Name: SEO Title
Uploaded: 2009-02-03T10:20:09
Description: Skeletal muscle regeneration is a dynamic process driven by adult muscle stem cells and their progeny. Mostly quiescent at a steady state, adult muscle ...

1. sorbonnes <ol><li>utilise <ol><li>hottes sont utilisés lorsqu’un matériau génère des particules atmosphériques, telles que les poudres de silice fine ou carcinogènes volatils, tels que le benzène, de fumées ou des vapeurs nocives.</li>
	</ol></li> <li>Opération <ol><li>bien que face à l’ouverture du capot, lorsque l’utilisateur travaille et à l’Air est aspiré par le biais de l’échappement. Le flux constant d’air vers l’intérieur vers le visage empêche dangereuses vapeurs, fumées et particules échappant à l’ouverture du capot, assurer la sécurité de l’utilisateur et les autres travailleurs de laboratoire.</li>
	</ol></li> <li>Vitesse d’écoulement du visage doit être suffisamment élevée pour la hotte soit efficace. Une vitesse d’écoulement faible permet aux vapeurs toxiques, des vapeurs ou des particules de s’échapper par l’ouverture du capot vers l’utilisateur. Une des causes de la vitesse d’écoulement faible sont d’avoir la fenêtre réglable à l’ouverture de la hotte, appelé une écharpe, trop élevée. Il est fréquent pour les hottes d’avoir faible débit alarmes de vitesse et alarmes de hauteur de châssis. Vitesses d’écoulement typiques sont entre 0,41 et 0,51 m/s (ANSI/AIHA/ASSE Z9.5). Hottes doivent avoir la hauteur maximale de travail sécuritaire de l’ouvrant clairement marquée.</li>
	<li>Il y a plusieurs règles pour une utilisation sûre des hottes.
	<ol><li>Ne mettez jamais votre tête dans l’espace de la hotte, puisque l’insertion de votre tête à l’intérieur de la hotte peut vous exposer à des matériaux nocifs. La hotte est conçue pour protéger les utilisateurs contre l’exposition aux produits chimique que lorsque utilisé correctement. Seuls les utilisateurs &#39; bras doivent être présents dans la hotte. Porter des équipement de protection individuelle (EPI) approprié à tout moment, indépendamment de la protection offerte par la hotte aspirante. Consulter votre organisation &#39; s Environmental Health &#38; Bureau de la sécurité (EHS) pour obtenir des recommandations EPI appropriées, si ils sont inconnus.</li>
		<li>Toujours travailler avec le châssis égale ou inférieure à la hauteur de sécurité maximale.</li>
		<li>Quand pas en service, l’ouvrant doit être fermé. Fermeture de l’ouvrant assure un environnement de travail plus sûr pour tous les occupants du laboratoire. En outre, les coûts d’énergie associés à une mauvaise fumée capot opération sont immenses. Conservant la hauteur de la ceinture au minimum, niveau de non-travail est plus économe en énergie.</li>
		<li>Ne pas utiliser la hotte pour l’entreposage des produits chimiques. Stocker les produits chimiques dans des endroits appropriés, tels qu’armoire, inflammables et les amener dans la hotte de laboratoire uniquement lorsque nécessaire.</li>
		<li>Placer tout le matériel dans la hotte de laboratoire au moins 6 pouces du bord de la face de hotte des fumées. Lorsque les travaux sont menés au sein de 6 pouces du bord, vapeurs, fumées et particules sont plus susceptibles d’échapper à.</li>
		<li>à l’instar des principes de bonne gestion s’appliquent sur l’utilisation des bancs de laboratoire, les mêmes principes devraient être pratiqués au sein de hottes.</li>
	</ol></li> <li>Effectuer un entretien régulier sur une hotte de laboratoire pour s’assurer qu’il fonctionne en toute sécurité. Maintenance doit inclure des tests des alarmes et les tests de vitesse d’écoulement à la conception ceinture en position de fonctionnement. Plusieurs facteurs peuvent influencer la vitesse d’écoulement, y compris de modèles d’écoulement dans la chambre, la hotte est située et évacuer les obstructions à l’échappement. Si la vitesse d’écoulement est faible, à la conception ceinture en position de fonctionnement, abaisser le châssis jusqu'à ce que la vitesse d’écoulement est à la vitesse souhaitée. Plusieurs hottes modernes ont des moniteurs de vitesse de débit air qui surveillent la vitesse d’écoulement en temps réel. Si le châssis devient trop faible pour un travail efficace à effectuer à la hotte, cesser l’exploitation jusqu'à ce que la racine du problème est abordée.</li>
	<li>Variations de hotte des fumées <ol><li>il y a nombre de types de hottes plus spécialisés qui peuvent être rencontrées. Il s’agit de l’acide perchlorique hottes, hottes de radio-isotopes, hottes sans conduit et autres. Plus on peut lire sur la configuration requise pour ces hottes dans ANSI/AIHA/ASSE Z9.5.</li>
	</ol></li></ol> 2. Hottes à flux laminaire utilise <ol><li><ol><li>à flux laminaire est utilisés lorsqu’un environnement sain, exempt de particules ou de contaminants biologiques, est requis. Les exemples courants incluent travaillent avec des cultures de tissus ou de semi-conducteur gaufrettes. Hottes à flux laminaire préviennent la contamination de l’air de pénétrer dans l’espace de travail du cabinet. L’écoulement laminaire (par opposition à un écoulement turbulent) d’air réduit au minimum la contamination croisée des échantillons au sein du cabinet.</li>
	</ol></li> <li>Air est filtré par un filtre HEPA et soufflé sur l’espace de travail, sortir vers l’utilisateur. Un flux constant de l’extérieur de la qualité de l’air maintient un espace de travail non contaminée. Certaines armoires à flux laminaire sont équipés d’une lampe UV-C pour désinfecter l’avant l’espace de travail emploi.</li>
	<li>Il y a deux types de hottes à flux laminaire : flux horizontal et vertical ( Figure 1). Face à flux horizontal armoires souffler l’air pur de l’arrière de l’armoire horizontalement vers l’utilisateur, tandis que les hottes à flux vertical soufflent de l’air pur au plafond du cabinet vers le plancher de l’espace de travail où il frappe ensuite la base et le flux à l’horizontale direction vers l’utilisateur. Hottes à flux vertical sont utilisés avec l’ouvrant tiré vers le bas. Hottes à flux horizontal n’ont pas une écharpe. Les deux types de hottes à flux laminaire ont leurs avantages et leurs inconvénients.</li>
</ol> <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/10372/10372fig1v2.jpg" /> figure 1 . Diagrammes de hottes à flux laminaire horizontal et vertical.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"> <tbody><tr><td colspan="2"> hotte à flux laminaire horizontal</td></tr> <tr><td>avantages</td> <td> Inconvénients</td></tr> <tr><td>mains/gants contaminer moins car ils sont généralement sous le vent d’éléments contenus dans le cabinet</td> <td>courant d’Air souffle en utilisateur &#8217; face s</td></tr> <tr><td>turbulence de l’écoulement air réduite</td> <td>objets de grande taille sur worksp ACE peut obstruer la circulation de l’air pur, réduisant l’efficacité</td></tr> <tr><td colspan="2"> Hotte à flux laminaire Vertical</td></tr> <tr><td>avantages</td> <td>inconvénients</td></tr> <tr><td>Air Stream ne souffle pas en utilisateur &#8217; face s</td> <td>ne pouvez pas positionner les mains et les bras au-dessus des objets</td></tr> <tr><td>moins traverser contamination d’élément dans l’espace de travail</td> <td>accrue turbulences débit</td></tr></tbody></table> tableau 1. Avantages et inconvénients des hottes à flux laminaire horizontal et vertical.
<ol start="4"> <li>conseils pour assurer une utilisation efficace des hottes à flux laminaire.
	<ol><li>Toujours attention de ne pas mettre des articles en aval des éléments qui pourraient conduire à la contamination croisée. Cela est particulièrement vrai lors de l’utilisation des échantillons biologiques.</li>
		<li>Réduire encombrement. Les plus d’éléments qui se trouvent dans l’armoire, la contamination la plus probable est de se produire. Volumineux peut perturber la circulation.</li>
		<li>Veiller à ce que les mains/gants et tous les éléments qui sont introduits dans l’armoire sont exempts de contamination avant d’entrer dans le cabinet.</li>
		<li>Tous les éléments doivent être placés de 6 pouces ou plus loin du bord de l’ouverture du meuble. L’air à 6 pouces du bord est plus susceptible de se mélanger avec l’air extérieur, objets de sens au sein de 6 pouces sont plus susceptibles d’être contaminés.</li>
		<li>Un entretien régulier doit être effectué sur une enceinte à flux laminaire pour assurer que son fonctionnement en toute sécurité. Maintenance doit inclure la vérification et remplacement du filtre HEPA, vérification d’étanchéité de l’armoire et le test de vitesse de circulation de l’air. L’intégrité du filtre HEPA doit vérifier en testant le nombre de particules qui traversent le filtre. Le filtre doit éliminer 99,97 % ou supérieure de 0,3 µm particules. Si la vitesse d’écoulement est trop faible, l’armoire sera inefficace en gardant des contaminants. Si la vitesse d’écoulement est trop grande, le débit sera mouvementée, avec la contamination de plus en plus probable.</li>
	</ol></li></ol> < div class = « chapter_text » id = « script_0 "> hottes et hottes à flux laminaire sont des pièces essentielles de matériel de laboratoire qui empêchent les situations dangereuses et contamination. En hottes à flux laminaire, dangers ou contaminants sont réduits à l’aide de flux d’air. Hottes de dessiner dans l’air à travers un espace de travail pour éliminer les vapeurs dangereuses et les particules fines, tandis que l’écoulement laminaire armoires souffler de l’air à travers un filtre et à l’extérieur pour prévenir la contamination des échantillons de matériaux biologiques ou de poussière. Cette vidéo illustreront comment exploitent des hottes et des hottes à flux laminaire, comment les utiliser et comment procéder à la maintenance. </div> <div class="chapter_text" id="script_1"> hottes et flux laminaire fonctionne grâce à flux d’air laminaire, un flux qui se déroule en parallèle des lignes de courant, qui ne se croisent pas. Écoulement laminaire, par opposition à un écoulement turbulent, empêche la contamination croisée entre les échantillons par circulant autour des objets, élimination des particules dangereuses. Hottes ont trois grandes parties : le visage de l’ouverture avec une ceinture, l’espace de travail et le gaz d’échappement. Le ventilateur dans l’échappement dessine dans l’air à travers la face de l’ouverture, dans l’ensemble de l’espace de travail et à travers le gaz d’échappement. Ce flux Incarose à son tour de fumées et de particules à l’échappement et loin du laboratoire. à la hauteur voulue, l’ouvrant limite la taille de l’ouverture, qui à son tour maintient un haut débit d’air. Ce haut débit est nécessaire pour empêcher la fuite de vapeurs. Dans le même temps, il y a deux types d’armoires à flux laminaire, horizontales et verticales. Dans les deux, l’air est aspiré à travers un filtre d’admission et de purification où il est effacé de petites particules comme la poussière et les bactéries. Meuble horizontal de A dirige l’air horizontalement à travers l’espace de travail. Ce type de cabinet réduit la contamination par les mains et gants, car ils sont en aval des échantillons. Cependant, le courant d’air ne souffle pas directement sur l’utilisateur, et objets de grande taille peuvent obstruer la circulation de. Dans une armoire verticale, l’air est dirigé d’en haut sur l’espace de travail, puis à passé une écharpe. Ce type de flux contacte directement la surface de l’espace de travail de matériaux, il aide à prévenir la contamination croisée. Cependant, la ceinture peut restreindre le mouvement de la main et le débit d’air est plus turbulent que dans une armoire horizontale. Maintenant, nous allons vous montrer comment utiliser ces espaces de travail dans un laboratoire et comment effectuer l’entretien de base. </div> <div class="chapter_text" id="script_2"> d’utiliser une hotte en toute sécurité, toujours porter un équipement de protection individuelle approprié. Levez l’ouvrant qu’à la hauteur de travail sécuritaire maximal indiqué assurer assez d’air à travers le capot. à prévenir l’exposition aux vapeurs toxiques ou des particules, travailler avec seulement vos bras à l’intérieur de la hotte et ne laissez jamais votre tête entrer dans l’espace de travail. En outre, pour s’assurer que la vitesse est suffisante tout au long de la hotte, garder l’espace de travail épuré et déplacer tous les éléments au moins six pouces de la face de la hotte. Lorsque vous avez terminé travaillant dans le capot, enlever tous les matériaux. Ne pas stocker de produits chimiques dans la hotte, mais plutôt dans un emplacement de stockage dédié comme une armoire de produits inflammables. Enfin, fermer le châssis afin d’assurer un environnement plus sûr de laboratoire et de réduire la consommation d’énergie. Effectuer un entretien régulier en testant les alarmes et vitesse d’écoulement à la hauteur maximale sash. Si la vitesse est faible, abaisser le châssis jusqu'à ce qu’il soit à la vitesse souhaitée. Si le châssis devient trop faible pour un travail à faire à la hotte, cesser ses activités jusqu'à ce que la racine du problème est abordée. </div> <div class="chapter_text" id="script_3"> armoires sont couramment utilisés dans les endroits où la contamination est un sujet de préoccupation, comme un laboratoire de biologie, donc vous devrez faire attention à la contamination par vous-même et laboratoire à flux laminaire de l’air. Pour prévenir la contamination, utiliser l’éthanol pour stériliser les gants et tout équipement avant d’utiliser l’armoire ou ouvrir le châssis de. S’assurer que la ceinture n’est pas au-dessus de la limite maximale autorisée de hauteur garantir un débit suffisant de l’air. Garder l’armoire sans encombrement et assurez-vous que les objets sont placés au moins 6 pouces du bord, car c’est la zone plus susceptible d’être contaminés par l’air du laboratoire. Aussi, ne placez pas les éléments risque de contamination croisée en aval de l’autre. Lorsque vous avez terminé, retirez tous les éléments de l’espace de travail pour prévenir fouillis et fermez la ceinture pour éviter la contamination. Puis, si le cabinet est équipé d’une lampe UV-C, allumez-le pour désinfecter l’espace de travail. Effectuer un entretien régulier sur l’enceinte à flux laminaire. Vérifiez l’étanchéité en enduisant les zones sensibles comme les bords de l’écharpe avec une solution savonneuse, qui fera des bulles sur le site d’échapper l’air. </div> <div class="chapter_text" id="script_4"> vous avez regardé juste introduction de JoVE pour fumées de hottes et hottes à flux laminaire. Vous devez maintenant comprendre comment ils fonctionnent, comment les utiliser et comment procéder à la maintenance. Merci de regarder !</div>

RÃ©vÃ©lation

hottes et hottes à flux laminaire sont des outils utiles dans le laboratoire pour prévenir les dommages causés par des matières dangereuses et de nettoyer un espace de travail lors de l’utilisation des matériaux sensibles. Cependant, sorbonnes et hottes à flux laminaire ne sont plus efficaces lorsqu’il est utilisé correctement. Suite simple mode d’emploi et effectuer un entretien régulier, sorbonnes et hottes à flux laminaire peuvent être des outils efficaces dans le laboratoire.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/Details.php?ID=1246">Chris's testing Test 3/26/09 test test testChris's testing Test 3/26/09 test test testChris's testing Test 3/26/09 test t12</a>. There was an error with an author's name. The author's last name had a typo and was corrected to: Nima Saeidi instead of: Nima Saedi.

Erratum: Chris's testing Test 3/26/09 test test testChris's testing Test 3/26/09 test test testChris's testing Test 3/26/09 test t12

hottes et hottes à flux laminaire sont des contrôles qui visent à réduire l’exposition aux dangers éventuels et de contamination. Hottes réduisent l’exposition aux vapeurs nocives, fumées et particules pour l’utilisateur alors que le flux laminaire réduire l’espace de travail exposition aux contaminants. Écoulement turbulent suit un modèle d’écoulement irrégulier avec écoulement local se déplaçant dans toutes les directions par rapport à l’écoulement en bloc. Écoulement laminaire se déplace dans des lignes de courant parallèles qui ne se croisent pas. Hottes à flux laminaire maintiennent un flux laminaire d’air pour éviter toute contamination croisée au sein de l’espace de travail et pour empêcher le reflux de l’air contaminé de l’extérieur le capot qui se produirait avec un écoulement turbulent.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>(3-Glycidyloxypropyl)trimethoxysilane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>440167</td>
			<td>GOPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% Trypsin-EDTA (1X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Dodecylbenzenesulfonic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>44198</td>
			<td>DBSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Technic</td>
			<td>530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylic resin</td>
			<td>Fischer scientific</td>
			<td>NC1455685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>autoclave</td>
			<td>Tuttnauer</td>
			<td>3150 EL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AZ 10XT</td>
			<td>Microchemicals</td>
			<td></td>
			<td>Positive photoresist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AZ 826 MIF Developer</td>
			<td>Merck</td>
			<td>10056124960</td>
			<td>Metal-ion-free developer for the negative photoresist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AZ Developer</td>
			<td>Merck</td>
			<td>10054224960</td>
			<td>Metal-ion-free developer for the positive photoresist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AZ nLof 2070</td>
			<td>Microchemicals</td>
			<td></td>
			<td>Negative photoresist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Axience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Rimadyl</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Sorvall Legend X1R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75004260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMOS camera Prime 95B</td>
			<td>Photometrics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator HERAcell 150i</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAC board</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>USB 6259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D&#233;co spray P&#233;b&#233;o</td>
			<td>Cultura</td>
			<td>3167860937307</td>
			<td>Black acrylic paint</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran Texas Red 70.000</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>D1830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Die bonding paste &#34;Epinal&#34;</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>EN-4900GC</td>
			<td>Silver paste</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispensing machine</td>
			<td>Tianhao</td>
			<td>TH-2004C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium + GlutaMAX&#8482;-I</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10567-014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D6429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg incubator COUVAD&#39;OR 160</td>
			<td>lafermedemanon.com</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>6881.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertilized eggs of Japanese quail</td>
			<td>Japocaille</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>VWR</td>
			<td>S181BH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flask</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>658170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence macroscope</td>
			<td>Leica MZFLIII</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gl261</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>ACC 802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold pellets - Dia 3 mm x 6 mm th</td>
			<td>Neyco</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handheld automated cell counter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>PHCC00000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating and drying oven</td>
			<td>Memmert</td>
			<td>UF110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexadimethrine Bromide Sequa-brene</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hot plate Delta 6 HP 350</td>
			<td>S&#252;ss Microtec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illumination system pE-4000</td>
			<td>CoolLed</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infrared tunable femtosecond laser (Ma&#239;-Ta&#239;)</td>
			<td>Spectra Physics (USA)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin calcium salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I3909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kapton tape SCOTCH 92 33x19</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td>Polyimide protection tape</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab made pulse generator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labcoter 2 Parylene Deposition system PDS 2010</td>
			<td>SCS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lenti-X 293 T cell line</td>
			<td>Takara Bio</td>
			<td>63218</td>
			<td>HEK 293T-derived cell line optimized for lentivirus production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lenti-X GoStix Plus</td>
			<td>Takara Bio</td>
			<td>631280</td>
			<td>Quantitative lentiviral titer test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mask aligner MJB4</td>
			<td>S&#252;ss Microtec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-90 Concentrated cleaning solution</td>
			<td>International Products</td>
			<td>M9050-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides 76 x 52 x 1 mm</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>1100420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles 30G</td>
			<td>BD Microlance 3</td>
			<td>304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PalmSens4 potentiostat</td>
			<td>PalmSens</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>parylene-c : dichloro-p-cyclophane</td>
			<td>SCS</td>
			<td>300073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCB Processing Tanks</td>
			<td>Mega Electronics</td>
			<td>PA104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEDOT:PSS Clevios PH 1000</td>
			<td>Heraeus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin / streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pGP-CMV-GCaMP6f</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>40755</td>
			<td>plasmid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Saline solution</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma treatment system PE-100</td>
			<td>Plasma Etch</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PlasmaLab 80 Reactive Ion Etcher</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic mask</td>
			<td>Selba</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic weigh boat 64 x 51 x 19 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10770-454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-dimethylsiloxane: SYLGARD 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td>Dow chemicals</td>
			<td>1673921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyimide copper film 60 &#181;m (Kapton)</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>IM301522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propan-2-ol</td>
			<td>Technic</td>
			<td>574</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protolaser S</td>
			<td>LPKF</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>puromycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A11103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round cover glass 5 mm diameter</td>
			<td>Fischer scientific</td>
			<td>50-949-439</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scepter Sensors - 60 &#181;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>PHCC60050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone adhesive Kwik-Sil</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>spin coater</td>
			<td>S&#252;ss Microtec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin Coater</td>
			<td>Laurell</td>
			<td>WS-650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super glue</td>
			<td>Office depot</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tetracycline-free f&#339;tal bovine Serum</td>
			<td>Takara Bio</td>
			<td>631105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal evaporator Auto 500</td>
			<td>Boc Edwards</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two-photon microscope</td>
			<td>Zeiss LSM 7MP</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U87-MG</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-14</td>
			<td>Human glioblastoma cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex VTX-3000L</td>
			<td>LMS</td>
			<td>VTX100323410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xfect single shots reagent</td>
			<td>Takara Bio</td>
			<td>631447</td>
			<td>Transfection reagent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification and analysis of myogenic progenitors in vivo during acute skeletal muscle injury by high-dimensional single-cell mass cytometry

Robert M. Rioux &amp; Elliott, Pennsylvania State University, University Park, PA
 hottes et hottes à flux laminaire sont des contrôles qui fonctionnent selon des principes similaires. Les deux utilisent un flux constant d’air pour éviter la contamination de l’environnement de laboratoire et de ses habitants. Hottes empêchent les substances dangereuses de sortir de l’espace de travail de hotte, hottes à flux laminaire empêchent les contaminants d’entrer dans l’espace de travail du cabinet.
 hottes sont des systèmes de ventilation conçus pour minimiser l’exposition aux particules, fumées et vapeurs nocives. Un flux constant de l’air est aspiré par la hotte ouverture, limitant ainsi la fuite de vapeurs, fumées et particules et alors est sorti par le gaz d’échappement. Hottes à flux laminaire servent à maintenir un environnement stérile/nettoyer en coulant constamment recherche de particules haute efficacité (HEPA)-air filtré vers l’extérieur, réduisant au minimum la contamination de l’air entrant dans l’espace de travail du cabinet. L’air filtré HEPA réduit la possibilité pour les produits chimiques nocifs ou des particules d’entrer dans le laboratoire. Un filtre HEPA élimine 99,97 % ou supérieure de 0,3 µm particules.

Skeletal muscle constitutes the largest tissue by mass in the body and regulates multiple functions, from eyesight to respiration, from posture to movement, as well as metabolism1. Therefore, maintaining skeletal muscle integrity and function is critical to health. Skeletal muscle tissue, which consists of tightly packed bundles of multinucleated myofibers surrounded by a complex network of nerves and blood vessels, exhibits remarkable regenerative potential1,2.
The main drivers of skeletal muscle regeneration are adult muscle stem cells (MuSCs). Also known as satellite cells, due to their unique anatomical location adjacent to the plasma membrane of the myofiber and beneath the basal lamina, they were first identified in 19613. MuSCs express a unique molecular marker, the transcription factor paired box 7 (Pax7)4. Mostly quiescent in healthy adults, they become activated upon muscle injury and proliferate to give rise to progeny that will (i) differentiate into fusion-competent muscle cells that will form new myofibers to repair muscle damage or (ii) self-renew to replenish the stem cell pool5.
At the cellular and molecular level, the process of regeneration is quite dynamic and involves cell-state transitions, characterized by the coordinated expression of key myogenic transcription factors, also known as myogenic regulatory factors (MRFs)6,7. Prior in vivo developmental studies, lineage tracing experiments, and cell culture work using myoblasts&#160;have shown that sequential expression of these transcription factors drives myogenesis, with myogenic factor 5 (Myf5) being expressed upon activation, myogenic differentiation 1 (MyoD1) expression marking commitment to the myogenic program, and myogenin (MyoG) expression marking differentiation8,9,10,11,12,13,14. Despite this knowledge and the discovery of cell surface markers to purify MuSCs, strategies and tools to identify and isolate discrete populations along the myogenic differentiation path and resolve a myogenic progression in vivo have been lacking15,16,17,18.
Here, we present a novel method, based on recently published research, which enables the identification of stem and progenitor cells in skeletal muscle and the analysis of their cellular, molecular, and proliferation dynamics in the context of acute muscle injury19. This approach relies on single-cell mass cytometry (also known as Cytometry by Time of Flight [CyTOF]) to simultaneously detect key cell surface markers (&#945;7&#160;integrin, CD9, CD44, CD98, and CD104), intracellular myogenic transcription factors (Pax7, Myf5, MyoD, and MyoG) and a nucleoside analog (5-Iodo-2&#8242;-deoxyuridine, IdU), to monitor cells in S phase19,20,21,22,23. Moreover, the protocol presents a strategy based on the detection of two cell surface markers, CD9 and CD104, to purify these cell populations by fluorescence-activated cell sorting (FACS), therefore enabling future in-depth studies of their function in the context of injury and muscle diseases. While primary myoblasts have been extensively used in the past to study the late stages of myogenic differentiation in vitro, it is not known whether they recapitulate the molecular state of muscle progenitor cells found in vivo24,25,26,27,28,29,30. The production of myoblasts is laborious and time-consuming, and the molecular state of this primary culture changes rapidly upon passaging31. Hence, freshly isolated myogenic progenitors purified with this method will provide a more physiological system to study myogenesis and the effect of genetic or pharmacological manipulations ex-vivo.
The protocol presented here can be applied to address a variety of research questions, for example, to study the dynamics of the myogenic compartment in vivo in animal models of muscle diseases, in response to acute genetic manipulations or upon pharmacological interventions, therefore deepening our understanding of muscle stem cell dysfunction in different biological contexts and facilitating the development of novel therapeutic interventions.

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Hottes et hottes à flux laminaire

La dÃ©termination de la migration des neutrophiles transuroepithelial permet une Ã©valuation quantitative de la migration des PMN humains Ã  travers les couches de cellules Ã©pithÃ©liales de la vessie cultivÃ©es en rÃ©ponse Ã  divers stimuli (figure 1B). Bien que le protocole est simple, il ya un certain nombre de variables qui peuvent influencer la migration des PMN et par consÃ©quent affecter la reproductibilitÃ© de ce test. Des mesures devraient Ãªtre prises lors de la prÃ©paration des supports permÃ©ables et le PMN Ã  rÃ©duire la variabilitÃ© entre les rÃ©plicats techniques et biologiques. Par exemple, seulement permÃ©able soutient contenant des couches de cellules confluentes suffisamment 5637 devraient Ãªtre utilisÃ©es dans une expÃ©rience. Confluence des cellules 5637 est Ã©valuÃ©e en utilisant un test fonctionnel qui permet de mesurer l&#39;impermÃ©abilitÃ© aux liquides. Si le milieu ajoutÃ© aux s&#39;Ã©quilibre de rÃ©servoir supÃ©rieur Ã  travers le support permÃ©able, puis les cellules 5637 ne sont pas suffisamment confluent de mener l&#39;expÃ©rience. Si le volume dans le rÃ©servoir supÃ©rieur est maintenu,puis le support permÃ©able peut Ãªtre utilisÃ© pour Ã©valuer la migration des PMN. Nous avons mesurÃ© la rÃ©sistance Ã©lectrique trans-Ã©pithÃ©liale dans ce systÃ¨me, qui s&#39;Ã©lÃ¨ve modestement Ã  la confluence des cellules, si cette mÃ©thode est choisie, il faut prendre soin de ne pas contaminer la configuration autrement stÃ©rile. Confluence des cellules 5637 7 jours aprÃ¨s le semis peut Ãªtre influencÃ©e par plusieurs facteurs, notamment le nombre de passage des cellules et le nombre de cellules ensemencÃ©es sur le support permÃ©able. En outre, la quantitÃ© de temps que les cellules sont incubÃ©es 5637 sur le support permÃ©able en position inversÃ©e pendant les semis ne doit pas dÃ©passer 16 heures (figure 1A). Pour reproductibilitÃ© optimale, le protocole doit Ãªtre strictement respectÃ©e. Enfin, permÃ©able soutient contenant des couches de cellules confluentes 5637 doivent Ãªtre utilisÃ©es sous 1-2 jours ouvrables, et les membranes des supports ne doit jamais Ãªtre touchÃ© soit pendant la croissance des cellules 5637 ou au cours de l&#39;essai de migration des neutrophiles transuroepithelial. En plus des cellules 5637, la variabilitÃ© peut Ã©galement Ãªtre introduit lors de la prÃ©paration PMN. En utilisant le protocole dÃ©taillÃ© ci-dessus pour isoler les PMN, 1 ml de sang humain produit gÃ©nÃ©ralement environ 10 6 PMN, bien que ce nombre varie d&#39;un individu Ã  l&#39;autre. Une fois que le rendement typique de sang d&#39;un donateur individuel est connu, le protocole d&#39;isolement peut Ãªtre agrandie ou rÃ©duite en consÃ©quence. PMN d&#39;individus malsains ou mal doit Ãªtre Ã©vitÃ©e, et diffÃ©rents bailleurs de PMN devrait Ãªtre utilisÃ© pour biologique rÃ©plique Ã  s&#39;assurer que les rÃ©sultats observÃ©s sont reproductibles. PMN devrait Ãªtre manipulÃ© avec soin et stÃ©rile pour Ã©viter l&#39;activation lors de l&#39;isolement. Enfin, le calendrier des procÃ©dures expÃ©rimentales est cruciale, car PMN ne survivent pas pendant de longues pÃ©riodes de temps, une fois retirÃ©es du corps. Nous utilisons PMN en 1 heure de terminer la procÃ©dure d&#39;isolement. Compte tenu de ces considÃ©rations, au moins 3 rÃ©pÃ©titions techniques devraient Ãªtre inclus dans chaque rÃ©pÃ©tition biologique. Le nombre de PMN dans le rÃ©servoir infÃ©rieur aprÃ¨s 1 hr est montrÃ© Ã  la figure 2 normalisÃ©e Ã  10 6 EntrÃ©e PMN. Alternativement, les numÃ©ros PMN peuvent Ãªtre comparÃ©es Ã  un contrÃ´le interne aprÃ¨s la normalisation Ã  l&#39;entrÃ©e PMN, ce qui peut rÃ©duire les variations entre biologique rÃ©pÃ©titions. L&#39;adhÃ©sion au protocole dÃ©crit ci-dessus avec une attention aux dÃ©tails permet le dÃ©nombrement de la migration des PMN en rÃ©ponse Ã  des stimuli y compris les bactÃ©ries (figure 2A) et les substances chimiotactiques (figure 2B). <img src="/files/ftp_upload/50919/50919fig1.jpg" alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:hires="/img/sprite.png?v=68"/> Figure 1. SchÃ©ma du dispositif expÃ©rimental. (A) 5637 vessie cellules Ã©pithÃ©liales sont ensemencÃ©es sur des supports permÃ©ables inversÃ©es, les supports sont redressÃ©s dans une plaque de 24 puits, et les cellules sont cultivÃ©es Ã  confluence. (B) PermÃ©able supports contenant des cellules confluentes 5637 sont inversÃ©es et infectÃ©es par E. coli sur le cÃ´tÃ© apical des couches Ã©pithÃ©liales. Sinon, chemoattractants peuvent Ãªtre placÃ©s dans le rÃ©servoir infÃ©rieur. Les supports permÃ©ables sont redressÃ©s dans une plaque de fixation basse, et des PMN humains fraÃ®chement isolÃ©s sont appliquÃ©s au rÃ©servoir supÃ©rieur (reprÃ©sentant le cÃ´tÃ© basolatÃ©ral des couches Ã©pithÃ©liales). PMN migrent Ã  travers l&#39;Ã©pithÃ©lium et sont Ã©numÃ©rÃ©s dans le rÃ©servoir infÃ©rieur en utilisant un hÃ©matimÃ¨tre. <img src="/files/ftp_upload/50919/50919fig2.jpg" alt="Figure 2" fo:content-width="2.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50919/50919fig2highres.jpg"/> Figure 2. PMN migrent Ã  travers l&#39;Ã©pithÃ©lium de la vessie en rÃ©ponse Ã  diffÃ©rents stimuli. (A) L&#39;infection par le pathogÃ¨ne E. coli souche MG1655, MG1655 tuÃ© par la chaleur (HKMG) ou UPEC mutant UTI89 ybcL :: chat provoque la migration beaucoup plus PMN de mock infection ou d&#39;une infection par la souche UPEC type sauvage UTI89, une cystite isoler (*, P &lt;0,001). (B) L&#39;ajout de fMLF (100 nM) ou IL-8 (100 ng / ml) pour les rÃ©sultats de rÃ©servoir infÃ©rieur en matiÃ¨re de migration beaucoup plus PMN que le traitement simulÃ© (*, P &lt;0,001). Les donnÃ©es reprÃ©sentent la moyenne et l&#39;Ã©cart d&#39;au moins 3 rÃ©pÃ©titions biologique. Des diffÃ©rences statistiquement significatives ont Ã©tÃ© dÃ©terminÃ©es Ã  l&#39;aide du test t de Student non appariÃ© un.

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Skeletal muscle regeneration is a dynamic process driven by adult muscle stem cells and their progeny. Mostly quiescent at a steady state, adult muscle ...