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Fabrication of a Microfluidic Device for the Compartmentalization of Neuron Soma and Axons

In this video, we demonstrate the technique of soft lithography with polydimethyl siloxane (PDMS) which we use to fabricate a microfluidic device for ...

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Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

In this video, we demonstrate the preparation of E18 cortical rat neurons. E18 cortical rat neurons are obtained from E18 fetal rat cortex previously ...

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Non-plasma Bonding of PDMS for Inexpensive Fabrication of Microfluidic Devices

In this video, we demonstrate how to use the neuron microfluidic device without plasma bonding.  In some cases it may be desirable to reversibly bond ...

University of California, Irvine (UCI)

&#x57F9;&#x80B2;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x95EE;&#x9898;&#x662F;&#x65E0;&#x6CD5;&#x63A7;&#x5236;&#x672C;&#x6784;&#x8868;&#x8FBE;&#x5916;&#x6E90;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x901A;&#x5E38;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x53D1;&#x751F;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x52A8;&#x4E71;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x52A8;&#x7269;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x6700;&#x4F73;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E4B;&#x4E00;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x53EF;&#x63A7;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7528;&#x4E8E;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (EGFP) &#x57FA;&#x56E0;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x56DB;&#x73AF;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5BA1;&#x67E5;&#x662F;&#x5426;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x732A;&#x6838;&#x79FB;&#x690D; (NT) &#x80DA;&#x80CE;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x53EF;&#x63A7;&#x3002;&#x8F6C;&#x5316;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3A; 48 &#x5C0F;&#x65F6;&#xFF0C;&#x8865;&#x5145;&#x6216;&#x4E0D;&#x591A;&#x897F;&#x73AF;&#x7D20; &#xFF08;&#x6A21;&#x62DF;&#x56DB;&#x73AF;&#x7D20;&#xFF09; &#x4ECB;&#x8D28;&#x4E2D;&#x548C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6548;&#x7387;&#x8861;&#x91CF;&#x901A;&#x8FC7;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x897F;&#x90E8;&#x548C;&#x5317;&#x90E8;&#x3002;&#x540E;&#x591A;&#x897F;&#x73AF;&#x7D20;&#x53E6;&#x5916;&#xFF0C;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x52A0;&#x8FBE; 17-fold&#x3002;&#x8F6C;&#x6362;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x53BB;&#x6838;&#x7684;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x53D1;&#x5C04;&#x6570;&#x636E;&#x63ED;&#x793A;&#x80DA;&#x80CE;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x591A;&#x897F;&#x73AF;&#x7D20;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F88;&#x5C11;&#x6216;&#x6CA1;&#x6709;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6297;&#x751F;&#x7D20;&#x5F3A;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6210;&#x529F;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x732A;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x80DA;&#x80CE;&#xFF0C;&#x5E76;&#x652F;&#x6301;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8868;&#x8FBE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x732A;&#x751F;&#x4EA7;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x89E3;&#x51B3;&#x7531;&#x4E8E;&#x672C;&#x6784;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x526F;&#x4F5C;&#x7528;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;

&#x5728;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x56DB;&#x73AF;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6765;&#x81EA;&#x732A;&#x80CE;&#x513F;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5316;&#x4E0E;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;

A critical problem of transgenic livestock production is uncontrollable constitutive expression of the foreign gene, which usually results in serious physiological disturbances in transgenic animals. One of the best solutions for this problem may be use of controllable gene expression system. In this study, using retrovirus vectors designed to express the enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene under the control of the tetracycline-inducible promoter, we examined whether the expression of the transgene could be controllable in fibroblast cells and nuclear transfer (NT) embryos of porcine. Transformed fibroblast cells were cultured in medium supplemented with or without doxycycline (a tetracycline analog) for 48 hr, and the induction efficiency was measured by comparing EGFP gene expression using epifluorescence microscopy and Western and Northern blot analyses. After the addition of doxycycline, EGFP expression increased up to 17-fold. The nuclei of transformed fibroblast cells were transferred into enucleated oocytes. Fluorescence emission data revealed strong EGFP gene expression in embryos cultured with doxycycline, but little or no expression in the absence of the antibiotic. Our results demonstrate the successful regulation of transgene expression in porcine nuclear transfer embryos, and support the application of an inducible expression system in transgenic pig production to solve the inherent problems of side-effects due to constitutive expression of the transgene.

Tetracycline-inducible gene expression in nuclear transfer embryos derived from porcine fetal fibroblasts transformed with retrovirus vectors.

Un probl&egrave;me crucial de l&#39;&eacute;levage transg&eacute;niques est incontr&ocirc;lable expression constitutive du g&egrave;ne &eacute;tranger, qui se traduit g&eacute;n&eacute;ralement par graves perturbations physiologiques chez les animaux transg&eacute;niques. Une des meilleures solutions pour ce probl&egrave;me est peut-&ecirc;tre l&#39;utilisation du syst&egrave;me d&#39;expression g&eacute;nique contr&ocirc;lables. Dans cette &eacute;tude, &agrave; l&#39;aide de vecteurs de r&eacute;trovirus con&ccedil;us pour exprimer le g&egrave;ne de la prot&eacute;ine fluorescente verte am&eacute;lior&eacute;e (EGFP) sous le contr&ocirc;le du promoteur inductible par la t&eacute;tracycline, nous avons examin&eacute; si l&#39;expression du transg&egrave;ne pourrait &ecirc;tre contr&ocirc;lable dans les fibroblastes et les embryons de porcins transfert nucl&eacute;aire (NT). Cellules fibroblastiques transform&eacute;es ont &eacute;t&eacute; cultiv&eacute;es dans un milieu suppl&eacute;ment&eacute; avec ou sans la doxycycline (un analogue de t&eacute;tracycline) pendant 48 heures et l&#39;efficacit&eacute; de l&#39;induction a &eacute;t&eacute; mesur&eacute;e en comparant l&#39;expression des g&egrave;nes EGFP utilisant la microscopie &agrave; &eacute;pifluorescence et analyses de tache de l&#39;Ouest et du Nord. Apr&egrave;s l&#39;ajout de doxycycline, EGFP expression augment&eacute;e jusqu&#39;&agrave; 17 fois. Les noyaux des cellules de fibroblaste transform&eacute;es ont &eacute;t&eacute; transf&eacute;r&eacute;s dans des ovocytes &eacute;nucl&eacute;&eacute;s. Donn&eacute;es d&#39;&eacute;mission de fluorescence a r&eacute;v&eacute;l&eacute; la forte expression des g&egrave;nes EGFP dans les embryons cultiv&eacute;s avec la doxycycline, mais une expression peu ou pas en l&#39;absence de l&#39;antibiotique. Nos r&eacute;sultats d&eacute;montrent le r&egrave;glement r&eacute;ussi d&#39;expression du transg&egrave;ne dans des embryons de porcins transfert nucl&eacute;aire et soutiennent l&#39;application d&#39;un syst&egrave;me d&#39;expression inductible dans la production de porcs transg&eacute;niques pour r&eacute;soudre les probl&egrave;mes inh&eacute;rents d&#39;effets secondaires en raison de l&#39;expression constitutive du transg&egrave;ne.

Expression des g&egrave;nes inductibles par t&eacute;tracycline dans des embryons de transfert de noyaux provenant de porcins fibroblastes foetus transform&eacute;s avec des vecteurs de r&eacute;trovirus.

Ein kritisches Problem transgene Tierproduktion ist unkontrollierbare konstitutive Expression des ausl&auml;ndischen Gens, was ernsthafte physiologische St&ouml;rungen im transgene Tiere in der Regel f&uuml;hrt. Die beste L&ouml;sung f&uuml;r dieses Problem m&ouml;glicherweise steuerbare Gen-Ausdruck-Systems. In dieser Studie untersucht mit Retroviren Vektoren entwickelt, um das erweiterte gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (EGFP)-Gen unter der Kontrolle der Tetracyclin-inducible Projekttr&auml;ger, schnelles wir, ob der Ausdruck der Transgene L929 und Kerntransfer (NT) Embryonen von Schweinen steuerbar sein k&ouml;nnten. Transformierte Fibroblasten-Zellen wurden in Medium erg&auml;nzt mit oder ohne Doxycyclin (ein Tetracyclin analog) f&uuml;r 48 h, kultiviert und die Induktion-Effizienz wurde mittels Vergleich EGFP Genexpression mit Epifluoreszenz-Mikroskopie und Western und Northern blot Analysen. Nach der Zugabe von Doxycyclin EGFP Ausdruck um bis zu das Siebzehnfache erh&ouml;ht. Die Kerne von transformierten L929 wurden in entkernten Eizellen &uuml;bertragen. Fluoreszenz-Emissionsdaten offenbart starke EGFP-Genexpression in Embryonen kultiviert mit Doxycyclin, aber wenig oder gar kein Ausdruck in Ermangelung des Antibiotikums. Unsere Ergebnisse zeigen die erfolgreiche Regulierung von Transgenexpression in Schweinen Kerntransfer Embryonen und unterst&uuml;tzen die Anwendung eines Systems durch Induktion Ausdruck in transgenen Schweineproduktion Nebenwirkungen durch konstitutive Expression von der Transgene die inh&auml;rente Probleme zu l&ouml;sen.

Tetracyclin-inducible Genexpression in Kerntransfer Embryonen abgeleitet von Schweinen fetalen Fibroblasten mit Retroviren Vektoren transformiert.

Un problema critico della produzione animale transgenico &egrave; incontrollabile espressione costitutiva del gene straniero, che di solito provoca gravi disturbi fisiologici negli animali transgenici. Una delle migliori soluzioni per questo problema potrebbe essere l&#39;uso del sistema di espressione genica controllabile. In questo studio, utilizzando vettori retrovirus progettati per esprimere il gene della proteina fluorescente verde migliorato (EGFP) sotto il controllo del promotore della tetraciclina-inducible, abbiamo esaminato se l&#39;espressione del transgene potrebbe essere controllabile in cellule di fibroblasti e trasferimento nucleare (NT) gli embrioni della specie suina. Le cellule dei fibroblasti trasformati sono state coltivate in medium supplementato con o senza doxiciclina (una tetraciclina analogico) per 48 ore e l&#39;efficienza di induzione &egrave; stata misurata confrontando l&#39;espressione di gene EGFP utilizzando la microscopia ad epifluorescenza e Western e Northern blot analisi. Dopo l&#39;aggiunta della doxiciclina, l&#39;espressione EGFP aumenta fino a 17-fold. I nuclei delle cellule dei fibroblasti trasformati sono stati trasferiti in enucleated ovociti. Dati di emissione di fluorescenza ha rivelato forte espressione del gene EGFP negli embrioni coltivati con doxiciclina, ma poca o nessuna espressione in assenza dell&#39;antibiotico. I nostri risultati dimostrano il successo regolamento di espressione del transgene negli embrioni della specie suina trasferimento nucleare e sostengono l&#39;applicazione di un sistema di espressione inducibile nella produzione di suini transgenici per risolvere i problemi inerenti gli effetti collaterali a causa costitutiva espressione del transgene.

Tetraciclina-inducible gene expression in embrioni di trasferimento nucleare derivato da fibroblasti fetali porcino trasformati con vettori di retrovirus.

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x5BB6;&#x755C;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x306F;&#x624B;&#x306B;&#x8CA0;&#x3048;&#x306A;&#x3044;&#x767A;&#x73FE;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x969C;&#x5BB3;&#x3067;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x901A;&#x5E38;&#x5916;&#x56FD;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F0F;&#x3001;transgene &#x306E;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073; (NT) &#x306E;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x80DA;&#x306E;&#x30D6;&#x30BF;&#x3067;&#x5236;&#x5FA1;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x3082;&#x306E;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3067;, &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x3067;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (EGFP) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x691C;&#x8A0E;&#x3002;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3; (&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0; &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;) &#x306E;&#x6709;&#x7121;&#x306B;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A; 48 hr &#x306E;&#x57F9;&#x5730;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x8A98;&#x5C0E;&#x52B9;&#x7387;&#x843D;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; EGFP &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x897F;&#x3068;&#x5317;&#x306E;&#x3057;&#x307F;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5F8C;, EGFP &#x767A;&#x73FE;&#x307E;&#x3067;&#x307B;&#x307C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x306F;&#x9664;&#x6838;&#x5375;&#x5B50;&#x306B;&#x79FB;&#x7BA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x767A;&#x5149;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; &#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x5168;&#x304F;&#x306A;&#x3044;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x5F0F;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F37;&#x3044; EGFP &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30D6;&#x30BF;&#x306E;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x3057;&#x3001;&#x526F;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;transgene &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x8C5A;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x767A;&#x73FE;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x8A98;&#x5F15;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3068;&#x5909;&#x63DB;&#x30D6;&#x30BF;&#x80CE;&#x5150;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xAC00;&#xCD95; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC7A5;&#xC560; &#xC678;&#xB798; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD1B5;&#xC81C; &#xC81C;&#xC815; &#xD45C;&#xD604; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xC0C1;&#xC758; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xC81C;&#xC5B4;&#xD560; &#xC218; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; transgene &#xC2DD; fibroblast &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xB3FC;&#xC9C0;&#xC758; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; (NT) &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC5B4;&#xD560; &#xC218; &#xC218; &#xC5EC;&#xBD80; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD56D;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC9C8;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD1B5;&#xC81C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (EGFP) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; &#xB808;&#xD2B8;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xB610;&#xB294; doxycycline (&#xD56D;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC9C8; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8;) &#xC5C6;&#xC774; 48 &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC644; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xAD50;&#xC591; &#xD588;&#xB2E4; &#xC720;&#xB3C4; &#xD6A8;&#xC728; epifluorescence &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; EGFP &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815; &#xBC0F; &#xC11C; &#xBD80; &#xBC0F; &#xBD81;&#xBD80; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D;. Doxycycline &#xCD94;&#xAC00; &#xD6C4; EGFP &#xC2DD; 17-fold&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC99D;&#xAC00;. &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; fibroblast &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD575; enucleated oocytes&#xB85C; &#xC804;&#xC1A1; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD615;&#xAD11; &#xBC29;&#xCD9C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; doxycycline, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xAC70;&#xC758; &#xB610;&#xB294; &#xC804;&#xD600; &#xC2DD; &#xAD50;&#xC591; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0; &#xAC15;&#xD55C; EGFP &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; transgene &#xC2DD; &#xB3FC;&#xC9C0; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB3FC;&#xC9C0; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; transgene&#xC758; &#xC81C;&#xC815; &#xD45C;&#xD604; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC9C0;&#xC6D0;.

&#xB808;&#xD2B8;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCA1;&#xD130;&#xC640; &#xBCC0;&#xD615; &#xB3FC;&#xC9C0; &#xD0DC;&#xC544; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0; &#xD56D;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC9C8;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;.

Un problema cr&iacute;tico de la producci&oacute;n ganadera transg&eacute;nicos es incontrolable expresi&oacute;n constitutiva del gene del extranjero, que generalmente resulta en graves disturbios fisiol&oacute;gicos en animales transg&eacute;nicos. Una de las mejores soluciones para este problema puede ser el uso del sistema de la expresi&oacute;n del gen controlable. En este estudio, usando vectores de retrovirus dise&ntilde;ados para expresar el gen de la prote&iacute;na verde fluorescente mejorada (EGFP) bajo el control del promotor inducible por tetraciclina, examinamos si la expresi&oacute;n del transg&eacute;n podr&iacute;a ser controlable en fibroblastos c&eacute;lulas y embriones de la transferencia nuclear (NT) de porcino. C&eacute;lulas transformadas fibroblastos fueron cultivadas en medio suplementado con o sin la doxiciclina (una an&aacute;loga de la tetraciclina) por 48 horas y la eficacia de la inducci&oacute;n se midi&oacute; mediante la comparaci&oacute;n de la expresi&oacute;n g&eacute;nica EGFP utilizando microscop&iacute;a de epifluorescencia y Western y Northern blot an&aacute;lisis. Despu&eacute;s de la adici&oacute;n de doxiciclina, EGFP expresi&oacute;n aumentada hasta fueron. Los n&uacute;cleos de c&eacute;lulas transformadas fibroblastos fueron transferidos en ovocitos anucleadas. Datos de emisi&oacute;n de fluorescencia revelaron fuerte expresi&oacute;n g&eacute;nica EGFP en embriones cultivados con doxiciclina, pero poca o ninguna expresi&oacute;n en la ausencia del antibi&oacute;tico. Nuestros resultados demuestran la regulaci&oacute;n exitosa de expresi&oacute;n del transg&eacute;n en embriones de porcino de transferencia nuclear y apoyan la aplicaci&oacute;n de un sistema de expresi&oacute;n inducible en producci&oacute;n de cerdos transg&eacute;nicos para resolver los problemas inherentes de los efectos secundarios debido a la expresi&oacute;n constitutiva del transg&eacute;n.

Expresi&oacute;n g&eacute;nica tetraciclina-inducible en embriones de transferencia nuclear derivado de fibroblastos fetales porcinos transformados con vectores de retrovirus.

&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x95EE;&#x9898;&#x662F;&#x4E0D;&#x53D7;&#x63A7;&#x5236;&#x5730;&#x6784;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5916;&#x56FD;&#xFF0C;&#x5076;&#x5C14;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x969C;&#x788D;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6210;&#x529F;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x56DB;&#x73AF;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x7684;&#x4FC3;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x6210;&#x7D20; (&#x6CB3;&#x5761;) &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x9E21;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x83AB;&#x6D1B;&#x5C3C;&#x9F20;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x75C5;&#x6BD2; (MoMLV)-&#x57FA;&#x4E8E;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53; encapsidated &#x4E0E;&#x6C34;&#x6CE1;&#x6027;&#x53E3;&#x708E;&#x75C5;&#x6BD2; G &#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (&#x65E0;&#x58F0;-G) &#x6709;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x5C04; unincubated &#x7684;&#x9E21;&#x80DA; (&#x9636;&#x6BB5; X) &#x86CB;&#x6E05;&#x7684;&#x4E0B;&#x65B9;&#x3002;&#x4ECE; 198 &#x6CE8;&#x5165;&#x86CB;&#x3001; &#x5B75; 21 &#x5929;&#x7684;&#x6F5C;&#x4F0F;&#x671F;&#x540E; 15 &#x9E21;&#x548C; 14 &#x51FA;&#x751F;&#x7684;&#x5C0F;&#x9E21;&#x8868;&#x793A;&#x5411;&#x91CF;&#x7F16;&#x7801;&#x6CB3;&#x5761;&#x57FA;&#x56E0;&#x5F53;&#x5582;&#x5F3A;&#x529B;&#x9709;&#x7D20;&#x3001; &#x56DB;&#x73AF;&#x7D20;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EFB;&#x4F55;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#x3002;&#x6CB3;&#x5761;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4ECE;&#x996E;&#x98DF;&#x4E2D;&#x5220;&#x9664;&#x591A;&#x897F;&#x73AF;&#x7D20;&#x6062;&#x590D;&#x5230; pre-induction &#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x9E21;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x6CB3;&#x5761;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x662F;&#x5E02;&#x9762; CHO &#x7EC6;&#x80DE;&#x6E90;&#x6027;&#x6CB3;&#x5761;&#x76F8;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x3002;G1 &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x9E21;&#x4EA7;&#x751F;&#x8FC7;&#x9A6C;&#x8DEF; G0 &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x516C;&#x9E21;&#x4E0E;&#x975E;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6BCD;&#x9E21;&#x4E5F;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6210;&#x529F;&#x751F;&#x6B96;&#x4F20;&#x64AD;&#x3002;&#x56DB;&#x73AF;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6CB3;&#x5761;&#x4E5F;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8840;&#x6DB2;&#x548C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x9E21;&#x5375;&#x4E2D;&#x3002;

&#x4FC3;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x6210;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x9E21;&#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#x56DB;&#x73AF;&#x7D20;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;

A critical problem in the production of transgenic animals is the uncontrolled constitutive expression of the foreign gene, which occasionally results in serious physiological disorders in the transgenic animal. In this study, we report successful production of transgenic chickens that express the human erythropoietin (hEPO) gene under the control of a tetracycline-inducible promoter. A recombinant Moloney murine leukemia virus (MoMLV)-based retrovirus vector encapsidated with vesicular stomatitis virus G glycoprotein (VSV-G) was injected beneath the blastoderm of unincubated chicken embryos (stage X). Out of 198 injected eggs, 15 chicks hatched after 21 days of incubation and 14 hatched chicks expressed the vector-encoded hEPO gene when fed doxycycline, a tetracycline derivative, without any significant physiological dysfunctions. The expression of hEPO reverted to the pre-induction state by removing doxycycline from the diet. The biological activity of the hEPO produced in the transgenic chickens was comparable to commercially available CHO cell-derived hEPO. Successful germline transmission of the transgene was also confirmed in G1 transgenic chicks produced from crossing G0 transgenic roosters with non-transgenic hens. Tetracycline-inducible expression of the hEPO gene was also confirmed in the blood and eggs of the transgenic chickens.

Tetracycline-dependent expression of the human erythropoietin gene in transgenic chickens.

Un probl&egrave;me crucial dans la production d&#39;animaux transg&eacute;niques est l&#39;expression constitutive incontr&ocirc;l&eacute;e du g&egrave;ne &eacute;tranger, entra&icirc;nant parfois des troubles physiologiques graves chez l&#39;animal transg&eacute;nique. Dans cette &eacute;tude, nous rapportons les succ&egrave;s de la production des poulets transg&eacute;niques exprimant le g&egrave;ne de l&#39;&eacute;rythropo&iuml;&eacute;tine humaine (hEPO) sous le contr&ocirc;le d&#39;un promoteur inductible par la t&eacute;tracycline. Un virus recombinant de la leuc&eacute;mie murine Moloney (MoMLV)-base r&eacute;trovirus vecteur encapsid&eacute;s avec la glycoprot&eacute;ine de virus G de la stomatite v&eacute;siculaire (VSV-G) a &eacute;t&eacute; inject&eacute; sous le blastoderme d&#39;embryons de poulet peroxydasique (&eacute;tape X). Hors 198 oeufs inject&eacute;es, 15 poussins &eacute;closent apr&egrave;s 21 jours d&#39;incubation et 14 poussins &eacute;clos exprime le g&egrave;ne vecteur cod&eacute; hEPO quand aliment&eacute; par doxycycline, un d&eacute;riv&eacute; de la t&eacute;tracycline, sans n&#39;importe quel dysfonctionnements physiologiques importants. L&#39;expression de hEPO est revenue &agrave; l&#39;&eacute;tat d&#39;aptitude pr&eacute;alable en enlevant la doxycycline provenant de l&#39;alimentation. L&#39;activit&eacute; biologique de la hEPO produite dans les poulets transg&eacute;niques &eacute;tait comparable &agrave; hEPO de culture cellulaire CHO disponible dans le commerce. Transmission r&eacute;ussie dans les cellules germinales du transg&egrave;ne a &eacute;galement &eacute;t&eacute; confirm&eacute;e chez les poussins transg&eacute;niques G1, produites &agrave; partir de passage G0 transg&eacute;niques coqs avec les poules non transg&eacute;niques. L&#39;expression du g&egrave;ne hEPO inductible par la t&eacute;tracycline a &eacute;galement &eacute;t&eacute; confirm&eacute;e dans le sang et les oeufs des poulets transg&eacute;niques.

Expression de t&eacute;tracycline d&eacute;pendant du g&egrave;ne de l&#39;&eacute;rythropo&iuml;&eacute;tine humaine chez des poulets transg&eacute;niques.

Ein kritisches Problem bei der Herstellung transgener Tiere ist der unkontrollierte konstitutive Ausdruck des ausl&auml;ndischen Gens, was gelegentlich ernste physiologische Erkrankungen in transgenen Tieres f&uuml;hrt. In dieser Studie berichten wir erfolgreiche Herstellung transgener H&uuml;hner, die das menschliche Erythropoetin (hEPO)-Gen unter der Kontrolle der Tetracyclin-inducible F&ouml;rderer Ausdr&uuml;cken. Eine rekombinante Moloney murine Leuk&auml;mievirus (MoMLV)-basierte Retrovirus-Vektor Encapsidated mit vesikul&auml;re Stomatitis Virus G Glykoprotein (VSV-G) wurde unter der Blastoderm des unincubated H&uuml;hnerembryos (B&uuml;hne X) injiziert. Aus 198 injizierten Eier, 15 K&uuml;ken ausgebr&uuml;tet nach 21 Tagen Inkubationszeit und 14 geschl&uuml;pften K&uuml;ken ausgedr&uuml;ckt das Vektor-codierte hEPO-gen bei Doxycyclin, ein Tetracyclin-Derivat, ohne jede signifikanten physiologischen Dysfunktionen. Der Ausdruck von hEPO zur&uuml;ckgesetzt auf den pre-induction Zustand durch Doxycyclin aus der Nahrung zu entfernen. Die biologische Aktivit&auml;t der hEPO produziert in der transgenen H&uuml;hner war vergleichbar mit handels&uuml;blichen CHO Cell-derived hEPO. Erfolgreiche Germline &Uuml;bertragung der Transgene best&auml;tigte auch in G1 transgene K&uuml;ken aus Kreuzung transgener G0-H&auml;hne mit nicht-transgenen H&uuml;hner hergestellt. Tetracyclin-inducible Expression des Gens hEPO best&auml;tigte auch das Blut und die Eier der transgenen H&uuml;hner.

Tetracyclin-abh&auml;ngigen Ausdruck im menschliche Erythropoetin-gen in transgenen H&uuml;hner.

Un problema critico nella produzione di animali transgenici &egrave; incontrollata espressione costitutiva del gene straniero, che occasionalmente provoca gravi disturbi fisiologici nell&#39;animale transgenico. In questo studio, segnaliamo la produzione di successo di polli transgenici che esprimono il gene umano eritropoietina (hEPO) sotto il controllo di un promotore inducibile tetraciclina. Un virus di leucemia murina di Moloney ricombinante (MoMLV)-retrovirus base vettoriale incapsidato con glicoproteina G virus di stomatite vescicolare (VSV-G) &egrave; stato iniettato sotto il blastoderma di embrioni di pollo unincubated (fase X). Fuori le uova iniettate 198, 15 pulcini nati dopo 21 giorni di incubazione e pulcini nati 14 espresso il gene codifica vettoriale hEPO quando alimentato doxiciclina, un derivato di tetraciclina, senza eventuali disfunzioni fisiologiche significative. L&#39;espressione di hEPO ripristinato allo stato pre-induction rimuovendo doxiciclina dalla dieta. L&#39;attivit&agrave; biologica di hEPO prodotto in polli transgenici era paragonabile a hEPO cellule derivate CHO commercialmente disponibile. Successo germline trasmissione del transgene &egrave; stato confermato anche in G1 pulcini transgeniche prodotte dall&#39;incrocio G0 transgenici Galli con galline non transgeniche. Tetraciclina-inducible espressione del gene hEPO &egrave; stato confermato anche nel sangue e le uova dei polli transgenici.

Espressione di tetraciclina-dipendente del gene umano eritropoietina in polli transgenici.

&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x91CD;&#x5927;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x306F;&#x3001;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0D;&#x80FD;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x5F0F;&#x306E;&#x5916;&#x56FD;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x6642;&#x6298;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x3067;&#x30D2;&#x30C8; &#x30FB; &#x30A8;&#x30EA;&#x30B9;&#x30ED;&#x30DD;&#x30A8;&#x30C1;&#x30F3; (&#x4F75;&#x7528;) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8868;&#x73FE;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x306E;&#x9D8F;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30E2;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (MoMLV)-&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x6C34;&#x75B1;&#x6027;&#x53E3;&#x5185;&#x708E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; G &#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; &#xFF08;VSV G&#xFF09; &#x3068; unincubated &#x306E;&#x9D8F;&#x80DA; &#xFF08;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8; X&#xFF09; &#x306E;&#x80DA;&#x76E4;&#x306E;&#x4E0B;&#x306B;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;198 &#x306E;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5375;&#x306E;&#x3046;&#x3061; 15 &#x306E;&#x96DB;&#x5B75;&#x5316;&#x5F8C; 21 &#x65E5;&#x5B75;&#x5316;&#x3001;14 &#x306B;&#x5B75;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x96DB;&#x8868;&#x73FE;&#x3068;&#x304D;&#x4F9B;&#x7D66;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x4F75;&#x7528;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5168;&#x306A;&#x3057;&#x3002;&#x4F75;&#x7528;&#x306E;&#x5F0F;&#x5316;&#x524D;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x98DF;&#x4E8B;&#x304B;&#x3089;&#x524A;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5143;&#x306B;&#x623B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x9D8F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x751F;&#x7523;&#x4F75;&#x7528;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x5E02;&#x8CA9;&#x306E;&#x753A;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x4F75;&#x7528;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6210;&#x529F;&#x3001;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x6A2A;&#x65AD; G0 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30AA;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x3068;&#x975E;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x9D8F;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x7523; G1 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x96DB;&#x3067;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F75;&#x7528;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x6DB2;&#x3084;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x9D8F;&#x306E;&#x5375;&#x306B;&#x3082;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8; &#x30FB; &#x30A8;&#x30EA;&#x30B9;&#x30ED;&#x30DD;&#x30A8;&#x30C1;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x9D8F;&#x306E;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x5F0F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;&#xB294; &#xB54C;&#xB54C;&#xB85C; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC7A5;&#xC560; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC678;&#xB798; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD1B5;&#xC81C; &#xC81C;&#xC815; &#xD45C;&#xD604; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD56D;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC9C8;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD1B5;&#xC81C; &#xC778;&#xAC04; erythropoietin (hEPO) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB2ED;&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; Moloney murine &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (MoMLV)-vesicular &#xAD6C; &#xC5FC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; G &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (VSV-G)&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xB808;&#xD2B8;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCA1;&#xD130; encapsidated unincubated &#xB2ED; &#xBC30;&#xC544; (&#xB2E8;&#xACC4; X) blastoderm &#xC544;&#xB798; &#xC8FC;&#xC785; &#xD588;&#xB2E4;. 198 &#xC0BD;&#xC785; &#xB41C; &#xACC4;&#xB780;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD80; &#xD654; 21 &#xC77C; &#xD6C4; &#xBD80; &#xD654; 15 &#xC5EC;&#xC790;&#xC640; 14 &#xBE57;&#xAE08;&#xB41C; &#xC0C8;&#xB07C; &#xBA39; &#xC77C; &#xB54C; &#xBCA1;&#xD130; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; hEPO &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604; doxycycline, &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC7A5;&#xC560; &#xC5C6;&#xC774; &#xD56D;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC9C8; &#xD30C;&#xC0DD;. HEPO &#xC2DD; &#xC544;&#xBAA9;&#xC2DC;&#xC2E4;&#xB9B0;&#xACFC; &#xC2DD;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558; &#xC5EC; pre-induction &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xB418;&#xB3CC;&#xC544;&#xAC11;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB2ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; Hepo&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC0C1;&#xC6A9; &#xC870; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xB798; Hepo&#xB97C; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xB2E4;. Transgene&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC804;&#xC1A1; &#xB610;&#xD55C; g 1 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB85C;&#xB9AC;&#xD0C0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xBE44; &#xC554; &#xD0C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC74;&#xB108; G0 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB2ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4;. HEPO &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD56D;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC9C8;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD45C;&#xC815; &#xB610;&#xD55C; &#xD608;&#xC561; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB2ED;&#xC758; &#xB2EC;&#xAC40;&#xC5D0; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4;.

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB2ED;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04; erythropoietin &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD56D;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC9C8; &#xC885;&#xC18D; &#xD45C;&#xD604;.

Un problema cr&iacute;tico en la producci&oacute;n de animales transg&eacute;nicos es la expresi&oacute;n constitutiva incontrolada del gene del extranjero, que en ocasiones da lugar a graves trastornos fisiol&oacute;gicos en el animal transg&eacute;nico. En este estudio, divulgamos la exitosa producci&oacute;n de pollos transg&eacute;nicos que expresan el gen de la eritropoyetina humana (hEPO) bajo el control de un promotor inducible por tetraciclina. Un virus de la leucemia murina de Moloney recombinante (MoMLV)-base de retrovirus vector encapsula con la glicoprote&iacute;na G del virus de la estomatitis vesicular (VSV-G) inyect&oacute; debajo del blastodermo de embriones de pollo unincubated (etapa X). De 198 huevos inyectados, 15 pollos nacieron despu&eacute;s de 21 d&iacute;as de incubaci&oacute;n y 14 pollitos eclosionados expresaron el gen codificado en vector hEPO cuando alimenta doxiciclina, un derivado de la tetraciclina, sin cualquier disfunciones fisiol&oacute;gicas significativas. La expresi&oacute;n de hEPO revirti&oacute; al estado pre-induction mediante la eliminaci&oacute;n de la dieta de doxiciclina. La actividad biol&oacute;gica de la hEPO producido en los pollos transg&eacute;nicos era comparable al disponible en el mercado CHO c&eacute;lula-derivados hEPO. Transmisi&oacute;n exitosa del germline del transg&eacute;n tambi&eacute;n fue confirmada en G1 pollos transg&eacute;nicos producidos a partir de traves&iacute;a G0 transg&eacute;nicos gallos con las gallinas no transg&eacute;nicas. Tetraciclina-inducible expresi&oacute;n del gen hEPO tambi&eacute;n fue confirmada en la sangre y los huevos de las gallinas transg&eacute;nicas.

Tetraciclina-dependiente de la expresi&oacute;n del gen eritropoyetina humana en pollos transg&eacute;nicos.

&#x80CC;&#x666F;&#xFF1A; &#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x884D;&#x751F;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; &beta; (PDGFRbeta) &#x662F;&#x5DF2;&#x77E5;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x8840;&#x7BA1;&#x53D1;&#x5C55;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4F18;&#x79C0;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x5177;&#x4F53;&#x76D1;&#x7BA1;&#x8005;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x5C1A;&#x672A;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x884D;&#x751F;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8840;&#x7BA1;&#x81EA;&#x4E3B;&#x5728;&#x5176;&#x4ED6;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x54EA;&#x4E2A; PDGFRbeta &#x51FD;&#x6570;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x7684;&#x58C1;&#x753B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5C1A;&#x672A;&#x5728; 72 &#x5C0F;&#x65F6;&#x540E;&#x65BD;&#x80A5;&#x6BD4;&#x5E74;&#x8F7B;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;/&#x4E3B;&#x8981;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF1A; &#x8C03;&#x67E5;&#x7684; PDGFRbeta &#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x8840;&#x7BA1;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x514B;&#x9686; PDGFRbeta &#x7684;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x540C;&#x6E90;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; pdgfrbeta hypochord &#x8868;&#x793A;&#xFF0C;&#x662F;&#x7ACB;&#x5373;&#x80CC;&#x5230;&#x80CC;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;&#x548C;&#x6F5C;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x8C03;&#x8282;&#x8840;&#x7BA1;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CA;&#x5176;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3001; &#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E; PDGFRbeta&#xFF0C;morpholino &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x548C;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781; PDGFRbeta &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EBF;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0; PDGFRbeta &#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x8282;&#x95F4;&#x7684;&#x8239;&#x53EA;&#x3002;&#x610F;&#x4E49;/&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF1A; &#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x63D0;&#x4F9B; PDGFRbeta &#x4FE1;&#x53F7;&#x662F;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5BF9;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C; PDGFRbeta &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282;&#x8840;&#x7BA1;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CA1;&#x6709;&#x7684;&#x65B0;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x884D;&#x751F;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; &beta; &#x662F;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x8282;&#x95F4;&#x8840;&#x7BA1;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

BACKGROUND: Platelet-derived growth factor receptor beta (PDGFRbeta) is a tyrosine kinase receptor known to affect vascular development. The zebrafish is an excellent model to study specific regulators of vascular development, yet the role of PDGF signaling has not been determined in early zebrafish embryos. Furthermore, vascular mural cells, in which PDGFRbeta functions cell autonomously in other systems, have not been identified in zebrafish embryos younger than 72 hours post fertilization. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: In order to investigate the role of PDGFRbeta in zebrafish vascular development, we cloned the highly conserved zebrafish homolog of PDGFRbeta. We found that pdgfrbeta is expressed in the hypochord, a developmental structure that is immediately dorsal to the dorsal aorta and potentially regulates blood vessel development in the zebrafish. Using a PDGFR tyrosine kinase inhibitor, a morpholino oligonucleotide specific to PDGFRbeta, and a dominant negative PDGFRbeta transgenic line, we found that PDGFRbeta is necessary for angiogenesis of the intersegmental vessels. SIGNIFICANCE/CONCLUSION: Our data provide the first evidence that PDGFRbeta signaling is required for zebrafish angiogenesis. We propose a novel mechanism for zebrafish PDGFRbeta signaling that regulates vascular angiogenesis in the absence of mural cells.

Platelet-derived growth factor receptor beta is critical for zebrafish intersegmental vessel formation.

Rappel des faits : B&ecirc;ta de r&eacute;cepteur de facteur de croissance d&eacute;riv&eacute; des plaquettes (PDGFRbeta) est un r&eacute;cepteur tyrosine kinase susceptibles d&#39;affecter le d&eacute;veloppement vasculaire. Le poisson-z&egrave;bre est un excellent mod&egrave;le pour &eacute;tudier les r&eacute;gulateurs sp&eacute;cifiques du d&eacute;veloppement vasculaire, mais le r&ocirc;le du PDGF signalisation n&#39;a pas &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute; dans des embryons de poisson-z&egrave;bre pr&eacute;coce. En outre, les cellules vasculaires murales, dans la cellule autonome dans d&#39;autres syst&egrave;mes, fonctions PDGFRbeta n&#39;ont pas &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s dans des embryons de poisson-z&egrave;bre &acirc;g&eacute;s de moins de 72 heures apr&egrave;s la f&eacute;condation. M&Eacute;THODOLOGIE/principales constatations : Afin d&#39;enqu&ecirc;ter sur le r&ocirc;le de PDGFRbeta dans le d&eacute;veloppement vasculaire de poisson-z&egrave;bre, nous avons clon&eacute; l&#39;homologue zebrafish hautement conserv&eacute;e de la PDGFRbeta. Nous avons trouv&eacute; que pdgfrbeta s&#39;exprime dans la hypochord, une structure de d&eacute;veloppement qui est imm&eacute;diatement dorsale &agrave; l&#39;aorte dorsale et potentiellement r&eacute;gule le d&eacute;veloppement de vaisseaux sanguins dans le poisson-z&egrave;bre. &Agrave; l&#39;aide d&#39;un inhibiteur de kinase de tyrosine PDGFR, un oligonucl&eacute;otide morpholino sp&eacute;cifique &agrave; PDGFRbeta et une lign&eacute;e transg&eacute;nique dominante PDGFRbeta n&eacute;gatif, nous avons constat&eacute; que PDGFRbeta est n&eacute;cessaire pour l&#39;angiogen&egrave;se des vaisseaux intersegmentaire. SIGNIFICATION/CONCLUSION : Nos r&eacute;sultats fournissent la premi&egrave;re preuve que PDGFRbeta signalisation est n&eacute;cessaire pour l&#39;angiogen&egrave;se zebrafish. Nous vous proposons un nouveau m&eacute;canisme pour le poisson-z&egrave;bre PDGFRbeta signalisation qui r&eacute;gule angiogen&egrave;se vasculaire en l&#39;absence de cellules murales.

B&ecirc;ta de r&eacute;cepteur de facteur de croissance d&eacute;riv&eacute; des plaquettes est critique pour la formation de vaisseaux intersegmentaire zebrafish.

Hintergrund: Platelet-derived Growth Factor Receptor Beta (PDGFRbeta) ist ein Tyrosin Kinase Rezeptor bekannt, dass vaskul&auml;re Entwicklung beeinflussen. Der Zebrab&auml;rbling ist ein hervorragendes Modell spezifische Regulatoren der vaskul&auml;ren Entwicklung zu studieren, doch die Rolle PDGF zu signalisieren, wurde nicht in den fr&uuml;hen Zebrafish Embryos bestimmt. Dar&uuml;ber hinaus wurden vaskul&auml;re Wandbild Zellen, in welche PDGFRbeta Funktionen Zelle autonom in anderen Systemen nicht in den Zebrafish Embryos j&uuml;nger als 72 Stunden Befruchtung post identifiziert. Methodik/PRINCIPAL Ergebnisse: Um die Rolle der PDGFRbeta im Zebrafisch vaskul&auml;re Entwicklung zu untersuchen, geklont wir die stark konservierten Zebrafisch-Homolog von PDGFRbeta. Wir fanden, dass Pdgfrbeta in der Hypochord ausgedr&uuml;ckt, eine entwicklungsbedingte Struktur, die sofort dorsal an der dorsalen Aorta und potenziell regelt Blutgef&auml;&szlig;-Entwicklung in der Zebrab&auml;rbling. Verwenden ein PDGFR Tyrosinkinase-Hemmer, eine Morpholino-Oligonukleotid-speziell f&uuml;r PDGFRbeta und eine dominante negative PDGFRbeta transgene Linie, fanden wir, dass PDGFRbeta f&uuml;r Angiogenese der intersegmental Schiffe notwendig. Bedeutung/Fazit: Unsere Daten liefern die erste Beweise, dass PDGFRbeta Signalisierung f&uuml;r Zebrafisch Angiogenese erforderlich ist. Wir schlagen einen neuen Mechanismus f&uuml;r die Zebrafish PDGFRbeta signalisieren, dass die vaskul&auml;re Angiogenesis in Ermangelung Wandbild Zellen reguliert.

Platelet derived Growth Factor Receptor Beta ist f&uuml;r Zebrafisch intersegmental Schiff Bildung entscheidend.

SFONDO: Fattore di crescita derivato dalle piastrine del recettore beta (PDGFRbeta) &egrave; un recettore di chinasi della tirosina noto per influenzare lo sviluppo vascolare. Il Danio rerio &egrave; un eccellente modello per lo studio specifici dei regolatori di sviluppo vascolare, ancora il ruolo di PDGF segnalazione non &egrave; stato determinato in primi embrioni di zebrafish. Inoltre, cellule vascolari murale, in quale cella di funzioni PDGFRbeta autonomamente in altri sistemi, non sono state identificate nel pi&ugrave; giovani di 72 ore post fecondazione gli embrioni di zebrafish. METODOLOGIA/principali conclusioni: Al fine di indagare il ruolo di PDGFRbeta in zebrafish sviluppo vascolare, abbiamo clonato l&#39;omologo di zebrafish altamente conservata di PDGFRbeta. Abbiamo trovato che pdgfrbeta &egrave; espresso nella hypochord, una struttura evolutiva che &egrave; immediatamente dorsale verso l&#39;aorta dorsale e potenzialmente regola lo sviluppo dei vasi sanguigni in the zebrafish. Utilizzando un inibitore di tirosin chinasi PDGFR, un oligonucleotide oligonucleotides specifico per PDGFRbeta e una linea transgenica dominante negativa PDGFRbeta, abbiamo scoperto che PDGFRbeta &egrave; necessaria per l&#39;angiogenesi dei vasi intersegmentaria. SIGNIFICATO/conclusione: I nostri dati forniscono la prima prova che PDGFRbeta di segnalazione &egrave; necessaria per l&#39;angiogenesi zebrafish. Proponiamo un meccanismo romanzo di zebrafish PDGFRbeta segnalazione che regolamenta l&#39;angiogenesi vascolare in assenza di cellule parietali.

Fattore di crescita derivato dalle piastrine del recettore beta &egrave; critico per la formazione del vaso intersegmentaria zebrafish.

&#x80CC;&#x666F;: &#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x7531;&#x6765;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; &#xFF08;PDGFRbeta&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x7279;&#x5B9A;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x307E;&#x3060; PDGF &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x521D;&#x671F;&#x80DA;&#x3067;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;PDGFRbeta &#x95A2;&#x6570;&#x30BB;&#x30EB;&#x81EA;&#x5F8B;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x7CBE;&#x90F5;&#x4FBF; 72 &#x6642;&#x9593;&#x3088;&#x308A;&#x82E5;&#x3044;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x30FB;&#x4E3B;&#x8981;&#x6240;&#x898B;: &#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x8840;&#x7BA1;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; PDGFRbeta &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;PDGFRbeta &#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7BC0;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x76F8;&#x540C;&#x3092;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;pdgfrbeta hypochord &#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;, &#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x80CC;&#x5074;&#x5927;&#x52D5;&#x8108;&#x3068;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x76F4;&#x3061;&#x306B;&#x80CC;&#x3067;&#x3059;&#x767A;&#x9054;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x2161; &#x76F8;&#x8A66;&#x9A13;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x85AC;&#x3001;PDGFRbeta &#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; morpholino &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x8CA0; PDGFRbeta &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; PDGFRbeta &#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x7E26;&#x543B;&#x5408;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x65B0;&#x751F;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x610F;&#x7FA9;/&#x7D50;&#x8AD6;&#xFF1A; &#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F; PDGFRbeta &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5; PDGFRbeta &#x306F;&#x58C1;&#x753B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.

&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x7531;&#x6765;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &beta; &#x306F;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x9593;&#x306E;&#x7E26;&#x543B;&#x5408;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xBC30;&#xACBD;: &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xC720;&#xB798; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBCA0;&#xD0C0; (PDGFRbeta)&#xC740; &#xD608;&#xAD00; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;. Zebrafish&#xB294; &#xD608;&#xAD00; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB97C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC544;&#xC9C1; &#xCD08;&#xAE30; zebrafish &#xD0DC;&#xC544;&#xC5D0; PDGF &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB2E4;&#xB978; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC790;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; PDGFRbeta &#xD568;&#xC218; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD608;&#xAD00; &#xBCBD; &#xC138;&#xD3EC; 72 &#xC2DC;&#xAC04; &#xAC8C;&#xC2DC;&#xBB3C; &#xC218;&#xC815; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC80A;&#xC740; zebrafish &#xD0DC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC9C0;. &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;/&#xAD50;&#xC7A5; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;: zebrafish &#xD608;&#xAD00; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; Pdgfrbeta&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; Pdgfrbeta&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; zebrafish &#xCCB4; &#xBCF5;&#xC81C;. Pdgfrbeta&#xB294; hypochord &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C;, &#xB4F1; &#xCABD; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5; &#xBC0F; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC989;&#xC2DC; &#xC9C0; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xAD6C;&#xC870; &#xADDC;&#xC81C;&#xB294; zebrafish&#xC758; &#xD608;&#xAD00; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; Pdgfrbeta&#xC740; &#xAC1C;&#xCD95; &#xD608;&#xAD00;&#xC758; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC; PDGFR &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C;, PDGFRbeta, &#xD2B9;&#xC815; morpholino oligonucleotide &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; PDGFRbeta &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC911;&#xC694;&#xC131;/&#xACB0;&#xB860;: &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; PDGFRbeta &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; zebrafish &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Zebrafish PDGFRbeta &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xBCBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xD608;&#xAD00; &#xC2E0;&#xC0DD; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xC720;&#xB798; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBCA0;&#xD0C0; zebrafish &#xAC1C;&#xCD95; &#xD608;&#xAD00; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;.

FONDO: Beta del receptor de factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFRbeta) es un receptor de tirosina cinasa conocido que afectan el desarrollo vascular. El pez cebra es un excelente modelo para el estudio de reguladores espec&iacute;ficos de desarrollo vascular, sin embargo, el papel de la se&ntilde;alizaci&oacute;n de PDGF no ha sido determinado en los primeros embriones de pez cebra. Adem&aacute;s, las c&eacute;lulas vasculares murales, en la que c&eacute;lulas de funciones PDGFRbeta aut&oacute;nomamente en otros sistemas, no han sido identificadas en embriones de pez cebra menores de 72 horas post fertilizaci&oacute;n. METODOLOG&Iacute;A/principales resultados: Para investigar el papel de PDGFRbeta en desarrollo vascular de pez cebra, hemos clonado el hom&oacute;logo del pez cebra altamente conservado de PDGFRbeta. Hemos encontrado que pdgfrbeta se expresa en el hypochord, una estructura de desarrollo que es inmediatamente dorsal a la aorta dorsal y potencialmente regula el desarrollo de vasos sangu&iacute;neos en los peces cebra. Usando un inhibidor de la cinasa de tirosina PDGFR, un Morfolino oligonucle&oacute;tidos espec&iacute;ficos de PDGFRbeta y una l&iacute;nea transg&eacute;nica de PDGFRbeta negativa dominante, encontramos que la PDGFRbeta es necesaria para la angiog&eacute;nesis de los vasos intersegmentales. SIGNIFICADO/conclusi&oacute;n: Nuestros datos proporcionan la primera evidencia que es necesaria para la angiog&eacute;nesis de pez cebra la se&ntilde;alizaci&oacute;n PDGFRbeta. Proponemos un nuevo mecanismo de pez cebra PDGFRbeta se&ntilde;alizaci&oacute;n que regula la angiog&eacute;nesis vascular en la ausencia de c&eacute;lulas murales.

Hyuna Lee

Department of Biomedical Engineering

University of California, Irvine (UCI)

Fabrication of a Microfluidic Device for the Compartmentalization of Neuron Soma and Axons

Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

Non-plasma Bonding of PDMS for Inexpensive Fabrication of Microfluidic Devices