com / uns</a> </td><td> 512133 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> MediatechInc. Manassas, VA <a href="http://www.cellgro.com" target="_blank">www.cellgro.com</a> </td><td> 10-040-CM </td><td></td></tr><tr><td> OVA </td><td> Sigma-Aldrich <a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank">www.sigmaaldrich.com</a> </td><td> A5503 </td><td></td></tr><tr><td> Mäuse </td><td> Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine </td><td> B6-Mäuse: 0000664 </td><td></td></tr></tbody></table>

overcoming unresponsiveness in experimental autoimmune encephalomyelitis (eae) resistant mouse strains by adoptive transfer and antigenic challenge

Experimentelle Autoimmun-Enzephalomyelitis (EAE) ist eine entzündliche Erkrankung des zentralen Nervensystems (CNS) und hat als Tiermodell für die Untersuchung des menschlichen demyelinisierende Krankheit, Multiple Sklerose (MS) verwendet. EAE wird durch pathologische Infiltration von mononukleären Zellen in das ZNS und durch klinische Manifestation der paralytischen Erkrankung gekennzeichnet. Ähnlich wie bei MS, ist EAE auch unter genetischer Kontrolle, dass bestimmte Mausstämme sind anfällig für Krankheiten Induktion während andere resistenter sind. Typischerweise C57BL / 6 (H-2 b) Mäusen, die mit Myelin basisches Protein immunisiert (MBP) scheitern zu Lähmungserscheinungen entwickeln. Diese Teilnahmslosigkeit ist sicherlich nicht aufgrund von Mängeln an der Antigen-Verarbeitung oder die Antigen-Präsentation von MBP, als eine experimentelle hier beschriebene Protokoll verwendet worden war, um schwere EAE in C57BL / 6 Mäusen sowie anderen renommierten beständig Mausstämmen zu induzieren. Darüber hinaus hatte enzephalitogener T-Zell-Klone aus C57BL / 6 und Balb / c-Mäusen reaktiv MBP Erfolgvoll isoliert und vermehrt. Das experimentelle Protokoll beinhaltet die Verwendung eines zellulären adoptiven Transfer, bei dem MBP-geprimten (200 ug / Maus) C57BL / 6 Donor Lymphknotenzellen isoliert und kultiviert für fünf Tage mit dem Antigen, um den Pool von MBP-spezifischen T-Zellen zeigen. Am Ende der Kulturzeit, werden 50 Millionen lebensfähige Zellen in naive syngene-empfänger über die Schwanzvene übertragen. Empfängermäuse so behandelt in der Regel nicht entwickeln EAE, so Bekräftigung ihrer Resistenz, und sie können normal bleiben auf unbestimmte Zeit. Zehn Tage nach der Zellübertragung werden Empfängermäuse mit komplettem Freund-Adjuvans (CFA) emulgiert-MBP in vier Stellen in den Flanken in Frage gestellt. Schwere EAE beginnt, sich in diesen Mäusen zehn bis vierzehn Tage nach der Herausforderung zu entwickeln. Die Ergebnisse zeigten, dass die Induktion von antigen spezifische Krankheit war, als Herausforderung, nicht mit irrelevanten Antigenen induzieren habe klinischen Anzeichen einer Krankheit. Bezeichnenderweise eine Titration des Antigen-Dosis verwendetfordern die Empfänger Mäusen zeigten, dass es sein könnte so niedrig wie 5 pg / Maus. Darüber hinaus zeigte die Untersuchung der Kinetik der Zeitpunkt der Antigen-Challenge, dass Herausforderung Krankheit zu induzieren wirksam war bereits nach 5 Tagen nach der Antigen-Challenge und solange über 445 Tage nach der Antigen-Challenge. Diese Daten weisen auf stark die Beteiligung eines &quot;langlebigen&quot; T-Zell-Population bei der Aufrechterhaltung Teilnahmslosigkeit. Die Beteiligung von regulatorischen T-Zellen (Tregs) in diesem System ist nicht definiert.

Watch this Scientific Journal Video about Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge at JoVE.com

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Bestimmte Maus-Stämme sind in der Lage, die Induktion der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) mit Myelin basisches Protein zu widerstehen. Hier beschriebene ist ein einfaches Protokoll, das die Immunisierung Teilnahmslosigkeit umkehrt und induziert paralytischen Erkrankung in mehreren typischen EAE resistent Maus Flecken.

Die Überwindung der nicht mehr reagiert, in der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) Beständig Mausstämmen durch adoptiven Transfer-und Antigen-Challenge

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

overcoming-unresponsiveness-experimental-autoimmune-encephalomyelitis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

20.2K Aufrufe.  St. John-Providence Health System. Bestimmte Maus-Stämme sind in der Lage, die Induktion der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) mit Myelin basisches Protein zu widerstehen. Hier beschriebene ist ein einfaches Protokoll, das die Immunisierung Teilnahmslosigkeit umkehrt und induziert paralytischen Erkrankung in mehreren typischen EAE resistent Maus Flecken.

Serie: Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into mouse tail veins and colonize in the lungs, thereby, resembling the last steps of tumor cell spontaneous metastasis: survival in the circulation, extravasation and colonization in the distal organs. From a therapeutic point of view, the experimental metastasis model is the simplest and ideal model since the target of therapies is often the end point of metastasis: established metastatic tumor in the distal organ. In this model, tumor cells are injected i.v into mouse tail veins and allowed to colonize and grow in the lungs. Tumor-specific CTLs are then injected i.v into the metastases-bearing mouse. The number and size of the lung metastases can be controlled by the number of tumor cells to be injected and the time of tumor growth. Therefore, various stages of metastasis, from minimal metastasis to extensive metastasis, can be modeled. Lung metastases are analyzed by inflation with ink, thus allowing easier visual observation and quantification.

An experimental lung metastasis and CTL immunotherapy mouse model for analysis of tumor cells-T cell interaction in vivo.

Experimentelle Metastasierung und CTL adoptiven Transfer Immuntherapie Maus-Modell

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

Induktion der experimentellen autoimmunen Hypophysitis in SJL Mäuse

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of human Type 1 diabetes (T1D). Cell transfer studies in irradiated recipient mice have established that T cells are pivotal in T1D pathogenesis in this model. We describe herein a simple method to rapidly induce T1D by adoptive transfer of purified, primary CD4+ T cells from pre-diabetic NOD mice transgenic for the islet-specific T cell receptor (TCR) BDC2.5 into NOD.SCID recipient mice. The major advantages of this technique are that isolation and adoptive transfer of diabetogenic T cells can be completed within the same day, irradiation of the recipients is not required, and a high incidence of T1D is elicited within 2 weeks after T cell transfer. Thus, studies of pathogenesis and therapeutic interventions in T1D can proceed at a faster rate than with methods that rely on heterogenous T cell populations or clones derived from diabetic NOD mice.

We provide a reproducible method to induce type 1 diabetes (T1D) in mice within two weeks by the adoptive transfer of islet antigen-specific, primary CD4+ T cells.

Accelerated Typ 1 Diabetes Induktion in Mäusen durch adoptiven Transfer von CD4 + T diabetogene Cells

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While the exact etiology of the disease is yet unclear, autoreactive T lymphocytes are thought to play a central role in its pathophysiology. MS therapy is only partially effective so far and research efforts continue to expand our knowledge on the pathophysiology of the disease and to develop novel treatment strategies. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model for MS sharing many clinical and pathophysiological features. There is a broad diversity of EAE models which reflect different clinical, immunological and histological aspects of human MS. Actively-induced EAE in mice is the easiest inducible model with robust and replicable results. It is especially suited for investigating the effects of drugs or of particular genes by using transgenic mice challenged by autoimmune neuroinflammation. Therefore, mice are immunized with CNS homogenates or peptides of myelin proteins. Due to the low immunogenic potential of these peptides, strong adjuvants are used. EAE susceptibility and phenotype depends on the chosen antigen and rodent strain. C57BL/6 mice are the commonly used strain for transgenic mouse construction and respond among others to myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG). The immunogenic epitope MOG35-55 is suspended in complete Freund's adjuvant (CFA) prior to immunization and pertussis toxin is applied on the day of immunization and two days later. Mice develop a "classic" self-limited monophasic EAE with ascending flaccid paralysis within 9-14 days after immunization. Mice are evaluated daily using a clinical scoring system for 25-50 days. Special considerations for care taking of animals with EAE as well as potential applications and limitations of this model are discussed.

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an established animal model of multiple sclerosis. C57BL/6 mice are immunized with myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) peptide 35-55 (MOG35-55), resulting in an ascending flaccid paralysis caused by autoreactive immune cells in the central nervous system. Protocols for disease induction and monitoring will be discussed.

Myelin Oligodendrozyten Glykoprotein (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induzierten experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) in C57BL / 6 Mäuse

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages and disadvantages. We describe here an experimental colitis model that is initiated by adoptive transfer of syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipient mice. The CD4+CD45RBhigh T cell population that largely consists of na&#239;ve effector cells is capable of inducing chronic intestinal inflammation, closely resembling key aspects of human IBD. This method can be manipulated to study aspects of disease onset and progression. Additionally it can be used to study the function of innate, adaptive, and regulatory immune cell populations, and the role of environmental exposures, i.e., the microbiota, in intestinal inflammation. In this article we illustrate the methodology for inducing colitis with a step-by-step protocol. This includes a video demonstration of key technical aspects required to successfully develop this murine model of experimental colitis for research purposes.

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.

Die Induktion von Murine Darmentzündungen durch adoptiven Transfer von Effektor CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hoch</sup&gt; T-Zellen in immundefizienten Mäusen

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) resulting in cognitive and motor impairment. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a useful animal model of MS, because it is also characterized by lesion formation in the CNS, motor impairment and is also driven by autoimmune and inflammatory reactions. One of the EAE models is induced with a peptide derived from the myelin oligodendrocyte protein (MOG)35-55 in mice. The EAE mice develop a progressive disease course. This course is divided into three phases: the preclinical phase (day 0 - 9), the disease onset (day 10 - 11) and the acute phase (day 12 - 14). MS and EAE are induced by autoreactive T cells that infiltrate the CNS. These T cells secrete chemokines and cytokines which lead to the recruitment of further immune cells. Therefore, the immune cell distribution in the spinal cord during the three disease phases was investigated. To highlight the time point of the disease at which the activation/proliferation/accumulation of T cells, B cells and monocytes starts, the immune cell distribution in lymph nodes, spleen and blood was also assessed. Furthermore, the levels of several cytokines (IL-1&#946;, IL-6, IL-23, TNF&#945;, IFN&#947;) in the three disease phases were determined, to gain insight into the inflammatory processes of the disease. In conclusion, the data provide an overview of the functional profile of immune cells during EAE pathology.

This manuscript describes the methods for induction and scoring of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, together with the assessment of immune cell distribution and mRNA cytokine levels in lymph nodes, spleen, blood and spinal cord using flow cytometry and quantitative PCR, respectively, at various disease phases.

Die Induktion der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis bei Mäusen und die Auswertung des Krankheitsabhängige Verteilung von Immunzellen in verschiedenen Geweben

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses targeting myelin. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model of CNS autoimmune disease, and is typically induced via immunization with short peptides representing immunodominant CD4+ T cell epitopes of myelin proteins. However, B cells recognize unprocessed protein directly, and immunization with short peptide does not activate B cells that recognize the native protein. As recent clinical trials of B cell-depleting therapies in MS have suggested a role for B cells in driving disease in humans, there is an urgent need for animal models that incorporate B cell-recognition of autoantigen. To this end, we have generated a new fusion protein containing the extracellular domain of the mouse version of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) as well as N-terminal fusions of a His-tag for purification purposes and the thioredoxin protein to improve solubility (MOGtag). A tobacco etch virus (TEV) protease cleavage site was incorporated to allow the removal of all tag sequences, leaving only the pure MOG1-125 extracellular domain. Here, we describe a simple protocol using only standard laboratory equipment to produce large quantities of pure MOGtag or MOG1-125. This protocol consistently generates over 200 mg of MOGtag protein. Immunization with either MOGtag or MOG1-125 generates an autoimmune response that includes pathogenic B cells that recognize the native mouse MOG.

We describe a simple protocol using only basic lab equipment to generate and purify large quantities of a fusion protein that contains mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein. This protein can be used to induce experimental autoimmune encephalomyelitis driven by both T and B cells.

Einfache und effiziente Herstellung und Reinigung von Maus-Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein für experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis Studies

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with embedded pericytes, and the glia limitans composed by the parenchymal basement membrane and astrocytic end-feed embracing the abluminal aspect of central nervous system (CNS) microvessels. In addition to maintaining CNS homeostasis the NVU controls immune cell trafficking into the CNS. During immunosurveillance of the CNS low numbers of activated lymphocytes can cross the endothelial barrier without causing BBB dysfunction or clinical disease. In contrast, during neuroinflammation such as in multiple sclerosis or its animal model experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) a large number of immune cells can cross the BBB and subsequently the glia limitans eventually reaching the CNS parenchyma leading to clinical disease. 
Immune cell migration into the CNS parenchyma is thus a two-step process that involves a sequential migration across the endothelial and glial barrier of the NVU employing distinct molecular mechanisms. If following their passage across the endothelial barrier, T cells encounter their cognate antigen on perivascular antigen-presenting cells their local reactivation will initiate subsequent mechanisms leading to the focal activation of gelatinases, which will enable the T cells to cross the glial barrier and enter the CNS parenchyma. Thus, assessing both, BBB permeability and MMP activity in spatial correlation to immune cell accumulation in the CNS during EAE allows to specify loss of integrity of the endothelial and glial barriers of the NVU. 
We here show how to induce EAE in C57BL/6 mice by active immunization and how to subsequently analyze BBB permeability in vivo using a combination of exogenous fluorescent tracers. We further show, how to visualize and localize gelatinase activity in EAE brains by in situ zymogaphy coupled to immunofluorescent stainings of BBB basement membranes and CD45+ invading immune cells.

Here, we present protocols to investigate impairment of the neurovascular unit during experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo. We specifically address how to determine blood-brain barrier permeability and gelatinase activity involved in leukocyte migration across the glia limitans.&#160;

Beeinträchtigung der Endothelzellen und glialen Barrieren des Referats neurovaskuläre während experimentelle Autoimmune Enzephalomyelitis In Vivo Visualisierung

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T (iNKT) cells. Patients with active RA present fewer iNKT cells, defective cell function, and excessive polarization of Th1. In this study, an RA animal model was established using a mixture of hGPI325-339 and hGPI469-483 peptides. The iNKT cells were obtained by in vivo induction and in vitro purification, followed by infusion into RA mice for adoptive immunotherapy. The in vivo imaging system (IVIS) tracking revealed that iNKT cells were mainly distributed in the spleen and liver. On day 12 after cell therapy, the disease progression slowed down significantly, the clinical symptoms were alleviated, the abundance of iNKT cells in the thymus increased, the proportion of iNKT1 in the thymus decreased, and the levels of TNF-&#945;, IFN-&#947;, and IL-6 in the serum decreased. Adoptive immunotherapy of iNKT cells restored the balance of immune cells and corrected the excessive inflammation of the body.

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

This protocol uses G6PI mixed peptides to construct rheumatoid arthritis models that are closer to that of human rheumatoid arthritis in CD4+ T cells and cytokines. High purity invariant natural killer T cells (mainly iNKT2) with specific phenotypes and functions were obtained by in vivo induction and in vitro purification for adoptive immunotherapy.

Adoptive Immuntherapie von iNKT-Zellen in Glucose-6-Phosphat-Isomerase (G6PI)-Induzierte RA-Mäuse

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible genetic background. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a typical disease model of MS widely used for investigating the pathogenesis in which T lymphocytes specific for myelin antigens initiate an inflammatory reaction in CNS. It is very important to assess how lymphocytes in the CNS regulate the development of disease. However, the approach for measuring the quantity and quality of infiltrated lymphocytes in the CNS is very limited due to the difficulties in isolating and detecting infiltrated lymphocytes from the brain. This manuscript presents a protocol for that is useful for the isolation, identification, and characterization of infiltrated lymphocytes from the CNS and will be helpful for our understanding of how lymphocytes are involved in the development of the CNS autoimmune disease.

This manuscript presents a protocol to induce active experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in mice. A method for the isolation and characterization of the infiltrated lymphocytes in the central nervous system (CNS) is also presented to show how lymphocytes are involved in the development of CNS autoimmune disease.

Flow Cytometric Analyse der Lymphozyteninfiltration im Zentralnervensystem während der experimentellen Autoimmunenzephalomyelitis

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...

Die Überwindung der nicht mehr reagiert, in der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) Beständig Mausstämmen durch adoptiven Transfer-und Antigen-Challenge

PLAYLIST