Dieses Protokoll bietet ein zuverlässiges Tiermodell einer seitlichen Rückenmarks-Hemisektion, die das Brown-Sequard-Syndrom beim Menschen imitiert, und eine neue kombinierte Verhaltensskala zur Beurteilung asymmetrischer Verhaltensdefizite. Dieses Maus-Hemisektionsmodell kann unser Verständnis der neurologischen Beeinträchtigungen fördern, die beim Brown-Sequard-Syndrom beim Menschen auftreten. Im Gegensatz zu Ihren genannten Bewertungen kann unsere neue kombinierte Verhaltensskala auf jede Form angewendet werden, die asymmetrische, Lokomotiven- und In-Lab-Defizite erfordert.
Mit diesem konsistenten, natürlichen Hemi-Sektionsmodell kann der Vergleich des experimentellen Ergebnisses zwischen Grundlagen- und Übersetzungsforschung erleichtert werden. Die Verwendung konsistenter Ergebnisse mit diesem Modell kann für Anfänger schwierig sein. Der entscheidende Schritt ist die vertikale Platzierung der Nadel in der Mittellinie, als Anleitung für die Induktion der Verletzung.
Nachdem Sie sich dieses Video angeschaut haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie sowohl die chirurgischen als auch die Verhaltensprozeduren durchführen können. Reinigen Sie am Tag des Eingriffs den OP-Tisch mit 70% Ethanol und legen Sie ein vorgewärmtes Heizkissen auf den Tisch. Nachdem Sie den chirurgischen Bereich mit einem sterilen chirurgischen Vorhang bedeckt haben, bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf Zehen-Pinch bei einer anästhesierten Ratte.
Tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf, um das Trocknen der Hornhaut zu verhindern, und rasieren Sie das Haar über den Brustwirbeln. Reinigen Sie dann die exponierte Haut mit drei abwechselnden Jod- und Ethanolpeelings. Wenn das Tier bereit ist, suchen Sie die dreizehnte Rippe und folgen Sie der Rippe dorsal, um ihre Verbindung mit dem T-13-Wirbel zu identifizieren.
Zählen Sie bis, um den T-9-Wirbel zu identifizieren, und verwenden Sie eine Zahl fünfzehn Skalpellklinge, um einen drei bis vier Zentimeter großen Mittellinienhautschnitt über die acht bis elften Wirbelspinnprozesse zu machen. Bewegen Sie die Ratte unter ein chirurgisches Mikroskop und sezieren und trennen Sie die paraspinalen Muskeln seitlich von den spinalen Prozessen in Richtung der Facetten der Wirbel T-9 und T-10 auf beiden Seiten. Disablise die Wirbelsäule mit einem modifizierten Stabilisierungshalter, machen einen Schlitz auf beiden Seiten des seitlichen Wirbelknochens, und schieben Sie die Edelstahlarme des Halters unter die exponierten Querprozess Facetten.
Ziehen Sie die Schrauben fest, um den Halter zu sichern, und verwenden Sie einen Winkelmesser, um die T-8 bis 11 Wirbellaminae und spinlösende Prozesse auszusetzen. Mit einem Rongeur den T-9-Spinnprozess wegschnipsen und einen kleinen Teil der Lamina, links zur Mittellinie und den gesamten rechten Teil der Lamina, so seitlich wie möglich entfernen. Dann legen Sie den Ronguer sanft unter die Lamina, und schnippeln Sie ein kleines Stück Knochen nach dem anderen, bis der gewünschte Bereich der Laminektomie abgeschlossen ist.
Als nächstes identifizieren Sie die dorsale Mittellinie des Rückenmarks, und legen Sie eine 30-Spur-Nadel vertikal durch die Mittellinie, in den Spinalakkord, den ganzen Weg bis zur ventralen Wand des Wirbelkanals, mit der Abschrägung nach rechts. Stoppen Sie jede Blutung mit einem kleinen Stück sterilem Gelschaum, und legen Sie eine Spitze eines Paars Von Iridectomie Mikrochirurgie Schere durch die Mittellinie der Nadelbahn, und die andere Spitze entlang der seitlichen Oberfläche des rechten Hemichord, um einen kompletten Schnitt auf der rechten Hemichord zu machen. Verwenden Sie die seitliche Kante der gleichen Nadel wie ein Messer, um den Läsionspalt zu durchschneiden, um eine vollständige rechte Halbsektion zu bestätigen.
Und visualisieren Sie den Boden des Wirbelkanals, um die Vollständigkeit der rechten Halbsektion zu überprüfen. Verwenden Sie Zementmischung, um die schmale Brücke über den Schwamm zu bauen, und die T-8 und T-10 Spinnprozesse. Dann, Nähen Sie die Muskel- und Hautschichten getrennt mit 4/0 Seidenfaden, und injizieren 0,9% sterile Saline subkutan, um die Hydratation zu erhalten.
Zwei- bis dreimal täglich für die erste Woche und ein- bis zweimal in den folgenden Wochen die Harnblase drücken, bis die spontane Blasenentleerung zurückkehrt. An den entsprechenden Versuchszeitpunkten nach dem Eingriff die erwachsene Ratte in ein Freifeldexperiment geben und die Fortbewegung des Tieres vier Minuten lang untersuchen. Weisen Sie mithilfe der Tabelle einen Wert von 1 für yes'und 0 für no'für jede Verhaltenskategorie zu, und summieren Sie den Gesamtwert, um eine endgültige einseitige Halbschnittpunktzahl von 0-8 zu geben.
Zeichnen Sie für die Analyse der Torkopplung das Versuchstier auf einer schmalen Start- und Landebahn auf, und weisen Sie eine Punktzahl von 0 für Nr.'1 für reguläre'und/oder ungeschickt'und 2 für normal'für jede Kupplungskategorie zu. Halten Sie das Tier für die Beurteilung der Kontaktplatzierung in einer vertikalen Position, so dass beide Hinterglieder für die Platzierungsreaktion zur Verfügung stehen, und bürsten Sie die dorsale Oberfläche eines Hinterglieds leicht nach vorne zum Rand einer Oberfläche. Beobachten Sie die Fußplatzierung auf der Oberfläche, und weisen Sie eine Hintergliedmaße Kontakt Platzierung Punktzahl von 0 für keine Platzierung'und 1 für Platzierung'Für Gitter-Walking-Auswertung, legen Sie die Ratte auf eine erhöhte sechsunddreißig mal dreißig Zentimeter kunststoffbeschichtetdraht-Mesh-Gitter mit 3 cm quadratischen Öffnungen, und Video-Aufzeichnung der Ratte frei über die Plattform für 30 Schritte, um quantifizierbare Anzahl der Fußfehlschritte für jedes Glied zu ermöglichen, um die Schwere des Motordefizits zu bestimmen.
Die aminofluoreszierende Färbung eines Querschnitts am Verletzungsepizentrum zeigt einen vollständigen Verlust des rechten Hemichords. Und die Erhaltung der linken Hemichord kontralateral zu der Verletzung. Die Ergebnisse der einzelnen Gate-Bewertungsmaßnahmen können separat analysiert oder zu einem zusammengesetzten kombinierten Verhalten nach dem Halbschnitt-Score kombiniert werden.
In den ersten drei Tagen nach der Verletzung verlieren Ratten die Fähigkeit zu treten, wobei schrittartige Bewegungen nach 7 10 Tagen nach der Verletzung wieder auf der ipsilesionalen Seite auftauchen. Und mit den meisten Schritten sind dorsale Schritte. Bis 28 Tage nach der T-9-Hemisektion können die Ratten mit nahezu normaler Koordination Plantatenschritte machen.
Im Vergleich dazu wird die kontradiktole Hintergliedwenigere weniger unterbrochen, da der einseitige Halbschnitt innerhalb der ersten fünf Tage nach der Verletzung fällt und nach der Verletzung wieder an die Grundlinie zurückkehrt. Bei der Gesamt-Gate-Kupplungsprüfung werden sowohl die Stabilität als auch die Anpassungsfähigkeit der Koordination nach der Halbsektion in den ersten fünf Tagen nach der Verletzung deutlich reduziert. Die Kontaktplatzierung und das Gitterwandern der ipsilateralen Hintergliedmaße sind ebenfalls betroffen, die sich in der Regel erholen, wenn das Tier beginnt, plantare Schritte zu machen.
Es kann schwierig sein, eine sauber geschnittene Verletzung zu produzieren. Das Platzieren einer Nadel in der Mitte kann eine hilfreiche Richtschnur für eine vollständige Trennung des Gewebes sein.
