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High Throughput Screening of Fungal Endoglucanase Activity in <em>Escherichia coli</em>

Cellulase enzymes (endoglucanases, cellobiohydrolases, and &beta;-glucosidases) hydrolyze cellulose into component sugars, which in turn can be converted ...

California Institute of Technology

LprG Rv1410c &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x671F;&#x95F4;&#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x751F;&#x5B58;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5F88;&#x5C11;&#x4EBA;&#x4E86;&#x89E3;&#x5176;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;LprG&#xFF0C;Rv1410c &#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x4E3B;&#x8981;&#x4E3B;&#x6301;&#x4EBA;&#x5BB6;&#x65CF;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x8F6C;&#x8FD0; 55 &#x9875;&#x3002;55 &#x9875;&#x53EF;&#x80FD;&#x51FA;&#x53E3;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x4EE5;&#x5916;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F46; LprG &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x8FD8;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5220;&#x9664;&#x5728;&#x803B;&#x57A2;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x662F;&#x6EB4;&#x5316;&#xFF0C;&#x66F4;&#x5BB9;&#x6613;&#x548C;&#x8010;&#x836F;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x4ECE;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x7531;&#x6062;&#x590D;&#x3002;&#x591A;&#x836F;&#x8010;&#x836F;&#x6CF5;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5229;&#x8840;&#x5E73;&#x6291;&#x5236;&#x6EB4;&#x5316;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5206;&#x679D;&#x548C;&#x8865;&#x5145;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE; 55 &#x9875;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8D1F;&#x8D23;&#x8010;&#x836F;&#x548C;&#x6EB4;&#x5316;&#x662F; 55 &#x9875;&#x65B0;&#x578B;&#x57FA;&#x8D28;&#x4E2D;&#x7684;&#x6297;&#x6027;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x5BF9;&#x6EB4;&#x5316;&#x8FC7;&#x654F;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F; lprG Rv1410c &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x5F02;&#x5E38;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x6709;&#x7455;&#x75B5;&#x7684;&#x6ED1;&#x52A8;&#x529B;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x6210;&#x5206;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6EB4;&#x5316;&#x6EB4;&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x6027;&#x80FD;&#x8981;&#x6C42;&#x529F;&#x80FD; 55 &#x9875;&#x548C; LprG&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x65E2;&#x4E0D;&#x5355;&#x72EC;&#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x6062;&#x590D;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7F3A;&#x5931;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;55 &#x9875;&#x9700;&#x8981;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x4E3B;&#x8981;&#x4E3B;&#x6301;&#x4EBA;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6CF5;&#x9700;&#x8981;&#x5173;&#x8054;&#x819C;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

The lprG-Rv1410c operon is critical for the survival of Mycobacterium tuberculosis during infection, but very little is known about the functions of its proteins. LprG is a lipoprotein, and Rv1410c encodes the major facilitator superfamily small molecule transporter P55. P55 likely exports small molecules outside of the bacterial cell, but the function of LprG is unclear. A deletion of the homologous operon in Mycobacterium smegmatis is more susceptible to ethidium bromide, and drug resistance is restored by the intact operon from M. tuberculosis. The multidrug resistance pump inhibitor reserpine inhibits resistance to ethidium bromide in both wild-type M. smegmatis and the complemented mutant, suggesting that P55-mediated transport is responsible for drug resistance and that ethidium bromide is a novel substrate for P55. In addition to hypersensitivity to ethidium bromide, cells that lack the lprG-Rv1410c operon display abnormal colony morphology and are defective for sliding motility, properties that suggest an alteration of cell wall composition. Strikingly, both ethidium bromide transport and normal cell surface properties require functional P55 and LprG, as neither alone is sufficient to restore function to the deletion mutant. Thus, P55 requires the cell surface lipoprotein for normal function.

Function of a mycobacterial major facilitator superfamily pump requires a membrane-associated lipoprotein.

L&#39;op&eacute;ron lprG-Rv1410c est critique pour la survie de Mycobacterium tuberculosis pendant l&#39;infection, mais on en sait peu sur les fonctions de ses prot&eacute;ines. LprG est une lipoprot&eacute;ine et Rv1410c code pour le transporteur de petites mol&eacute;cules de superfamille de facilitateur majeur P55. P55 probable exporte de petites mol&eacute;cules &agrave; l&#39;ext&eacute;rieur de la cellule bact&eacute;rienne, mais la fonction de LprG n&#39;est pas claire. Une d&eacute;l&eacute;tion de l&#39;op&eacute;ron homologue chez Mycobacterium smegmatis est plus sensible au bromure d&#39;&eacute;thidium, et la r&eacute;sistance aux m&eacute;dicaments est restaur&eacute;e par l&#39;op&eacute;ron intacte de M. tuberculosis. La r&eacute;serpine d&#39;inhibiteur de pompe multir&eacute;sistance inhibe la r&eacute;sistance au bromure d&#39;&eacute;thidium dans sauvage M. smegmatis et le mutant compl&eacute;t&eacute;, ce qui sugg&egrave;re que le P55-mediated transport est responsable de la r&eacute;sistance aux m&eacute;dicaments et que le bromure d&#39;&eacute;thidium est un nouveau substrat pour P55. En plus de l&#39;hypersensibilit&eacute; au bromure d&#39;&eacute;thidium, cellules qui n&#39;ont pas l&#39;op&eacute;ron lprG-Rv1410c affichent la morphologie anormale de colonie et sont d&eacute;fectueuses pour le glissement de la motilit&eacute;, propri&eacute;t&eacute;s qui sugg&egrave;rent une alt&eacute;ration de la composition de la paroi cellulaire. &Eacute;tonnamment, transport de bromure d&#39;&eacute;thidium et propri&eacute;t&eacute;s de surface de cellules normales exigent tous deux fonctionnels P55 et LprG, comme aucun seul est suffisant pour r&eacute;tablir la fonction pour le mutant de d&eacute;l&eacute;tion. P55 n&eacute;cessite donc la lipoprot&eacute;ine de surface cellulaire pour fonctionner normalement.

Fonction d&#39;une pompe de superfamille mycobact&eacute;rienne facilitateur majeur n&eacute;cessite une lipoprot&eacute;ine associ&eacute;es aux membranes.

Die LprG-Rv1410c-Operon ist entscheidend f&uuml;r das &Uuml;berleben von Mycobacterium Tuberculosis w&auml;hrend der Infektion, aber wenig ist bekannt &uuml;ber die Funktionen seiner Proteine. LprG ist ein Lipoprotein und Rv1410c codiert den wichtigsten Vermittler &Uuml;berfamilie niedermolekularer Transporter P55. P55 wahrscheinlich exportiert kleine Molek&uuml;le au&szlig;erhalb der bakteriellen Zelle, aber die Funktion des LprG ist unklar. Eine L&ouml;schung der homologen Operon in Mycobacterium Smegmatis ist anf&auml;lliger f&uuml;r Ethidiumbromid und Resistenzen durch die intakte Operon M. Tuberkulose wiederhergestellt wird. Das erfolgt mit breiter Widerstand Pumpe Inhibitor Reserpin hemmt Widerstand gegen Ethidiumbromid in Wildtyp M. Smegmatis und die erg&auml;nzten Mutant, was darauf hindeutet, dass P55-vermittelten Transport f&uuml;r Resistenzen verantwortlich ist und dass Ethidiumbromid ein neuartiges Substrat f&uuml;r P55 ist. Neben &Uuml;berempfindlichkeit gegen &Auml;thidiumbromid Zellen, in denen die LprG-Rv1410c-Operon mangelt zeigen abnorme Kolonie Morphologie und schadhaft f&uuml;r Schiebet&uuml;ren Motilit&auml;t, Eigenschaften, die eine &Auml;nderung der Zusammensetzung der Zellwand vorschlagen. Auff&auml;llig ist, erfordern Ethidiumbromid Bromid Transport und normaler Zellen Oberfl&auml;cheneigenschaften funktionale P55 und LprG, da weder alleine ausreichend auf die L&ouml;schung-Mutant Funktion herstellen. So erfordert die P55 f&uuml;r normale Funktion der Zelle Oberfl&auml;che Lipoprotein.

Funktion einer mykobakterieller wichtigen Vermittler &Uuml;berfamilie Pumpe erfordert eine Membran-assoziierte Lipoprotein.

L&#39;operone lprG-Rv1410c &egrave; fondamentale per la sopravvivenza del Mycobacterium tuberculosis durante l&#39;infezione, ma molto poco si sa circa le funzioni delle sue proteine. LprG &egrave; una lipoproteina, e Rv1410c codifica per il trasportatore di piccola molecola Superfamiglia facilitatore principali P55. P55 probabile Esporta piccole molecole di fuori della cellula batterica, ma la funzione di LprG non &egrave; chiara. La cancellazione dell&#39;operone omologhe in Mycobacterium smegmatis &egrave; pi&ugrave; suscettibile di bromuro di etidio, e resistenza ai farmaci &egrave; restaurato da operone intatto da M. tuberculosis. La reserpina multidrug resistenza pompa inibitore inibisce la resistenza per il bromuro di etidio nel selvaggio-tipo M. smegmatis sia il mutante complementato, suggerendo che trasporto P55-mediata &egrave; responsabile della resistenza ai farmaci e che il bromuro di etidio &egrave; un substrato romanzo per P55. Oltre all&#39;ipersensibilit&agrave; al bromuro di etidio, cellule che mancano l&#39;operone lprG-Rv1410c visualizzare morfologia anomala Colonia e sono difettose per scorrevoli motilit&agrave;, propriet&agrave; che suggeriscono un&#39;alterazione della composizione della parete cellulare. Sorprendentemente, sia trasporto di bromuro di etidio e propriet&agrave; della superficie delle cellule normali richiedono funzionale P55 e LprG, come da sola non &egrave; sufficiente a ripristinare la funzione per il mutante di delezione. Quindi, P55 richiede le lipoproteine di superficie delle cellule per la normale funzione.

Funzione di una pompa di Superfamiglia micobatterica principali facilitatore richiede una lipoproteina associata di membrana.

LprG Rv1410c &#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x4E2D;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x305D;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;LprG&#x3001;&#x30EA;&#x30DD;&#x86CB;&#x767D;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;Rv1410c &#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B7;&#x30EA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; P55 &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;P55 &#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x8F38;&#x51FA;&#x304C;&#x3001;LprG &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30E9;&#x30D3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x76F8;&#x540C;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306F;&#x81ED;&#x5316;&#x30A8;&#x30C1;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x3067;&#x3001;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x7D50;&#x6838;&#x304B;&#x3089;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30EC;&#x30BB;&#x30EB;&#x30D4;&#x30F3;&#x81ED;&#x5316;&#x30A8;&#x30C1;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; M. smegmatis &#x304A;&#x3088;&#x3073; P55 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x3092;&#x62C5;&#x5F53;&#x3057;&#x81ED;&#x5316;&#x30A8;&#x30C1;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0; P55 &#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x88DC;&#x5B8C;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x81ED;&#x5316;&#x30A8;&#x30C1;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x904E;&#x654F;&#x75C7;&#x3001;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066; lprG Rv1410c &#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x3082;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3059;&#x9A5A;&#x304F;&#x307B;&#x3069;&#x3001;&#x30A8;&#x30C1;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0; &#x30D6;&#x30ED;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C9; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7279;&#x6027;&#x6A5F;&#x80FD; P55 &#x3068; LprG &#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;P55 &#x30BB;&#x30EB;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x30EA;&#x30DD;&#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x6297;&#x9178;&#x83CC;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B7;&#x30EA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC; &#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x819C;&#x6E96;&#x306E;&#x30EA;&#x30DD;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

LprG Rv1410c &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xB3D9;&#xC548; &#xAC10;&#xC5FC;, &#xACB0;&#xD575;&#xADE0;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC544;&#xC8FC; &#xC57D;&#xAC04;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. Lprg&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31; &#xC774;&#xBA70; Rv1410c &#xC8FC;&#xC694; &#xAE30;&#xD68D;&#xC790; superfamily &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; P55 &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. P55 &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC218;&#xCD9C; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC16; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; Lprg&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;. Mycobacterium smegmatis&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC885; &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xB294; &#xBE0C;&#xB85C;&#xBBFC; &#xD654;&#xC5D0; &#xB354; &#xCDE8;&#xC57D; &#xD558; &#xACE0; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC131; M. &#xACB0;&#xD575;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Multidrug &#xC800;&#xD56D;&#xC740; &#xD38C;&#xD504; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; reserpine &#xBE0C;&#xB85C;&#xBBFC; &#xD654; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; M. smegmatis&#xC640; P55 &#xC911;&#xC7AC; &#xC804;&#xC1A1; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC800;&#xD56D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC740; &#xBE0C;&#xB85C;&#xBBFC; &#xD654;&#xC5D0; &#xD2F0; &#xB4D0; p55&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xD310;&#xC740; &#xC81C;&#xC548; &#xBCF4;&#xCDA9;&#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xBE0C;&#xB85C;&#xBBFC; &#xD654;&#xC5D0; &#xD2F0; &#xB4D0;&#xC5D0; &#xACFC;&#xBBFC; &#xC99D;, &#xC678; &#xC140; lprG Rv1410c &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC774; &#xBD80;&#xC871; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB529; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131;, &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xAD6C;&#xC131;&#xC758; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC18D;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C;, &#xBE0C;&#xB85C;&#xBBFC; &#xD654;&#xC5D0; &#xD2F0; &#xB4D0; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xC815;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xD2B9;&#xC131; &#xD544;&#xC694; P55 &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; LprG, &#xB098;&#xB3C4; &#xD63C;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xB97C; &#xBCF5;&#xC6D0;&#xD560; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, P55 &#xC815;&#xC0C1; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC774; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Mycobacterial &#xC8FC;&#xC694; &#xAE30;&#xD68D;&#xC790; superfamily &#xD38C;&#xD504;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC774; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El oper&oacute;n de lprG-Rv1410c es cr&iacute;tico para la supervivencia de Mycobacterium tuberculosis durante la infecci&oacute;n, pero se conoce muy poco acerca de las funciones de sus prote&iacute;nas. LprG es una lipoprote&iacute;na, y Rv1410c codifica el transportador de peque&ntilde;a mol&eacute;cula importante facilitador Superfamilia P55. P55 probablemente exportaciones peque&ntilde;as mol&eacute;culas fuera de la c&eacute;lula bacteriana, pero desconoce la funci&oacute;n de LprG. Una canceladura del operon hom&oacute;logo en Mycobacterium smegmatis es m&aacute;s susceptible a bromuro de etidio, y resistencia a los medicamentos es restaurada por el oper&oacute;n intacto de M. tuberculosis. La reserpina de inhibidor de la bomba de multirresistencia inhibe la resistencia a bromuro de etidio en salvaje-tipo M. smegmatis y el mutante complementado, sugiriendo que transporte P55-mediada es responsable de la resistencia a los medicamentos y que el bromuro de etidio es un sustrato novela para P55. Adem&aacute;s de hipersensibilidad al bromuro de etidio, c&eacute;lulas que carecen el oper&oacute;n de lprG-Rv1410c Mostrar la morfolog&iacute;a de las colonias anormales y son defectuosas para el desplazamiento de la motilidad, propiedades que sugieren una alteraci&oacute;n de la composici&oacute;n de la pared celular. Sorprendentemente, tanto transporte de bromuro de etidio y propiedades superficiales de la c&eacute;lula normal requieren funcional P55 y LprG, ya no solo es suficiente para restaurar la funci&oacute;n a los mutantes de deleci&oacute;n. As&iacute;, P55 requiere la lipoprote&iacute;na superficial de la c&eacute;lula para la funci&oacute;n normal.

Funci&oacute;n de una bomba de la superfamilia de micobacterias facilitador principal requiere una lipoprote&iacute;na asociada a membrana.

&#x65E0;&#x8BBA;&#x8DDD;&#x79BB;&#x7684;&#x8FDC;&#x8FD1;&#x6709;&#x5173;&#x548C; nonrelated &#x57FA;&#x56E0;&#x91CD;&#x7EC4;&#x662F;&#x5F88;&#x96BE;&#x7528;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x57FA;&#x4E8E;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8D70;&#x4E0B;&#x5761;&#x5E8F;&#x5217;&#x5E27;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3001; &#x5220;&#x9664;&#x548C;&#x63D2;&#x5165;&#x64CD;&#x4F5C;&#x7531;&#x4E8E;&#x5F88;&#x5927;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x6B64;&#x5355;&#x5143;&#x63CF;&#x8FF0;&#x521B;&#x5EFA;&#x56FE;&#x4E66;&#x9986;&#x7684;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x901A;&#x8FC7;&#x57FA;&#x56E0;&#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5B83;&#x5141;&#x8BB8;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4EFB;&#x4F55;&#x8EAB;&#x4EFD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x9009;&#x62E9;&#x91CD;&#x7EC4;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;&#x7EC4;&#x5408;&#x91CD;&#x7EC4;&#x88AB;&#x901A;&#x8FC7;&#x751F;&#x6210;&#x4E0E;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x5EF6;&#x4F38;&#x6216;&#x7C98;&#x6027;&#x672B;&#x7AEF;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7247;&#x6BB5;&#x3002;&#x6311;&#x81C2;&#x5141;&#x8BB8;&#x7247;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x5141;&#x8BB8;&#x72EC;&#x7ACB;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x5177;&#x6709;&#x76F8;&#x540C;&#x5EF6;&#x4F38;&#x5757;&#x88AB;&#x6253;&#x7ED3;&#x6309;&#x6B63;&#x786E;&#x7684;&#x987A;&#x5E8F;&#x3002;&#x53EA;&#x8981;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5206;&#x4EAB; 3 &#x5230; 5 &#x4E2A;&#x78B1;&#x57FA;&#x7684;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5730;&#x76D8;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x91CD;&#x7EC4;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;&#x8BE5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x7B80;&#x5355;&#x4FEE;&#x6539;&#x5141;&#x8BB8;&#x7EB3;&#x5165;&#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7247;&#x6BB5;&#x3002;

&#x7EC4;&#x5408;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7247;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x9020;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x5E93;&#x3002;

Recombination of distantly related and nonrelated genes is difficult using traditional PCR-based techniques, and truncation-based methods result in a large proportion of nonviable sequences due to frame shifts, deletions, and insertions. This unit describes a method for creating libraries of chimeras through combinatorial assembly of gene fragments. It allows the experimenter to recombine genes of any identity and to select the sites where recombination takes place. Combinatorial recombination is achieved by generating gene fragments with specific overhangs, or sticky ends. The overhangs permit the fragments to be ligated in the correct order while allowing independent assortment of blocks with identical overhangs. Genes of any identity can be recombined so long as they share 3 to 5 base pairs of identity at the desired recombination sites. Simple adaptations of the method allow incorporation of specific gene fragments.

Combinatorial recombination of gene fragments to construct a library of chimeras.

La recombinaison de g&#xE8;nes lointainement apparent&#xE9;e et non li&#xE9; est difficile &#xE0; l&#x26;#39;aide traditionnelles bas&#xE9;es sur la PCR techniques, et la troncature &#xE0; base de m&#xE9;thodes entra&#xEE;nent une forte proportion de s&#xE9;quences non viables en raison de changements de cadre, des suppressions et des insertions. Cette unit&#xE9; d&#xE9;crit une m&#xE9;thode pour cr&#xE9;er des biblioth&#xE8;ques de chim&#xE8;res par assemblage combinatoire de fragments de g&#xE8;nes. Il permet &#xE0; l&#x26;#39;exp&#xE9;rimentateur de se recombiner les g&#xE8;nes de toute identit&#xE9; et de s&#xE9;lectionner les sites o&#xF9; la recombinaison a lieu. Recombinaison combinatoire est r&#xE9;alis&#xE9; en g&#xE9;n&#xE9;rant des fragments de g&#xE8;nes avec des surplombs sp&#xE9;cifiques, ou sur les bouts collants. Les surplombs permettre aux fragments d&#x26;#39;&#xEA;tre ligatur&#xE9; dans l&#x26;#39;ordre correct, tout en permettant assortiment ind&#xE9;pendant de blocs avec des surplombs identiques. Les g&#xE8;nes de toute identit&#xE9; peuvent &#xEA;tre recombin&#xE9;es pour autant qu&#x26;#39;ils partagent 3 &#xE0; 5 paires de bases de l&#x26;#39;identit&#xE9; sur les sites de recombinaison d&#xE9;sir&#xE9;s. De simples adaptations de la m&#xE9;thode permettre l&#x26;#39;incorporation de fragments de g&#xE8;nes sp&#xE9;cifiques.

Recombinaison combinatoire de fragments de g&#xE8;nes de construire une biblioth&#xE8;que de Chim&#xE8;res

Rekombination von weitl&auml;ufig Verwandten und fremden Genen ist schwierig mit traditionelle PCR-basierte Techniken und Abschneiden-basierte Methoden f&uuml;hren zu einem Teil nicht lebensf&auml;higes Sequenzen durch Frame-Verschiebungen, L&ouml;schungen und Einf&uuml;gungen. Diese Ma&szlig;einheit beschreibt eine Methode zum Erstellen von Bibliotheken der Chim&auml;ren &uuml;ber kombinatorische Assembly gen-Fragmente. Es erlaubt den Experimentator Gene jedweder Identit&auml;t zu rekombinieren und Seiten auszuw&auml;hlen, wo die Rekombination stattfindet. Kombinatorische Rekombination wird erreicht durch die Generierung von Gen-Fragmente mit spezifischen &Uuml;berh&auml;nge oder klebrige enden. Die &Uuml;berh&auml;nge erlauben die Fragmente, die in der richtigen Reihenfolge beim unabh&auml;ngigen Sortiment der Bl&ouml;cke mit identischen &Uuml;berh&auml;nge erlauben eine Ligatur werden. Gene jedweder Identit&auml;t k&ouml;nnen neu kombiniert werden, so lange, wie sie 3-5 Basenpaare der Identit&auml;t an den Standorten der gew&uuml;nschten Rekombination teilen. Einfache Anpassungen der Methode erlauben Aufnahme von bestimmten Gen-Fragmente.

Kombinatorische Rekombination der Gen-Fragmente eine Bibliothek von Chim&auml;ren zu konstruieren.

Ricombinazione di geni lontanamente correlati e nonrelated &egrave; difficile usando tecniche tradizionali basati sulla PCR e metodi basati su troncamento del risultano in una grande percentuale di sequenze non vitali a causa di inserimenti, eliminazioni e telaio turni. Questa unit&agrave; descrive un metodo per la creazione di librerie di chimere mediante assemblaggio combinatorio di frammenti di gene. Permette lo sperimentatore per ricombinare geni di qualsiasi identit&agrave; e per selezionare i siti in cui avviene la ricombinazione. Ricombinazione combinatoria &egrave; ottenuta generando frammenti di gene con strapiombi specifici, o estremit&agrave; appiccicosa. Strapiombi permettono i frammenti per essere legato nell&#39;ordine corretto, consentendo nel contempo assortimento indipendente dei blocchi con strapiombi identici. Geni di qualsiasi identit&agrave; possono essere ricombinati fintanto che condividono 3 a 5 coppie di basi dell&#39;identit&agrave; presso i siti di ricombinazione desiderata. Semplici adattamenti del metodo permettono di incorporazione dei frammenti del gene specifico.

Ricombinazione combinatoria di frammenti di gene per costruire una libreria di chimere.

&#x9060;&#x7E01;&#x3068;nonrelated&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;PCR&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3001;&#x6B20;&#x5931;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x633F;&#x5165;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x80B2;&#x4E0D;&#x80FD;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x3067;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30E1;&#x200B;&#x200B;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x65AD;&#x7247;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x5B9F;&#x9A13;&#x8005;&#x304C;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;ID&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x304C;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D3;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7C98;&#x7740;&#x672B;&#x7AEF;&#x3067;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x65AD;&#x7247;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x54C1;&#x63C3;&#x3048;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x65AD;&#x7247;&#x304C;&#x6B63;&#x3057;&#x3044;&#x9806;&#x5E8F;&#x3067;&#x9023;&#x7D50;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;&#x6240;&#x671B;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;3&#x304B;&#x3089;5&#x5869;&#x57FA;&#x5BFE;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;ID&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x3042;&#x308C;&#x3070;&#x518D;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x9069;&#x5FDC;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x65AD;&#x7247;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x65AD;&#x7247;&#x306E;&#x7D44;&#x5408;&#x305B;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;

&#xBA3C; &#xAD00;&#xB828; &#xBC0F; nonrelated &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC740; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; PCR &#xAE30;&#xBC18; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xACE0; &#xC790;&#xB974;&#xAE30; &#xAE30;&#xBC18; &#xBC29;&#xBC95; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xAD50;&#xB300;, &#xC0AD;&#xC81C; &#xBC0F; &#xC0BD;&#xC785;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xBD80;&#xC2E4; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xD070; &#xBE44;&#xC911;. &#xC774; &#xB2E8;&#xC704; &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xC870;&#xD569; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC7AC;&#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xACE0; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC870;&#xD569; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xAC01; &#xD2B9;&#xC815; &#xB3CC;&#xCD9C;&#xBD80; &#xB610;&#xB294; &#xB048; &#xC801; &#xB05D;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xCD9C;&#xBD80; &#xBE14;&#xB85D; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xB3CC;&#xCD9C;&#xBD80;&#xC640; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xB2E4;&#xC591; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC62C;&#xBC14;&#xB978; &#xC21C;&#xC11C;&#xB85C; &#xCD9C;&#xD608; &#xC870;&#xAC01;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xB108;&#xBB34; &#xC624;&#xB7AB;&#xB3D9;&#xC548; 3 5 &#xC790;&#xB8CC; &#xC30D; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; id &#xACF5;&#xC720; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC62E;&#xAE30;&#xB294; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xC758; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; adaptations &#xD2B9;&#xC815; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xC124;&#xB9BD; &#xD5C8;&#xC6A9;.

&#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xC0DD;&#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xC870;&#xD569; &#xC7AC;&#xACB0;&#xD569;.

La recombinaci&#xF3;n de los genes de una relaci&#xF3;n distante y no emparentado es dif&#xED;cil de usar los tradicionales t&#xE9;cnicas basadas en PCR, y el truncamiento basado en m&#xE9;todos de resultado en una gran proporci&#xF3;n de las secuencias no viables debido a los cambios de marco, eliminaciones e inserciones. Esta unidad describe un m&#xE9;todo para crear bibliotecas de quimeras a trav&#xE9;s del conjunto combinatoria de fragmentos de genes. Se permite que el experimentador para recombinar los genes de cualquier identidad y para seleccionar los sitios donde tiene lugar la recombinaci&#xF3;n. Recombinaci&#xF3;n combinatoria se logra mediante la generaci&#xF3;n de fragmentos de genes con voladizos espec&#xED;ficos, o en los extremos pegajosos. Los salientes permiten a los fragmentos se ligaron en el orden correcto al tiempo que permite la distribuci&#xF3;n independiente de bloques con voladizos id&#xE9;nticos. Los genes de cualquier identidad puede ser recombinado con tal de que comparten 3 a 5 pares de bases de identidad en los sitios de recombinaci&#xF3;n deseados. Adaptaciones simples del m&#xE9;todo permitir la incorporaci&#xF3;n de fragmentos de genes espec&#xED;ficos.

La recombinaci&#xF3;n de fragmentos de genes combinatoria para construir una biblioteca de quimeras

&#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; lignocellulosic &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xC5F0;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xC2EC; &#xACC4;&#xC18D; nonrenewable &#xD654;&#xC11D; &#xC5F0;&#xB8CC; &#xACE0;&#xAC08;&#xB85C; &#xC0C1;&#xC2B9;. Cellulases, &#xC140; &#xB8F0; &#xB85C;&#xC2A4; fermentable &#xC124;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C; &#xCABC;&#xAC1C; &#xB2E4; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBE44;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; &#xACBD;&#xC81C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2E4;&#xD589; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xC5F0;&#xB8CC; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBC29;&#xD574;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; Cel5A filamentous &#xACF0; &#xD321;&#xC774; Hypocrea jecorina&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xC5F0;&#xB8CC; &#xC0B0;&#xC5C5;&#xC5D0; &#xB9CC;&#xC5F0;&#xD55C; endoglucanase&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; Thermoascus aurantiacus&#xC5D0;&#xC11C; Cel5A &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xCCB4; &#xB2EE;&#xC740; &#xC77C;&#xBC18; &#xBC30;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xC55E;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85;&#xD55C; endoglucanase &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;, H. jecorina Cel5A &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xAE30;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; groove &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xC77C;&#xB828;&#xC758; &#xC218;&#xC18C; &#xACB0;&#xD569; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xB450; &#xCD09;&#xB9E4; glutamates. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294;, &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131; &#xB8E8;&#xD504; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xACFC; disulfides &#xC218; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC2A4; &#xD0C1; &#xCC28;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC870; &#xC815;&#xBCF4; &#xAC19;&#xC740; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xBD88;&#xBCC0; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC0B0;&#xC5C5; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xC704;&#xD55C;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xB178;&#xB825; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hypocrea jecorina cel5a&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x751F;&#x6210;&#x901A;&#x8FC7;&#x9176;&#x6C34;&#x89E3;&#x6728;&#x8D28;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7D20;&#x751F;&#x7269;&#x71C3;&#x6599;&#x7684;&#x5174;&#x8DA3;&#x7EE7;&#x7EED;&#x4E0A;&#x5347;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E0D;&#x53EF;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x5316;&#x77F3;&#x80FD;&#x6E90;&#x7684;&#x67AF;&#x7AED;&#x3002;&#x751F;&#x4EA7;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7D20;&#x9176;&#xFF0C;&#x5207;&#x5272;&#x6210;&#x53EF;&#x53D1;&#x9175;&#x7CD6;&#x3001; &#x7EA4;&#x7EF4;&#x7D20;&#x7684;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x7684;&#x9AD8;&#x6210;&#x672C;&#x76EE;&#x524D;&#x963B;&#x788D;&#x7ECF;&#x6D4E;&#x4E0A;&#x53EF;&#x884C;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x71C3;&#x6599;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x666E;&#x904D;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7D20;&#x5728;&#x751F;&#x7269;&#x71C3;&#x6599;&#x884C;&#x4E1A;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4E1D;&#x72B6;&#x771F;&#x83CC;&#x7684;&#x83CC;&#x751F;&#x79CD; jecorina Cel5A &#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x5177;&#x6709;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5B50;&#x56CA;&#x5408;&#x6210;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x6C22;&#x9176; Cel5A &#x7684;&#x6700;&#x63A5;&#x8FD1;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x4E00;&#x822C;&#x6298;&#x3002;&#x4E0E;&#x524D;&#x9762;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7D20;&#x7ED3;&#x6784;&#x76F8;&#x4E00;&#x81F4;&#xFF0C;H.jecorina Cel5A &#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5305;&#x542B;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x57FA;&#x677F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x51F9;&#x69FD;&#x548C;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x6C22;&#x952E;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5468;&#x8FB9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x50AC;&#x5316;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x3002;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6F14;&#x793A;&#x4FA7;&#x94FE;&#x3001; &#x5FAA;&#x73AF;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x548C;&#x4EBA;&#x6570;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x7269;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x53EF;&#x80FD;&#x63F4;&#x52A9;&#x52AA;&#x529B;&#x63D0;&#x9AD8;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x540C;&#x65F6;&#x4FDD;&#x6301;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x63ED;&#x793A;&#x4E0D;&#x91CD;&#x8981;&#x548C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x53D8;&#x7684;&#x5730;&#x533A;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x7528;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;

&#x83CC;&#x751F;&#x79CD; jecorina Cel5A &#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

Interest in generating lignocellulosic biofuels through enzymatic hydrolysis continues to rise as nonrenewable fossil fuels are depleted. The high cost of producing cellulases, hydrolytic enzymes that cleave cellulose into fermentable sugars, currently hinders economically viable biofuel production. Here, we report the crystal structure of a prevalent endoglucanase in the biofuels industry, Cel5A from the filamentous fungus Hypocrea jecorina. The structure reveals a general fold resembling that of the closest homolog with a high-resolution structure, Cel5A from Thermoascus aurantiacus. Consistent with previously described endoglucanase structures, the H. jecorina Cel5A active site contains a primarily hydrophobic substrate binding groove and a series of hydrogen bond networks surrounding two catalytic glutamates. The reported structure, however, demonstrates stark differences between side-chain identity, loop regions, and the number of disulfides. Such structural information may aid efforts to improve the stability of this protein for industrial use while maintaining enzymatic activity through revealing nonessential and immutable regions.

A structural study of Hypocrea jecorina Cel5A.

L&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t pour les biocarburants lignocellulosiques g&#xE9;n&#xE9;rer par hydrolyse enzymatique continue &#xE0; augmenter &#xE0; mesure que les combustibles fossiles non renouvelables sont &#xE9;puis&#xE9;s. Le co&#xFB;t &#xE9;lev&#xE9; des cellulases producteurs, des enzymes hydrolytiques que la cellulose en sucres fermentescibles cliver, entrave actuellement la production de biocarburants &#xE9;conomiquement viable. Ici, nous rapportons la structure cristalline d&#x26;#39;un endoglucanase r&#xE9;pandue dans l&#x26;#39;industrie des biocarburants, Cel5A du champignon filamenteux Hypocrea jecorina. La structure r&#xE9;v&#xE8;le un repli g&#xE9;n&#xE9;ral semblable &#xE0; celui du plus proche homologue avec une structure &#xE0; haute r&#xE9;solution, &#xE0; partir Cel5A Thermoascus aurantiacus. Compatible avec les structures endoglucanase d&#xE9;crits pr&#xE9;c&#xE9;demment, la C. jecorina Cel5A site actif contient une rainure principalement substrat hydrophobe liaison et une s&#xE9;rie de r&#xE9;seaux de liaison hydrog&#xE8;ne qui entourent deux glutamates catalytiques. La structure a cependant signal&#xE9;, d&#xE9;montre des diff&#xE9;rences marqu&#xE9;es entre la cha&#xEE;ne lat&#xE9;rale d&#x26;#39;identit&#xE9;, r&#xE9;gions de boucle, et le nombre de disulfures. Cette information structurale peut contribuer aux efforts pour am&#xE9;liorer la stabilit&#xE9; de cette prot&#xE9;ine &#xE0; usage industriel, tout en maintenant l&#x26;#39;activit&#xE9; enzymatique en r&#xE9;v&#xE9;lant les r&#xE9;gions non essentiels et immuables.

Une &#xE9;tude structurale de Hypocrea Jecorina Cel5A

Interesse an der Generierung von Lignozellulose Biokraftstoffe durch Enzymatische Hydrolyse weiter steigt, w&auml;hrend nicht erneuerbare Brennstoffe ersch&ouml;pft werden. Die hohe Kosten f&uuml;r die Herstellung von Cellulasen, hydrolytische Enzyme, die Zellulose in verg&auml;rbaren Zucker, cleave behindert derzeit wirtschaftlich tragf&auml;hige Biokraftstoffproduktion. Hier berichten wir &uuml;ber die Kristallstruktur von einer vorherrschenden Endoglucanase in der Biokraftstoff-Industrie, Cel5A aus der filament&ouml;sen Pilz Hypocrea Jecorina. Die Struktur zeigt eine allgemeine Falte, die &auml;hnlich der der engsten Homolog mit hochaufl&ouml;sender Struktur, Cel5A aus Thermoascus Aurantiacus. In &Uuml;bereinstimmung mit den zuvor beschriebenen Endoglucanase Strukturen, der H. Jecorina Cel5A aktiven Site enth&auml;lt einen in erster Linie hydrophobe Substrat Bindung Groove und eine Reihe von Hydrogen Bond Netzwerken umliegenden zwei katalytische Glutamates. Die gemeldete Struktur veranschaulicht jedoch krasse Unterschiede zwischen Sidechain-Identit&auml;t, Schleife Regionen und die Anzahl der Disulfiden. Solche strukturellen Informationen kann Bem&uuml;hungen zur Verbesserung der Stabilit&auml;t dieses Proteins f&uuml;r den industriellen Einsatz unter Beibehaltung der Enzymaktivit&auml;t durch offenbart unwichtige und unver&auml;nderliche Regionen Beihilfen.

Eine strukturelle Untersuchung der Hypocrea Jecorina Cel5A.

Interesse per la generazione di ligno biocarburanti attraverso idrolisi enzimatica continua a salire come i combustibili fossili non rinnovabili sono esauriti. L&#39;elevato costo di produzione di cellulasi, enzimi idrolitici che fendere la cellulosa in zuccheri fermentescibili, attualmente ostacola la produzione di biocarburanti economicamente sostenibile. Riportiamo la struttura cristallina di un endoglucanase prevalente nel settore dei biocarburanti, Cel5A dal fungo filamentoso Hypocrea jecorina. La struttura rivela una piega generale che ricorda l&#39;omologo pi&ugrave; vicina con una struttura ad alta risoluzione, Cel5A da Thermoascus aurantiacus. Coerente con le strutture endoglucanase descritti in precedenza, il sito attivo H. jecorina Cel5A contiene una scanalatura di associazione substrato prevalentemente idrofoba e una serie di legame idrogeno reti circostanti due glutammati catalitici. La struttura segnalata, tuttavia, dimostra stark differenze tra identit&agrave; side-chain, regioni loop e il numero dei disulfides. Tali informazioni strutturali possono essere di aiuto gli sforzi per migliorare la stabilit&agrave; di questa proteina per uso industriale, mantenendo l&#39;attivit&agrave; enzimatica attraverso rivelando regioni non essenziali e non modificabile.

Uno studio strutturale di Hypocrea jecorina Cel5A.

&#x9175;&#x7D20;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30B0;&#x30CE;&#x30BB;&#x30EB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x71C3;&#x6599;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306F;&#x518D;&#x751F;&#x4E0D;&#x80FD;&#x306A;&#x5316;&#x77F3;&#x71C3;&#x6599;&#x304C;&#x67AF;&#x6E07;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x4E0A;&#x6607;&#x3057;&#x7D9A;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x767A;&#x9175;&#x6027;&#x7CD6;&#x306B;&#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x5207;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x305D;&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3059;&#x308B;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x9AD8;&#x3055;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x3001;&#x7D4C;&#x6E08;&#x7684;&#x306B;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x71C3;&#x6599;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x71C3;&#x6599;&#x696D;&#x754C;&#x3067;&#x6D41;&#x884C;&#x3057;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;&#x7CF8;&#x72B6;&#x83CC;&#x30B7;&#x30A4;&#x30BF;&#x30B1;jecorina&#x304B;&#x3089;Cel5A&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;Thermoascus aurantiacus&#x304B;&#x3089;Cel5A&#x6700;&#x3082;&#x8FD1;&#x3044;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x500D;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x524D;&#x8FF0;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3001;H. jecorina Cel5A&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x6E9D;&#x3068;2&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x53D6;&#x308A;&#x5DFB;&#x304F;&#x6C34;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5074;&#x9396;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3001;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x9818;&#x57DF;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x306E;&#x756A;&#x53F7;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5168;&#x304F;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x60C5;&#x5831;&#x306F;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x4E0D;&#x5909;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x5DE5;&#x696D;&#x7528;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52AA;&#x529B;&#x3092;&#x52A9;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;

&#x30B7;&#x30A4;&#x30BF;&#x30B1;Jecorina Cel5A&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7814;&#x7A76;

El inter&#xE9;s en la generaci&#xF3;n de biocombustibles lignocelul&#xF3;sicos mediante hidr&#xF3;lisis enzim&#xE1;tica contin&#xFA;a aumentando a medida que los combustibles f&#xF3;siles no renovables se agotan. El alto costo de producci&#xF3;n de celulasas, enzimas hidrol&#xED;ticas que la celulosa en az&#xFA;cares fermentables se unir&#xE1;, en la actualidad dificulta la producci&#xF3;n de biocombustibles econ&#xF3;micamente viables. Aqu&#xED;, se presenta la estructura cristalina de una endoglucanasa prevalente en la industria de los biocombustibles, Cel5A del hongo filamentoso Hypocrea jecorina. La estructura revela un pliegue en general parecida a la del hom&#xF3;logo m&#xE1;s cercano con una estructura de alta resoluci&#xF3;n, Cel5A de Thermoascus aurantiacus. En consonancia con las estructuras de endoglucanasa anteriormente descritos, el H. jecorina Cel5A sitio activo contiene una ranura sustrato principalmente hidrof&#xF3;bico de uni&#xF3;n y una serie de redes de enlaces de hidr&#xF3;geno que rodean dos glutamatos catal&#xED;ticos. La estructura informaron, sin embargo, muestra marcadas diferencias entre la identidad de la cadena lateral, las regiones de bucle, y el n&#xFA;mero de disulfuros. Dicha informaci&#xF3;n estructural podr&#xED;a ayudar a los esfuerzos para mejorar la estabilidad de esta prote&#xED;na para su uso industrial, mientras que el mantenimiento de la actividad enzim&#xE1;tica a trav&#xE9;s de revelar las regiones que no sean esenciales e inmutables.

Mary F. Farrow

Department Of Chemistry and Chemical Engineering

California Institute of Technology

High Throughput Screening of Fungal Endoglucanase Activity in Escherichia coli

Mary F. Farrow

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California Institute of Technology

High Throughput Screening of Fungal Endoglucanase Activity in Escherichia coli

Department Of Chemistry and Chemical Engineering