Homemade Site Directed Mutagenesis of Whole Plasmids

Site directed mutagenesis of whole plasmids is a simple way to create slightly different variations of an original plasmid. With this method the cloned ...

Neustadt an der Weinstrasse, Germany

&#x4ECA;&#x5929;&#xFF0C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x4F5C;&#x7269;&#x635F;&#x5931;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x519C;&#x4E1A;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E00;&#x9879;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0; (scFvs) &#x5BF9;&#x5B88;&#x6052;&#x57DF;&#x4E2D;&#x690D;&#x7269;&#x75C5;&#x6BD2; RNA &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; (RdRp) &#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x9176;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;&#x6240;&#x9009;&#x7684; scFvs &#x6291;&#x5236;&#x4E92;&#x8865;&#x7684; RNA &#x5408;&#x6210;&#x4E0D;&#x540C;&#x690D;&#x7269;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F53;&#x5916;&#x7684; RdRps &#x548C;&#x690D;&#x7269;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;scFvs &#x8FD8;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; RdRp &#x7684;&#x8FDC;&#x4EB2;&#x7684;&#x4E19;&#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;T(1) &#x548C; T(2) &#x7684;&#x540E;&#x4EE3;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x682A;&#x7684;&#x672C;&#x751F;&#x70DF;&#x8868;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C; scFvs &#x7EC6;&#x80DE;&#x6EB6;&#x8D28;&#x4E2D;&#x6216;&#x5728;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x6765;&#x81EA;&#x4E0D;&#x540C;&#x5C5E;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x75C5;&#x6BD2;&#x62B5;&#x6297;&#x4E09;&#x79CD;&#x5C5E;&#x4E8E; Tombusviridae &#x5BB6;&#x5EAD;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E; RdRps &#x6297;&#x4F53;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6C47;&#x8F91; &#x300B; &#x6253;&#x51FB;&#x690D;&#x7269;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6DFB;&#x52A0;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x690D;&#x7269;&#x75C5;&#x6BD2; RNA &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x8D4B;&#x4E88;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;

Crop loss due to viral diseases is still a major problem for agriculture today. We present a strategy to achieve virus resistance based on the expression of single-chain Fv fragments (scFvs) against a conserved domain in a plant viral RNA-dependent RNA polymerase (RdRp), a key enzyme in virus replication. The selected scFvs inhibited complementary RNA synthesis of different plant virus RdRps in vitro and virus replication in planta. Moreover, the scFvs also bound to the RdRp of the distantly related hepatitis C virus. T(1) and T(2) progeny of transgenic lines of Nicotiana benthamiana expressing different scFvs either in the cytosol or in the endoplasmic reticulum showed varying degrees of resistance against four plant viruses from different genera, three of which belong to the Tombusviridae family. Virus resistance based on antibodies to RdRps adds another tool to the repertoire for combating plant viruses.

Single-chain antibodies against a plant viral RNA-dependent RNA polymerase confer virus resistance.

La perte des r&#xE9;coltes due &#xE0; des maladies virales est encore un probl&#xE8;me majeur pour l&#x26;#39;agriculture d&#x26;#39;aujourd&#x26;#39;hui. Nous pr&#xE9;sentons une strat&#xE9;gie visant &#xE0; obtenir une r&#xE9;sistance du virus sur la base de l&#x26;#39;expression de fragments Fv monocat&#xE9;naires (scFv) contre un domaine conserv&#xE9; dans une usine de l&#x26;#39;ARN viral polym&#xE9;rase ARN-d&#xE9;pendante (RdRp), une enzyme cl&#xE9; dans la r&#xE9;plication du virus. Les scFv s&#xE9;lectionn&#xE9;s inhib&#xE9; la synth&#xE8;se d&#x26;#39;ARN compl&#xE9;mentaires des diff&#xE9;rents virus de plantes RdRps in vitro et la r&#xE9;plication du virus dans la plante. En outre, le scFv &#xE9;galement li&#xE9; &#xE0; la RdRp du virus de l&#x26;#39;h&#xE9;patite C li&#xE9;e de loin. T (1) et T (2) la descendance de lign&#xE9;es transg&#xE9;niques de Nicotiana benthamiana exprimant scFv diff&#xE9;rents, soit dans le cytosol ou dans le r&#xE9;ticulum endoplasmique a montr&#xE9; des degr&#xE9;s divers de r&#xE9;sistance contre quatre virus de plantes de genres diff&#xE9;rents, dont trois appartiennent &#xE0; la famille Tombusviridae. R&#xE9;sistance aux virus bas&#xE9; sur les anticorps &#xE0; RdRps ajoute un autre outil pour le r&#xE9;pertoire de la lutte contre les virus des plantes.

Anticorps &#xE0; cha&#xEE;ne simple contre une usine virale ARN-d&#xE9;pendante R&#xE9;sistance ARN polym&#xE9;rase du virus Conf&#xE9;rence

Einzelketten-Antik&#xF6;rper gegen einen pflanzlichen viralen RNA-abh&#xE4;ngigen RNA-Polymerase Virusresistenz zu verleihen.

Perdita delle colture a causa di malattie virali &egrave; ancora oggi un grave problema per l&#39;agricoltura. Vi presentiamo una strategia per raggiungere la resistenza di virus basato sull&#39;espressione di frammenti di Fv catena singola (scFvs) contro un dominio conservato in una pianta virale RNA polimerasi RNA dipendente (RdRp), un enzima chiave nella replicazione del virus. La scFvs selezionata ha inibito la sintesi di RNA complementare di virus vegetali diverse RdRps in vitro e la replicazione del virus in planta. Inoltre, il scFvs associato anche a RdRp del virus dell&#39;epatite C lontanamente correlati. T(1) e T(2) progenie di linee transgeniche di Nicotiana benthamiana esprimendo diversi scFvs nel citosol o nel reticolo endoplasmatico ha mostrato diversi gradi di resistenza contro i quattro virus vegetali da generi diversi, di cui tre appartengono alla famiglia Tombusviridae. Resistenza del virus basato su anticorpi anti-RdRps aggiunge un altro strumento per il repertorio per la lotta contro il virus della pianta.

Catena singola anticorpi contro una pianta virale RNA polimerasi RNA-dipendente conferiscono resistenza di virus.

&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x4F5C;&#x7269;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x3001;&#x8FB2;&#x696D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x4ECA;&#x65E5;&#x3067;&#x3082;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;RNA&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;RDRP&#xFF09;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x9375;&#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5358;&#x9396;Fv&#x65AD;&#x7247;&#xFF08;scFv&#x306E;&#xFF09;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;scFv&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x4F53;&#x306E;in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x690D;&#x7269;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;RdRps&#x306E;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;RNA&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;scFv&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x9060;&#x7E01;&#x306E;C&#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;RDRP&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; T&#xFF08;1&#xFF09;&#x53CA;&#x3073;T&#xFF08;2&#xFF09;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x5225;&#x306E;scFv&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x30D9;&#x30F3;&#x30B5;&#x30DF;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x5B50;&#x5B6B;&#x306F;Tombusviridae&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x5C5E;&#x3059;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x3046;&#x3061;3&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5C5E;&#x306E;4&#x3064;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3001;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x62B5;&#x6297;&#x306E;&#x5EA6;&#x5408;&#x3044;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; RdRps&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30EC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x5225;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x690D;&#x7269;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;RNA&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x62B5;&#x6297;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5358;&#x9396;&#x6297;&#x4F53;

&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xB18D;&#xC791;&#xBB3C; &#xC190;&#xC2E4;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1;&#xB3C4; &#xC624;&#xB298;&#xB0A0; &#xB18D;&#xC5C5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBB38;&#xC81C; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC800;&#xD56D; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCCB4;&#xC778; Fv &#xC870;&#xAC01; (scFvs)&#xB294; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNA &#xC885;&#xC18D; RNA &#xD6A8;&#xC18C; (RdRp) &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; scFvs &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xCCB4; &#xC678; RdRps &#xBC0F; planta&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xBCF4;&#xC644; RNA &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xC800;&#xD574;. &#xB610;&#xD55C;,&#xB294; scFvs &#xB610;&#xD55C; &#xBA3C; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; C &#xD615; &#xAC04;&#xC5FC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; Rdrp&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; cytosol &#xB610;&#xB294; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xB2E4;&#xB978; scFvs Nicotiana benthamiana&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; T(1) &#xBC0F; T(2) &#xC790;&#xC190; &#xC911; 3 &#xAC1C;&#xB294; Tombusviridae &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC18D;&#xC5D0;&#xC11C; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAC01;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC800;&#xD56D; Rdrps&#xC5D0;&#xB294; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD1F4;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB808; &#xD37C; &#xD1A0;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xCD94;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2DD;&#xBB3C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNA &#xC885;&#xC18D; RNA &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCCB4;&#xC778; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xBD80;&#xC5EC;.

P&#xE9;rdida de cultivos debido a las enfermedades virales sigue siendo un problema importante para la agricultura de hoy. Se presenta una estrategia para alcanzar la resistencia a virus basado en la expresi&#xF3;n de una sola cadena de fragmentos Fv (scFv) contra un dominio conservado en una planta viral ARN-polimerasa dependiente de ARN (RDRP), una enzima clave en la replicaci&#xF3;n del virus. Los scFv seleccionados inhibi&#xF3; la s&#xED;ntesis de RNA complementaria de diferentes RdRPs de virus de plantas in vitro y la replicaci&#xF3;n del virus en la planta. Por otra parte, la scFvs tambi&#xE9;n vinculada a la RDRP del alejadas virus de la hepatitis C. T (1) y T (2) la progenie de las l&#xED;neas transg&#xE9;nicas de Nicotiana benthamiana que expresan scFv diferentes, ya sea en el citosol o en el ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico mostraron diversos grados de resistencia contra cuatro virus de plantas de diferentes g&#xE9;neros, tres de los cuales pertenecen a la familia Tombusviridae. La resistencia a virus basados &#x200B;&#x200B;en anticuerpos para RdRPs a&#xF1;ade una herramienta m&#xE1;s para el repertorio para la lucha contra el virus de las plantas.

Anticuerpos de cadena sencilla contra una planta viral RNA-dependiente del RNA polimerasa del virus de Resistencia Conferencia

&#x6267;&#x884C;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x662F;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x6D41;&#x884C;&#x7387;&#x548C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x60A3;&#x8005;&#x548C;&#x5728;&#x6CF0;&#x56FD;&#x7684;&#x725B;&#x9690;&#x5B62;&#x5B50;&#x866B;&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x578B;&#x3002;&#x4ECE; 46 &#x7231;&#x6ECB;&#x75C5;&#x5E26;&#x83CC;&#x8005; &#xFF0F; &#x60A3;&#x8005;&#x4ECE; Prabat &#x5357;&#x5821;&#x5E99;&#xFF0C;&#x5728;&#x6CF0;&#x56FD;&#x4E2D;&#x90E8;&#x7684;&#x7F57;&#x5E03;&#x6CCA;&#x6B66;&#x91CC;&#x7701;&#x6536;&#x96C6;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x6807;&#x672C;&#x3002;&#x4E2D;&#x5DDD;&#x6B66;&#x91CC;&#x7701;&#xFF0C;&#x6CF0;&#x56FD;&#x4E1C;&#x90E8;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x4E03;&#x4E2A;&#x519C;&#x573A;&#x6536;&#x96C6;&#x4E86;&#x4E24;&#x767E;&#x4ECE;&#x5976;&#x725B;&#x7684;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x6837;&#x54C1;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6837;&#x672C;&#x662F;&#x7531; Sheather &#x7684;&#x8517;&#x7CD6;&#x6D6E;&#x9009;&#x6280;&#x672F;&#x96C6;&#x4E2D;&#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x6297;&#x9178;&#x67D3;&#x8272; (AFS) &#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x866B;&#x5375;&#x7684;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x6837;&#x672C;&#x548C; 83 &#x725B;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x6807;&#x672C;&#x88AB;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4F7F;&#x7528;&#x9488;&#x5BF9; 18 SSUrRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x7684;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (PCR) &#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x60A3;&#x8005;&#x6837;&#x672C;&#x4E2D;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7387;&#x4E3A; 28.7%&#x539F;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x6CD5;&#x548C; pcr &#x7684; 4.35%&#x3002;&#x725B;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7387;&#x662F; 13%&#x539F;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x6CD5;&#x548C; pcr 9.63%&#x3002;&#x540E; DNA &#x6D4B;&#x5E8F;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x57FA;&#x56E0;&#x578B;&#x7684;&#x9690;&#x5B62;&#x5B50;&#x866B;&#x4ECE;&#x4E03; PCR &#x9633;&#x6027;&#x6837;&#x54C1;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0; C.&#x5B62;&#x5B50;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x6CF0;&#x56FD;&#x725B;&#x9690;&#x5B62;&#x5B50;&#x866B;&#x7269;&#x79CD;&#x9057;&#x4F20;&#x9996;&#x6B21;&#x786E;&#x8BA4;&#x3002;

&#x5728;&#x6CF0;&#x56FD;&#x9694;&#x79BB;&#x6D41;&#x884C;&#x548C;&#x4EBA;&#x529B;&#x548C;&#x725B;&#x9690;&#x5B62;&#x5B50;&#x866B;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

This study was performed to determine the prevalence and genotypes of Cryptosporidium species among HIV patients and cattle in Thailand. Stool specimens were collected from 46 HIV patients from Prabat Nampu Temple, Lop Buri Province in central Thailand. Two hundred fecal samples from dairy cattle were collected from seven farms in Chon Buri Province, the eastern part of Thailand. Each sample was concentrated by Sheather's sucrose flotation technique and stained by acid fast stain (AFS) for the identification of oocysts by microscopy. All HIV stool samples and 83 fecal specimens from cattle were further tested using nested polymerase chain reaction (PCR) targeting the 18S SSUrRNA gene to characterize the detected species. In HIV patient samples, the detection rate was 28.7% by AFS and 4.35% by nested PCR. In cattle samples, the detection rate was 13% by AFS and 9.63% by nested PCR. After DNA sequencing results, we identified the genotypes of the Cryptosporidium from seven of the PCR positive samples. All were found to be C. parvum. The findings presented here represent the first genetic identification of Cryptosporidium species in cattle in Thailand.

Prevalence and molecular characterization of human and bovine Cryptosporidium isolates in Thailand.

Cette &#xE9;tude a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;e afin de d&#xE9;terminer la pr&#xE9;valence et les g&#xE9;notypes des esp&#xE8;ces de Cryptosporidium chez les patients VIH et le b&#xE9;tail en Tha&#xEF;lande. Les &#xE9;chantillons de selles ont &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;lev&#xE9;s chez des patients VIH 46 de Prabat Nampu Temple, Lop Buri province dans le centre de la Tha&#xEF;lande. Deux cents &#xE9;chantillons de mati&#xE8;res f&#xE9;cales provenant de bovins laitiers ont &#xE9;t&#xE9; recueillies &#xE0; partir de sept exploitations agricoles dans la province de Chon Buri, la partie orientale de la Tha&#xEF;lande. Chaque &#xE9;chantillon a &#xE9;t&#xE9; concentr&#xE9;e par la technique de flottation Sheather de saccharose et color&#xE9; par acido-tache (AFS) pour l&#x26;#39;identification des oocystes par microscopie. Tous les &#xE9;chantillons de selles VIH et 83 &#xE9;chantillons de selles provenant de bovins ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; test&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;aide imbriqu&#xE9;e polymerase chain reaction (PCR) ciblant le g&#xE8;ne 18S SSUrRNA de caract&#xE9;riser les esp&#xE8;ces d&#xE9;tect&#xE9;es. Dans les &#xE9;chantillons de patients VIH, le taux de d&#xE9;tection &#xE9;tait de 28,7% par AFS et 4,35% par PCR nich&#xE9;e. Dans les &#xE9;chantillons de bovins, le taux de d&#xE9;tection &#xE9;tait de 13% par l&#x26;#39;AFS et 9,63% par PCR nich&#xE9;e. Apr&#xE8;s les r&#xE9;sultats de s&#xE9;quen&#xE7;age d&#x26;#39;ADN, nous avons identifi&#xE9; les g&#xE9;notypes de Cryptosporidium de sept des &#xE9;chantillons positifs par PCR. Tous ont &#xE9;t&#xE9; jug&#xE9;s C. parvum. Les r&#xE9;sultats pr&#xE9;sent&#xE9;s ici repr&#xE9;sentent la premi&#xE8;re identification g&#xE9;n&#xE9;tique des esp&#xE8;ces de Cryptosporidium chez les bovins en Tha&#xEF;lande.

Pr&#xE9;valence et caract&#xE9;risation mol&#xE9;culaire des isolats de Cryptosporidium de l&#x26;#39;homme et bovine en Tha&#xEF;lande

Diese Studie wurde durchgef&uuml;hrt, um zu bestimmen, die Pr&auml;valenz und die Genotypen von Cryptosporidium Arten bei HIV-Patienten und Rinder in Thailand. Hocker Exemplare wurden gesammelt von 46 HIV-Patienten aus Prabat Nampu Tempel, Lop Buri Provinz in Zentral-Thailand. Zweihundert f&auml;kale Proben von Milchk&uuml;hen wurden von sieben Bauernh&ouml;fen in der Provinz Chonburi, der &ouml;stliche Teil von Thailand gesammelt. Jede Probe wurde durch die Sheather Saccharose Flotation Technik konzentriert und Mikroskopie von S&auml;ure schnell Fleck (AFS) zur Identifizierung von Oozysten Makel. Alle HIV-Stuhlproben und 83 f&auml;kale Proben von Rindern wurden weiter getestet mit geschachtelten Polymerase-Kettenreaktion (PCR), die Ausrichtung des 18S SSUrRNA Gens, um die gefundenen Arten zu charakterisieren. In HIV Patientenproben war die Erkennungsrate 28,7 % von AFS und 4,35 % von verschachtelten PCR. Bei Rindern Proben war die Erkennungsrate 13 % von AFS und 9,63 % von verschachtelten PCR. Nach DNA-Sequenzierung Ergebnisse haben wir die Genotypen von Cryptosporidium von sieben der PCR positiven Proben identifiziert. Alle wurden gefunden, C. Parvum sein. Die hier vorgestellten Ergebnisse repr&auml;sentieren die erste genetische Identifizierung von Cryptosporidium Arten bei Rindern in Thailand.

Pr&auml;valenz und molekulare Charakterisierung von menschlichen und Rinder Cryptosporidium isoliert in Thailand.

Questo studio &egrave; stato condotto per determinare la prevalenza e genotipi di Cryptosporidium specie tra i pazienti affetti da HIV e bestiame in Thailandia. Campioni di feci sono stati raccolti da 46 pazienti affetti da HIV da Prabat Nampu tempio, Lop Buri provincia nella Thailandia centrale. Duecento campioni di feci da bovini da latte sono stati raccolti da sette aziende agricole nella provincia di Chon Buri, la parte orientale della Thailandia. Ogni campione &egrave; stato concentrato di tecnica di flottazione di Sheather saccarosio e macchiato da macchia acido veloce (AFS) per l&#39;identificazione delle oocisti di microscopia. Tutti i campioni di feci di HIV e 83 campioni fecali da bestiame pi&ugrave; ulteriormente sono stati testati mediante reazione a catena annidata della polimerasi (PCR) gene 18S SSUrRNA di targeting per caratterizzare le specie rilevate. In campioni di pazienti HIV, il tasso di rilevazione era 28,7% dall&#39;AFS e 4,35% mediante nested PCR. Nei campioni di bestiame, il tasso di rilevazione era 13% di AFS e 9,63% mediante nested PCR. Dopo DNA sequencing risultati, abbiamo individuato i genotipi di Cryptosporidium da sette dei campioni positivi PCR. Tutti sono stati trovati per essere c. parvum. I risultati presentati qui rappresentano la prima identificazione genetica di Cryptosporidium specie nei bovini in Thailandia.

Prevalenza e caratterizzazione molecolare di Cryptosporidium umana e bovina isolati in Thailandia.

&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;HIV&#x60A3;&#x8005;&#x3068;&#x725B;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x6709;&#x75C5;&#x7387;&#x3068;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x7A2E;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x578B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x691C;&#x4F53;&#x306F;Prabat Nampu&#x5BFA;&#x3001;&#x4E2D;&#x592E;&#x30BF;&#x30A4;&#x306E;&#x30ED;&#x30C3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30FC;&#x770C;&#x304B;&#x3089;46&#x306E;HIV&#x60A3;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x63A1;&#x53D6;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E73;&#x725B;&#x304B;&#x3089;&#x4E8C;&#x767E;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30E7;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x770C;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x6771;&#x90E8;&#x306E;7&#x8FB2;&#x5834;&#x304B;&#x3089;&#x63A1;&#x53D6;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5404;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#xFF08;AFS&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x901F;&#x67D3;&#x8272;&#x9178;&#x306B;&#x3088;&#x308B;Sheather&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x6D6E;&#x904A;&#x6CD5;&#x3067;&#x67D3;&#x8272;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;HIV&#x7CDE;&#x4FBF;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3068;&#x725B;&#x304B;&#x3089;83&#x7CDE;&#x4FBF;&#x691C;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7A2E;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;18S SSUrRNA&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x30CD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC;&#xFF08;PCR&#xFF09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x8A66;&#x9A13;&#x3057;&#x305F;&#x3002; HIV&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x200B;&#x200B;&#x691C;&#x51FA;&#x7387;&#x306F;&#x3001;AFS&#x3067;28.7&#xFF05;&#x3001;&#x5165;&#x308C;&#x5B50;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;PCR&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;4.35&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x725B;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x200B;&#x200B;&#x691C;&#x51FA;&#x7387;&#x306F;&#x3001;AFS&#x3067;13&#xFF05;&#x3068;&#x5165;&#x308C;&#x5B50;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;PCR&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;9.63&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; DNA&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;PCR&#x967D;&#x6027;&#x691C;&#x4F53;&#x306E;7&#x304B;&#x3089;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x578B;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306F;C&#x30AF;&#x30EA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x30BF;&#x30A4;&#x3067;&#x306F;&#x725B;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x7A2E;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x767A;&#x8868;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30BF;&#x30A4;&#x3067;&#x30D2;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A6;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x5206;&#x96E2;&#x682A;&#x306E;&#x6709;&#x75C5;&#x7387;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x5B50;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC815;&#xB3C4;&#xC640; genotypes &#xC6C0; &#xC885; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xD658;&#xC790;&#xC640; &#xD0DC;&#xAD6D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xCD95; &#xB4E4;&#xC758; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790; &#xD45C;&#xBCF8;&#xC5D0;&#xC11C; Prabat Nampu &#xC0AC;&#xC6D0;, &#xC798;&#xB77C; &#xB0B4; &#xB2E4; &#xBD80;&#xB9AC; &#xC8FC; &#xD0DC;&#xAD6D; &#xC911;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; 46 &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xC11C; &#xC218;&#xC9D1; &#xB41C;. &#xCD0C; &#xBD80;&#xB9AC; &#xC8FC;, &#xD0DC;&#xAD6D;&#xC758; &#xB3D9;&#xBD80; &#xBD80;&#xBD84; 7 &#xAC1C; &#xB18D;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC816;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; 200 &#xBD84; &#xBCC0; &#xC0D8;&#xD50C; &#xC218;&#xC9D1; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC740; Sheather&#xC758; &#xC790;&#xB2F9; &#xBD80;&#xC591; &#xAE30;&#xC220;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9D1;&#xC911; &#xD558; &#xACE0; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; oocysts &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE60;&#xB978; &#xC0B0; &#xC131; &#xC5BC;&#xB8E9; (AFS)&#xC73C;&#xB85C; &#xBB3C;&#xB4E4;&#xC5B4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xB300;&#xBCC0; &#xC0D8;&#xD50C;&#xACFC; 83&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xCD95; &#xBC30;&#xC124;&#xBB3C; &#xD45C;&#xBCF8; &#xC911;&#xCCA9; &#xB41C; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; (PCR) 18S SSUrRNA &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB41C; &#xC885;&#xC871;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xCD94;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xD658;&#xC790; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; AFS&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; 28.7% 4.35% &#xC911;&#xCCA9; &#xB41C; PCR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC18C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; AFS 13% 9.63% &#xC911;&#xCCA9; &#xB41C; PCR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4;. DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xACB0;&#xACFC;, PCR &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC0D8;&#xD50C; 7 &#xAC1C; &#xC6C0; genotypes &#xD30C;&#xC545;. &#xBAA8;&#xB4E0; C. parvum &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD0DC;&#xAD6D;&#xC5D0; &#xC18C; &#xC6C0; &#xC885;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC815;&#xB3C4;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xC18C; &#xC6C0; &#xBD84;&#xC790; &#xD2B9;&#xC131; &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; &#xD0DC;&#xAD6D;&#xC5D0;&#xC11C;.

Este estudio se realiz&#xF3; para determinar la prevalencia y los genotipos de las especies de Cryptosporidium en los pacientes VIH y el ganado en Tailandia. Las muestras de heces fueron recolectadas en 46 pacientes de VIH de Prabat Nampu Temple, provincia de Lop Buri, en el centro de Tailandia. Doscientas muestras de heces de ganado de leche fueron recolectadas en siete granjas en provincia de Chon Buri, de la parte este de Tailandia. Cada muestra se concentr&#xF3; mediante la t&#xE9;cnica de Sheather de sacarosa de flotaci&#xF3;n y te&#xF1;idas por el &#xE1;cido mancha r&#xE1;pida (AFS) para la identificaci&#xF3;n de ooquistes por microscop&#xED;a. Todas las muestras de heces por el VIH y 83 muestras fecales de ganado vacuno fueron probados utilizando la reacci&#xF3;n en cadena de la polimerasa anidada (PCR) en el gen 18S SSUrRNA para caracterizar las especies detectadas. En las muestras de pacientes con VIH, la tasa de detecci&#xF3;n fue de 28,7% en AFS y 4,35% por PCR anidada. En las muestras de ganado, la tasa de detecci&#xF3;n fue del 13% por AFS y 9,63% por PCR anidada. Despu&#xE9;s de los resultados de secuenciaci&#xF3;n de ADN, se identificaron los genotipos de la Cryptosporidium, de siete de las muestras positivas de PCR. Todos resultaron ser C. parvum. Los hallazgos presentados aqu&#xED; representan la primera identificaci&#xF3;n gen&#xE9;tica de las especies de Cryptosporidium en el ganado bovino en Tailandia.

Prevalencia y Caracterizaci&#xF3;n molecular de aislados de Cryptosporidium humanos y bovinos en Tailandia

Ectopically &#x8868;&#x793A;&#x9EC4;&#x8272;&#x6591;&#x9A73;&#x75C5;&#x6BD2; P1 &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x5206;&#x89E3;&#x690D;&#x7269;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x5927;&#x7C73;&#x3002;&#x89E3;&#x7406;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709;&#x7EC6;&#x83CC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E; P1 &#x878D;&#x5408;&#x5EF6;&#x5C55;&#x6027;&#x5904;&#x7406;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x8FDB;&#x884C;&#x3002;N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x6682;&#x6001; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x88C2;&#x89E3;&#x4EA7;&#x7269;&#x7684;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x8868;&#x660E;&#x9176;&#x5207;&#x4F4D;&#x70B9;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x524D;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178; (aa) &#x4E0B;&#x6E38;&#x7684; P1 &#x5E8F;&#x5217;&#x4E4B;&#x95F4;&#x672C;&#x751F;&#x70DF;&#x8868;&#x793A; P1/GFP (&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;)&#x3002;&#x8BF1;&#x53D8;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x63ED;&#x793A;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x7F2C;&#x6C28;&#x9178;&#x66FF;&#x4EE3; P1 aa &#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E; 157 &#x635F;&#x5BB3;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x4E73;&#x6C9F;&#x91CC;&#xFF0C;&#x662F;&#x7531;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x66FF;&#x6362;&#x51E0;&#x4E4E;&#x4E0D;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5220;&#x9664; methionine(159) (&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0; aa &#x6B8B;&#x7559;) &#x4F3C;&#x4E4E;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD; P1/GFP &#x5288;&#x88C2;&#x3002;N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x4E0E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0; P1 &#x539F;&#x6765;&#x635F;&#x5BB3; autocleavage&#xFF0C;&#x800C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x7684;&#x4ED6;&#x6807;&#x7B7E;&#x4E0D;&#x80FD;&#x5B8C;&#x5168;&#x9632;&#x6B62;&#x5288;&#x88C2;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4FEE;&#x6539;&#x540E;&#x7684; P1/GFP &#x643A;&#x5E26; 81 N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x5220;&#x9664; aa &#x4E0D;&#x88AB;&#x5206;&#x89E3;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5730;&#x533A;&#x53C2;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x5927; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x878D;&#x5408;&#x4F19;&#x4F34;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x81EA;&#x6211;&#x50AC;&#x5316;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6; P1 &#x7684;&#x6B63;&#x786E;&#x6298;&#x53E0;&#x3002;

&#x6C34;&#x7A3B;&#x9EC4;&#x8272;&#x6591;&#x9A73;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6C89;&#x9ED8;&#x6291;&#x764C; P1 autoproteolytic &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Ectopically expressed rice yellow mottle virus P1 fusion proteins were found to be cleaved in planta and in Escherichia coli. Cleavage takes place in the absence of bacterial protease activity, indicating that the P1 fusion is autocatalytically processed independently of host factors. N-terminal sequencing of the C-terminal cleavage product of transiently expressed P1/GFP (green fluorescence protein) in Nicotiana benthamiana showed that the cleavage site is located between the first two amino acids (aa) downstream of the P1 sequence. Mutagenesis experiments revealed that a phenylalanine to valine substitution at position 157 of the P1 aa sequence impairs proper cleavage, which is nearly unaffected by replacement of phenylalanine with tyrosine. Deletion of methionine(159) (first GFP aa residue) appeared to not affect P1/GFP cleavage. N-terminal P1-tagging with GFP turned out to impair autocleavage, whereas a small His-tag could not fully prevent cleavage. Additionally, a modified P1/GFP carrying an N-terminal deletion of 81 aa was not cleaved. These findings indicate that this region is involved in the proteolysis mechanism and that large N-terminal fusion partners might affect correct folding of the P1 necessary for self-catalysis.

Analysis of an autoproteolytic activity of rice yellow mottle virus silencing suppressor P1.

Exprim&#xE9;s de mani&#xE8;re ectopique panachure jaune du riz prot&#xE9;ines virales P1 de fusion ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s &#xE0; &#xEA;tre cliv&#xE9; in planta et dans Escherichia coli. Clivage a lieu en l&#x26;#39;absence d&#x26;#39;activit&#xE9; de la prot&#xE9;ase bact&#xE9;rienne, ce qui indique que la fusion est P1 autocatalytique trait&#xE9;es ind&#xE9;pendamment les facteurs de l&#x26;#39;h&#xF4;te. N-terminale de s&#xE9;quen&#xE7;age du produit de clivage en C-terminal de exprim&#xE9; de mani&#xE8;re transitoire P1/GFP (vert prot&#xE9;ine de fluorescence) dans Nicotiana benthamiana a montr&#xE9; que le site de clivage est situ&#xE9; entre les deux premiers acides amin&#xE9;s (aa) en aval de la s&#xE9;quence P1. Des exp&#xE9;riences de mutagen&#xE8;se ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que une ph&#xE9;nylalanine &#xE0; la valine en position 157 de substitution de la s&#xE9;quence P1 aa alt&#xE8;re le clivage proprement dit, qui est &#xE0; peu pr&#xE8;s pas affect&#xE9; par le remplacement de la ph&#xE9;nylalanine en tyrosine. Suppression de la m&#xE9;thionine (159) (premi&#xE8;re GFP aa r&#xE9;sidus) est apparu pour ne pas affecter le clivage P1/GFP. N-terminale P1-marquage avec la GFP s&#x26;#39;est av&#xE9;r&#xE9; &#xE0; porter atteinte &#xE0; autoclivage, tandis qu&#x26;#39;une petite His-tag ne pouvait pas emp&#xEA;cher compl&#xE8;tement le clivage. En outre, une modification de P1/GFP portant une d&#xE9;l&#xE9;tion N-terminale de 81 aa n&#x26;#39;&#xE9;tait pas cliv&#xE9;e. Ces r&#xE9;sultats indiquent que cette r&#xE9;gion est impliqu&#xE9; dans le m&#xE9;canisme de prot&#xE9;olyse et que les grands partenaires de fusion N-terminaux pourrait affecter repliement correct de la P1 n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;auto-catalyse.

Analyse d&#x26;#39;une activit&#xE9; du virus de la autoprot&#xE9;olytique panachure jaune du riz taire P1 suppresseur

Ectopically ausgedr&uuml;ckt Reis gelb Mottle Virus P1 Schmelzverfahrensproteine gefunden wurden, um zerspaltet werden in Planta und Escherichia coli. Spaltung erfolgt keine bakterielle Protease-Aktivit&auml;t, die darauf hinweist, dass die P1-Fusion autocatalytically unabh&auml;ngig von der Host Faktoren verarbeitet wird. N-terminale Sequenzierung der C-terminalen Spaltung Produkt der vor&uuml;bergehend ausgedr&uuml;ckt P1/GFP (gr&uuml;ne Fluoreszenz-Protein) in Nicotiana Benthamiana zeigte, dass der Standort einer Spaltung zwischen den ersten beiden Aminos&auml;uren (aa) stromabw&auml;rts der P1-Sequenz befindet. Mutagenese-Experimente zeigten, dass eine Phenylalanin zu Valin Substitution an Position 157 der P1-aa-Sequenz richtige Spaltung, beeintr&auml;chtigt die Ersetzung von Phenylalanin mit Tyrosin fast unber&uuml;hrt ist. Streichung des methionine(159) (erste GFP-aa-R&uuml;ckstand) erschien, P1/GFP Spaltung nicht beeintr&auml;chtigen. N-terminale P1-Etikettieren mit GFP erwies sich als Autocleavage, beeintr&auml;chtigen, w&auml;hrend ein kleiner His-Tag nicht vollst&auml;ndig Spaltung verhindert werden kann. Dar&uuml;ber hinaus eine modifizierte P1/GFP tragen eine N-terminale Deletion von 81 aa war nicht zerspaltet. Diese Befunde zeigen, dass diese Region in der Proteolyse-Mechanismus beteiligt ist und die gro&szlig;e N-terminale Fusion Partner auswirken k&ouml;nnen korrekte Faltung der P1 f&uuml;r selbst-Katalyse.

Analyse einer Autoproteolytic T&auml;tigkeit des Reis gelb Mottle Virus Unterdr&uuml;ckender Schutzbeschaltung P1.

Ectopically espresso riso, proteine di fusione P1 yellow mottle virus sono state trovate per essere scissi in planta e in Escherichia coli. Scissione avviene in assenza di attivit&agrave; di proteasi batteriche, indicando che la fusione di P1 &egrave; autocatalytically elaborata indipendentemente da fattori di host. N-terminale sequenziamento del prodotto C-terminale clivaggio di transitoriamente espresso P1/GFP (proteina fluorescenza verde) in Nicotiana benthamiana ha mostrato che il sito di clivaggio si trova tra le prime due amminoacidi (aa) a valle della sequenza P1. Esperimenti di mutagenesi ha rivelato che una fenilalanina a sostituzione della valina in posizione 157 della sequenza aa P1 altera corretto clivaggio, che &egrave; quasi inalterato dalla sostituzione della fenilalanina con tirosina. Eliminazione di methionine(159) (residui aa primo di GFP) sembravano non interessare clivaggio P1/GFP. N-terminale P1-tagging con GFP si rivel&ograve; per compromettere autocleavage, considerando che una piccola etichetta di sua non potrebbe evitare completamente la scissione. Inoltre, una modificata P1/GFP che trasportano un&#39;eliminazione del N-terminale di 81 aa non era spaccati. Questi risultati indicano che questa regione &egrave; coinvolta nel meccanismo della proteolisi e che grandi partner di fusione N-terminale possano influenzare il corretto ripiegamento della P1 necessarie per self-catalisi.

Analisi di un&#39;attivit&agrave; di autoproteolytic di riso giallo mottle virus silenziamento soppressore P1.

&#x7570;&#x6240;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x30A4;&#x30CD;&#x9EC4;&#x6591;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;P1&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x5207;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x958B;&#x88C2;&#x306F;&#x3001;P1&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306F;&#x81EA;&#x5DF1;&#x89E6;&#x5A92;&#x7684;&#x306B;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x30D9;&#x30F3;&#x30B5;&#x30DF;&#x3067;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;P1/GFP&#xFF08;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF09;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x5207;&#x65AD;&#x7523;&#x7269;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x914D;&#x5217;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x5207;&#x65AD;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;P1&#xFF08;AA&#xFF09;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x3001;P1&#x306E;AA&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;157&#x3067;&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3092;&#x30D0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3078;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x3044;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x958B;&#x88C2;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#xFF08;159&#xFF09;&#xFF08;&#x6700;&#x521D;&#x306E;GFP AA&#x6B8B;&#x57FA;&#xFF09;&#x304C;P1/GFP&#x958B;&#x88C2;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x306A;&#x3044;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x305F;&#x3002; His-&#x30BF;&#x30B0;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;GFP&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;P1-&#x30BF;&#x30AE;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;81 AA&#x306E;N-&#x672B;&#x7AEF;&#x6B20;&#x5931;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;P1/GFP&#x306F;&#x5207;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;N&#x672B;&#x7AEF;&#x878D;&#x5408;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x89E6;&#x5A92;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;P1&#x306E;&#x6B63;&#x3057;&#x3044;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B5;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;P1&#x3092;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30A4;&#x30CD;&#x9EC4;&#x6591;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;Autoproteolytic&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x5206;&#x6790;

Ectopically &#xD45C;&#xD604; &#xC300; &#xB178;&#xB780; &#xBC18;&#xC810; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; P1 &#xD4E8;&#xC804; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; planta &#xBC0F; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#xBD99;&#xC5B4; &#xC788;&#xC744;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC5F4; P1 &#xD4E8;&#xC804; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC694;&#xC18C; &#xBCC4;&#xAC1C;&#xB85C; &#xCC98;&#xB9AC; autocatalytically &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC138;&#xADE0; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xC5B4;&#xB09C; &#xC77C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. N-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; transiently&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; P1/GFP (&#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;) &#xBD84;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; &#xCC98;&#xC74C; &#xB450; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; (aa) &#xD558;&#xB958; P1 &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; Nicotiana benthamiana &#xD45C;&#xD604;. Mutagenesis &#xC2E4;&#xD5D8; valine &#xB300;&#xCCB4; &#xC704;&#xCE58;&#xC758; 157 P1 aa &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; &#xC190;&#xC0C1; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0;&#xACFC; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC758; &#xAD50;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC70;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. Methionine(159)&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; (&#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; GFP aa &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;) P1/GFP &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC778;&#xB2E4;. N &#xB2E8;&#xC790; P1-&#xD0DC;&#xADF8; GFP &#xBC18;&#xBA74; &#xC791;&#xC740; &#xADF8;&#xC758; &#xD0DC;&#xADF8; &#xC218; &#xBD84;&#xC5F4; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0; autocleavage, &#xC545;&#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC904; &#xC218; &#xBC16;&#xC5D0; &#xC5C6; &#xC5C8; &#xC9C0; &#xD568;&#xAED8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD55C; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; P1/GFP 81&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790; &#xC0AD;&#xC81C;&#xB97C; &#xB4E4;&#xACE0; aa&#xB294; &#xBD99;&#xC5B4; &#xC788;&#xC9C0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xACE0; &#xD070; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD4E8;&#xC804; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; P1 &#xC790;&#xCCB4; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC62C;&#xBC14;&#xB978; &#xC811;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC785;&#xC744; &#xC5B5;&#xC555; P1 &#xC300; &#xB178;&#xB780; &#xBC18;&#xC810; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; autoproteolytic &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;.

Ect&#xF3;pica expresadas arroz moteado amarillo virus prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n P1 se encontr&#xF3; que se escinde en planta y en E. coli. La escisi&#xF3;n se lleva a cabo en ausencia de actividad de la proteasa bacteriana, lo que indica que la fusi&#xF3;n P1 es autocatal&#xED;ticamente procesado independiente de los factores del hu&#xE9;sped. Secuenciaci&#xF3;n N-terminal del producto de escisi&#xF3;n C-terminal de transitoriamente expres&#xF3; P1/GFP (prote&#xED;na de fluorescencia verde) en Nicotiana benthamiana mostr&#xF3; que el sitio de corte est&#xE1; situado entre los dos primeros amino&#xE1;cidos (aa) aguas abajo de la secuencia P1. Experimentos de mutag&#xE9;nesis revel&#xF3; que una fenilalanina a valina sustituci&#xF3;n en la posici&#xF3;n 157 de la secuencia P1 bis perjudica escisi&#xF3;n apropiada, que es casi no afectada por la sustituci&#xF3;n de fenilalanina con tirosina. La eliminaci&#xF3;n de la metionina (159) (primero las buenas pr&#xE1;cticas agrarias de residuos bis) parece que no afecta a la escisi&#xF3;n P1/GFP. N-terminal P1-marcado con GFP se convirti&#xF3; en poner en peligro autocleavage, mientras que una peque&#xF1;a Su-etiqueta no est&#xE1; completamente podr&#xED;a evitar la divisi&#xF3;n. Adicionalmente, una realizaci&#xF3;n modificada P1/GFP una supresi&#xF3;n N-terminal de 81 aa no fue escindido. Estos resultados indican que esta regi&#xF3;n est&#xE1; implicada en el mecanismo de la proteolisis y que grandes N-terminal de parejas de fusi&#xF3;n podr&#xED;a afectar plegamiento correcto de la P1 necesario para la auto-cat&#xE1;lisis.

An&#xE1;lisis de una actividad autoproteol&#xED;tica del virus de moteado amarillo del arroz silenciar P1 supresor

&#x5728;&#x65E5;&#x672C;&#x5317;&#x90E8;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x52A8;&#x7269;&#x9690;&#x5B62;&#x5B50;&#x866B;&#x6811;&#x79CD;&#x6D41;&#x884C;&#x5341;&#x80DC;&#x5730;&#x533A;&#x6536;&#x96C6;&#x4E86;&#x4ECE;&#x8179;&#x6CFB;&#x728A;&#x516B;&#x5341;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x6837;&#x672C;&#x3002;&#x866B;&#x5375;&#x4ECE;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x6837;&#x672C;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x52A8;&#x7269;&#x90FD;&#x96C6;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x8517;&#x7CD6;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x68AF;&#x5EA6;&#x79BB;&#x5FC3;&#x3002;&#x4ECE;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6837;&#x672C;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; DNA &#x5E76;&#x5904;&#x7406;&#x5D4C;&#x5957; pcr &#x6269;&#x589E;&#x90E8;&#x5206;&#x7684; SSU rRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x9690;&#x5B62;&#x5B50;&#x866B;&#x3002;75%&#x7684;&#x6837;&#x672C;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E86;&#x9690;&#x5B62;&#x5B50;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x5BF9;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x9633;&#x6027;&#x6837;&#x54C1;&#x8FDB;&#x884C;&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x3002;33 &#x6210;&#x529F;&#x987A;&#x5E8F;&#x5206;&#x79BB;&#x682A; SSUrRNA PCR &#x4EA7;&#x7269;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x662F;&#x9690;&#x5B62;&#x5B50;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x4F59;&#x4E0B;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6848;&#x662F;&#x9690;&#x5B62;&#x5B50;&#x866B;&#x725B;&#x9EC4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;C.&#x9690;&#x5B62;&#x5B50;&#x866B;&#x662F;&#x666E;&#x904D;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x8179;&#x6CFB;&#x578B;&#x728A;&#x548C;&#x53EF;&#x5B62;&#x5B50;&#x611F;&#x67D3;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x52A8;&#x7269;&#x5728;&#x5317;&#x6D77;&#x9053;&#x7684;&#x6765;&#x6E90;&#x3002;

&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x63CF;&#x8FF0;&#x65E5;&#x672C;&#x548C;&#x8BCA;&#x65AD;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5206;&#x578B;&#x7684;&#x9690;&#x5B62;&#x5B50;&#x866B;&#x5728;&#x5317;&#x6D77;&#x9053;&#x8179;&#x6CFB;&#x578B;&#x728A;&#x725B;&#x9690;&#x5B62;&#x5B50;&#x866B;&#x578B;&#x3002;

Eighty fecal samples from pre-weaned calves with diarrhea were collected in the Tokachi area in Northern Japan to investigate the prevalence of Cryptosporidium species in such animals. Oocysts from fecal samples collected from each animal were concentrated using sucrose gradient centrifugation. Genomic DNA was extracted from each sample and processed by nested PCR to amplify the partial SSU rRNA gene of Cryptosporidium. Cryptosporidium infections were detected in 75% of the samples. Sequence analysis was performed on all positive samples. Phylogenetic analysis of 33 successfully sequenced isolates of the SSUrRNA PCR products revealed all but one were Cryptosporidium parvum infections. The remaining single case was Cryptosporidium bovis. These findings suggest that C. parvum is prevalent in diarrheic pre-weaned calves and can be a source of cryptosporidial infections for humans and animals in Hokkaido.

First description of Cryptosporidium bovis in Japan and diagnosis and genotyping of Cryptosporidium spp. in diarrheic pre-weaned calves in Hokkaido.

Quatre-vingt &#xE9;chantillons de selles de pr&#xE9;-veaux sevr&#xE9;s souffrant de diarrh&#xE9;e ont &#xE9;t&#xE9; recueillis dans la r&#xE9;gion de Tokachi dans le nord du Japon pour enqu&#xEA;ter sur la pr&#xE9;valence des esp&#xE8;ces de Cryptosporidium dans les ces animaux. Les oocystes &#xE0; partir d&#x26;#39;&#xE9;chantillons f&#xE9;caux pr&#xE9;lev&#xE9;s sur chaque animal ont &#xE9;t&#xE9; concentr&#xE9;es par centrifugation sur gradient de saccharose. L&#x26;#39;ADN g&#xE9;nomique a &#xE9;t&#xE9; extrait de chaque &#xE9;chantillon et trait&#xE9;es par nested PCR pour amplifier le g&#xE8;ne de l&#x26;#39;ARNr SSU partielle de Cryptosporidium. Infections par Cryptosporidium ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;s dans 75% des &#xE9;chantillons. L&#x26;#39;analyse des s&#xE9;quences a &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9;e sur tous les &#xE9;chantillons positifs. L&#x26;#39;analyse phylog&#xE9;n&#xE9;tique de 33 isolats s&#xE9;quenc&#xE9;s avec succ&#xE8;s des produits de PCR SSUrRNA r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; tous sauf un &#xE9;taient Cryptosporidium parvum infections. Le dernier cas unique a &#xE9;t&#xE9; Cryptosporidium bovis. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que C. parvum est tr&#xE8;s r&#xE9;pandue dans diarrh&#xE9;iques pr&#xE9;-veaux sevr&#xE9;s et peuvent &#xEA;tre une source d&#x26;#39;infections cryptosporidium pour les humains et les animaux &#xE0; Hokkaido.

Premi&#xE8;re description de Cryptosporidium Bovis au Japon et en diagnostic et de g&#xE9;notypage de Cryptosporidium spp. dans diarrh&#xE9;iques pr&#xE9;-veaux sevr&#xE9;s &#xE0; Hokkaido

Achtzig f&auml;kale Proben aus pre-weaned K&auml;lber mit Durchfall wurden gesammelt im Bereich Tokachi im Norden Japans, die Pr&auml;valenz von Cryptosporidium Arten in solche Tiere zu untersuchen. Oozysten von den f&auml;kalen Proben von jedem Tier zusammengestellt wurden konzentriert mit Saccharose-Gradienten-Zentrifugierung. Genomischer DNA wurde aus jeder Probe extrahiert und verarbeitet von verschachtelten PCR, die teilweise SSU rRNS Gens von Cryptosporidium zu verst&auml;rken. Cryptosporidium-Infektionen wurden bei 75 % der Proben festgestellt. Sequenzanalyse wurde an alle positiven Proben durchgef&uuml;hrt. Phylogenetische Analyse von 33 erfolgreich sequenzierte Isolaten der SSUrRNA PCR-Produkte ergab, dass alle au&szlig;er einem Cryptosporidium Parvum Infektionen waren. Die verbleibenden Einzelfall war Cryptosporidium Bovis. Diese Forschungsergebnisse legen nahe, dass C. Parvum ist weit verbreitet in diarrheic pre-weaned K&auml;lber und kann eine Quelle von Cryptosporidial Infektionen f&uuml;r Menschen und Tiere in Hokkaido.

Erste Beschreibung des Cryptosporidium Bovis in Japan und Diagnose und Genotypisierung von Cryptosporidium spp. in diarrheic pre-weaned K&auml;lber in Hokkaido.

Ottanta campioni di feci da pre-weaned vitelli con diarrea sono stati raccolti nella zona di Tokachi nel nord del Giappone per indagare la prevalenza di Cryptosporidium specie in tali animali. Le oocisti da campioni di feci raccolti da ciascun animale erano concentrate mediante centrifugazione gradiente di saccarosio. DNA genomico &egrave; stata estratta da ogni campione ed elaborato da nested PCR per amplificare il gene rRNA SSU parziale di Cryptosporidium. Cryptosporidium infezioni sono state rilevate nel 75% dei campioni. Analisi di sequenza &egrave; stata eseguita su tutti i campioni positivi. Analisi filogenetica degli isolati con successo sequenziati 33 dei prodotti di PCR SSUrRNA rivelato che tutti tranne uno sono stati infezioni di Cryptosporidium parvum. Il caso singolo rimanente era Cryptosporidium bovis. Questi risultati suggeriscono che c. parvum &egrave; prevalente in vitelli diarroiche pre-weaned e pu&ograve; essere fonte di infezioni cryptosporidial per gli esseri umani e animali in Hokkaido.

Prima descrizione di Cryptosporidium bovis in Giappone e la diagnosi e la tipizzazione di Cryptosporidium spp diarroiche pre-weaned vitelli in Hokkaido.

&#x4E0B;&#x75E2;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x30D7;&#x30EC;&#x96E2;&#x4E73;&#x5B50;&#x725B;&#x304B;&#x3089;&#x516B;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x7A2E;&#x306E;&#x6709;&#x75C5;&#x7387;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5317;&#x65E5;&#x672C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5341;&#x52DD;&#x5730;&#x65B9;&#x3067;&#x63A1;&#x53D6;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5404;&#x52D5;&#x7269;&#x304B;&#x3089;&#x63A1;&#x53D6;&#x3057;&#x305F;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x304B;&#x3089;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x52FE;&#x914D;&#x9060;&#x5FC3;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;DNA&#x306F;&#x3001;&#x5404;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x62BD;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;SSU rRNA&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3059;&#x308B;nested PCR&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;75&#xFF05;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x6B63;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SSUrRNA PCR&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x5869;&#x57FA;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x5358;&#x96E2;&#x306B;&#x6210;&#x529F;&#x3057;33&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;1&#x3064;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x30DC;&#x30D3;&#x30B9;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;C.parvum&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x4E0B;&#x75E2;&#x30D7;&#x30EC;&#x96E2;&#x4E73;&#x5B50;&#x725B;&#x3067;&#x6D41;&#x884C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x5317;&#x6D77;&#x9053;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x3084;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;cryptosporidial&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x65E5;&#x672C;&#x3068;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x5C5E;&#x306E;&#x8A3A;&#x65AD;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x578B;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x30DC;&#x30F4;&#x30A3;&#x30B9;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x8AAC;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5317;&#x6D77;&#x9053;&#x306E;&#x4E0B;&#x75E2;&#x30D7;&#x30EC;&#x96E2;&#x4E73;&#x5B50;&#x725B;&#x306E;

&#xC124;&#xC0AC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; pre-weaned &#xC1A1;&#xC544;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; 80 &#xBD84; &#xBCC0; &#xC0D8;&#xD50C; &#xC6C0; &#xC885; &#xAC19;&#xC740; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC758; &#xC720; &#xBCD1; &#xC728;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xBD81;&#xBD80; &#xC77C;&#xBCF8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD1A0; &#xCE74; &#xCE58; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC9D1; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xC218;&#xC9D1; &#xB41C; &#xBC30;&#xC124;&#xBB3C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; oocysts &#xC790;&#xB2F9; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9D1;&#xC911; &#xD588;&#xB2E4;. Genomic DNA&#xB294; &#xAC01; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD558; &#xACE0; &#xC6C0;&#xC758; &#xBD80;&#xBD84; SSU rRNA &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC744; &#xC911;&#xCCA9; &#xB41C; PCR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC98;&#xB9AC;. &#xC6C0;&#xC744; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; 75%&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. SSUrRNA PCR &#xC81C;&#xD488;&#xC758; 33 &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB41C; &#xACA9;&#xB9AC; phylogenetic &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB098;&#xB97C; &#xC81C;&#xC678;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC6C0;&#xC744; parvum &#xAC10;&#xC5FC; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xB0A8;&#xC740; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC0AC;&#xAC74;&#xC740; &#xC6C0;&#xC744; bovis. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; C. parvum diarrheic pre-weaned &#xC1A1;&#xC544;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xD589; &#xD558; &#xACE0; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xD64B;&#xCE74;&#xC774;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; cryptosporidial &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC6D0;&#xCC9C;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC77C;&#xBCF8; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xBC0F; diarrheic pre-weaned &#xC1A1;&#xC544;&#xC9C0; &#xD64B;&#xCE74;&#xC774;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC6C0; &#xC885; &#xC720;&#xC804;&#xD615;&#xC5D0; &#xC6C0; bovis&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC124;&#xBA85;.

Ochenta muestras de heces de terneros destetados antes con diarrea fueron recolectados en el &#xE1;rea de Tokachi en el norte de Jap&#xF3;n para investigar la prevalencia de las especies de Cryptosporidium en estos animales. Los oocistos de las muestras fecales recogidas de cada animal se concentraron mediante centrifugaci&#xF3;n en gradiente de sacarosa. ADN gen&#xF3;mico fue extra&#xED;do de cada muestra y procesado por PCR anidada para amplificar el gen SSU rRNA parcial de Cryptosporidium. Infecciones por Cryptosporidium se detectaron en el 75% de las muestras. El an&#xE1;lisis de secuencia se realiz&#xF3; en todas las muestras positivas. El an&#xE1;lisis filogen&#xE9;tico de 33 aislamientos secuenciados &#xE9;xito de los productos SSUrRNA PCR revelaron todos menos uno eran de Cryptosporidium parvum infecciones. El &#xFA;nico caso restante fue Cryptosporidium bovis. Estos hallazgos sugieren que C. parvum es prevalente en diarreicos destetados pre-terneros y puede ser una fuente de infecciones criptosporidial para humanos y animales en Hokkaido.

Descripci&#xF3;n Primero de Cryptosporidium Bovis en Jap&#xF3;n y en el diagn&#xF3;stico y genotipificaci&#xF3;n de Cryptosporidium spp. diarreicas en el pre-destete los terneros en Hokkaido

HC Pro &#x662F;&#x5E2E;&#x52A9;&#x5668;&#x7EC4;&#x4EF6;-&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; potyviral &#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x4E2D;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x5176;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;HC Pro &#x5DF2;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53CC;&#x9762;&#x5C0F; RNAs &#xFF08;sRNAs&#xFF09; &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x8C03;&#x67E5;&#x4ECB;&#x5BFC; HC Pro &#x65AF;&#x5C14;&#x7EB3;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x5927;&#x91CF;&#x7EAF;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x9700;&#x8981;&#x3002;&#x4E3A;&#x6B64;&#x76EE;&#x7684;&#xFF0C;&#x897F;&#x846B;&#x82A6;&#x9EC4;&#x8272;&#x82B1;&#x53F6;&#x75C5;&#x6BD2; (ZYMV) HC Pro &#x8868;&#x793A;&#x4E3A;&#x5341;&#x516D;&#x8FDB;&#x5236;-&#x7EC4;&#x6C28;&#x9178; (6xHis) &#x6216;&#x9EA6;&#x82BD;&#x7CD6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (MBP) &#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4EB2;&#x548C;&#x5C42;&#x6790;&#x51C0;&#x5316;&#x3002;6xHis:HC-Pro &#x548C; MBP:HC-Pro &#x662F;&#x90E8;&#x5206;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3002;&#x7535;&#x6CF3;&#x6D41;&#x52A8;&#x8F6C;&#x79FB;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709; MBP:HC-Pro &#x5C55;&#x54C1;&#x65AF;&#x5C14;&#x7EB3;&#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684; HC Pro &#x7ED1;&#x5B9A; 21 bp siRNAs&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; 19 bp &#x548C; 24 bp siRNAs&#x3002;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88; FRNK &#x6846;&#x4E2D;&#x7684;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x4EA7;&#x751F; HC-Pro(FINK) &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x524D;&#x663E;&#x793A;&#x8981;&#x4E0E;&#x51CF;&#x5C11;&#x75C5;&#x6BD2;&#x75C7;&#x72B6;&#x548C;&#x5F31;&#x65AF;&#x5C14;&#x7EB3;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;MBP:HA-HC-Pro(FINK) &#x7684;&#x65AF;&#x5C14;&#x7EB3;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x65E0;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x3002;&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684; HC Pro &#x7684;&#x9AD8;&#x4EA7;&#x91CF;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x4FE1;&#x606F;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;

&#x8868;&#x8FBE;&#x3001; &#x7EAF;&#x5316;&#x53CA;&#x529F;&#x80FD;&#x9274;&#x5B9A;&#x91CD;&#x7EC4;&#x897F;&#x846B;&#x82A6;&#x7684;&#x9EC4;&#x8272;&#x82B1;&#x53F6;&#x75C5;&#x6BD2; HC Pro&#x3002;

HC-Pro is a helper component-proteinase which acts as a multifunctional protein in the potyviral life cycle. Apart from its proteolytic activity, HC-Pro has the capacity to bind duplex small RNAs (sRNAs). To investigate HC-Pro-mediated sRNA binding in vitro, high amounts of purified protein are required. For this purpose, the Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) HC-Pro was expressed as a fusion with hexa-histidine (6xHis) or maltose-binding protein (MBP) in Escherichia coli. The expressed fusion proteins were purified by affinity chromatography. 6xHis:HC-Pro and MBP:HC-Pro were partially soluble. Electrophoretic mobility-shift assays demonstrated that only MBP:HC-Pro exhibits the sRNA binding activity. The recombinant HC-Pro bound 21 bp siRNAs as well as 19 bp and 24 bp siRNAs. A point mutation in the highly conserved FRNK box produced the HC-Pro(FINK) protein, previously shown to be associated with reduced viral symptoms and weak sRNA binding. In this study, sRNA binding of the MBP:HA-HC-Pro(FINK) was not detectable. The high yield of purified HC-Pro offers the possibility to study the biochemistry of the protein in detail.

Expression, purification and functional characterization of recombinant Zucchini yellow mosaic virus HC-Pro.

HC-Pro est une composante d&#x26;#39;assistance-prot&#xE9;inase, qui agit comme une prot&#xE9;ine multifonctionnel dans le cycle de vie potyviral. En dehors de son activit&#xE9; prot&#xE9;olytique, HC-Pro a la capacit&#xE9; de se lier duplex petits ARN (ARNs). Pour enqu&#xEA;ter sur HC-Pro-m&#xE9;diation contraignant ARNs in vitro, des quantit&#xE9;s &#xE9;lev&#xE9;es de prot&#xE9;ines purifi&#xE9;es sont n&#xE9;cessaires. A cet effet, le virus de la mosa&#xEF;que jaune courgette (ZYMV) HC-Pro a &#xE9;t&#xE9; exprim&#xE9; comme une fusion avec l&#x26;#39;hexa-histidine (6xHis) ou du maltose-binding protein (MBP) dans Escherichia coli. Les prot&#xE9;ines de fusion exprim&#xE9;es ont &#xE9;t&#xE9; purifi&#xE9;s par chromatographie d&#x26;#39;affinit&#xE9;. 6xHis: HC-Pro et MBP: HC-Pro ont &#xE9;t&#xE9; partiellement soluble. Mobilit&#xE9; &#xE9;lectrophor&#xE9;tique-quarts des tests ont d&#xE9;montr&#xE9; que seulement MBP: HC-Pro pr&#xE9;sente l&#x26;#39;activit&#xE9; de liaison ARNs. Le HC-Pro recombinant li&#xE9; siRNA 21 pb ainsi que 19 pb et 24 pb ARNsi. Une mutation ponctuelle dans la bo&#xEE;te de FRNK hautement conserv&#xE9;e produit le HC-Pro (FINK) prot&#xE9;ines, connu pour &#xEA;tre associ&#xE9;e &#xE0; une r&#xE9;duction des sympt&#xF4;mes viraux et Srna liaison faible. Dans cette &#xE9;tude, ARNs liaison de la MBP: HA-HC-Pro (FINK) n&#x26;#39;&#xE9;tait pas d&#xE9;tectable. Le rendement &#xE9;lev&#xE9; de purifier HC-Pro offre la possibilit&#xE9; d&#x26;#39;&#xE9;tudier la biochimie de la prot&#xE9;ine dans le d&#xE9;tail.

Caract&#xE9;risation Expression, purification et fonctionnelle des virus recombinant de la mosa&#xEF;que jaune courgette HC-Pro

HC-Pro ist ein Helfer-Komponente-Proteinase fungiert als multifunktionale Protein im Lebenszyklus Potyviral. Abgesehen von seiner proteolytische Aktivit&auml;t hat HC-Pro duplex kleine RNAs (sRNAs) zu verpflichten. HC-Pro-vermittelter sRNA Bindung in-vitro-Untersuchung, werden hohe Mengen an gereinigtes Protein ben&ouml;tigt. Zu diesem Zweck die Zucchini gelb Mosaik-Virus (ZYMV) HC-Pro wurde ausgedr&uuml;ckt als eine Fusion mit Hexa-Histidin (6xHis) oder Maltose-verbindliches Protein (MBP) in Escherichia coli. Die ausdr&uuml;ckliche Schmelzverfahrensproteine wurden durch Affinit&auml;tschromatographie gereinigt. 6xHis:HC-Pro und MBP:HC-Pro wurden teilweise l&ouml;slich. Elektrophoretische Mobilit&auml;t-UMSCHALT-Assays gezeigt, dass nur MBP:HC-Pro stellt die sRNA-Bindung-Aktivit&auml;t. Das rekombinante HC-Pro gebunden 21 bp SiRNAs sowie 19 bp und 24 bp SiRNAs. Eine Punktmutation im Feld stark konservierten FRNK produziert das HC-Pro(FINK)-Protein, das zuvor gezeigte reduzierte virale Symptome und schwache sRNA-Bindung zugeordnet werden. In dieser Studie wurde sRNA Bindung von der MBP:HA-HC-Pro(FINK) nicht nachweisbar. Der hohe Ertrag von gereinigtem HC-Pro bietet die M&ouml;glichkeit die Biochemie des Proteins im Detail zu studieren.

Ausdruck, Reinigung und Funktionelle Charakterisierung von rekombinanten Zucchini gelb Mosaik-Virus HC-Pro.

HC-Pro &egrave; una componente di supporto-proteinasi che agisce come una proteina multifunzionale nel ciclo di vita potyviral. Oltre alla sua attivit&agrave; proteolitica, HC-Pro ha la capacit&agrave; di associare duplex piccolo RNAs (sRNAs). Per indagare l&#39;associazione sRNA HC-Pro-mediata in vitro, sono necessarie elevate quantit&agrave; di proteina purificata. Per questo scopo, gli Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) HC-Pro &egrave; stato espresso come una fusione con hexa-istidina (6xHis) o maltosio-binding protein (MBP) in Escherichia coli. Le proteine di fusione espressa sono state purificate mediante cromatografia di affinit&agrave;. 6xHis:HC-Pro e MBP:HC-Pro sono stati parzialmente solubile. Mobilit&agrave; elettroforetica-shift le analisi hanno dimostrato che solo MBP:HC-Pro presenta l&#39;attivit&agrave; di associazione sRNA. HC-Pro ricombinante associato siRNAs bp 21 cos&igrave; come 19 bp e 24 bp siRNA. Una mutazione puntiforme nella casella FRNK altamente conservata prodotta la proteina HC-Pro(FINK), in precedenza mostrata di essere associato a sintomi virali ridotti e debole associazione sRNA. In questo studio, associazione sRNA del MBP:HA-HC-Pro(FINK) non era rilevabile. L&#39;alto rendimento di purificato HC-Pro offre la possibilit&agrave; di studiare la biochimica della proteina in dettaglio.

Espressione, purificazione e caratterizzazione funzionale di ricombinante zucchine gialle virus del mosaico del HC-Pro.

HC-Pro&#x306F;potyviral&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x96E2;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x6D3B;&#x6027;&#x304B;&#x3089;&#x3001;HC-Pro&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;RNA&#xFF08;sRNAs&#xFF09;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; in vitro&#x3067;&#x306E;HC-Pro&#x306E;&#x5A92;&#x4ECB;&#x306E;sRNA&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;&#x9AD8;&#x3044;&#x91D1;&#x984D;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30BA;&#x30C3;&#x30AD;&#x30FC;&#x30CB;&#x9EC4;&#x6591;&#x30E2;&#x30B6;&#x30A4;&#x30AF;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;ZYMV&#xFF09;HC-Pro&#x306F;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#xFF08;6&#xD7;&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;MBP&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x30FC;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 6&#xD7;&#xFF1A;HC-Pro&#x3068;MBP&#xFF1A;HC-Pro&#x306F;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x53EF;&#x6EB6;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; HC-Pro&#x304C;&#x591A;&#x6570;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#xFF1A;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x79FB;&#x52D5;&#x5EA6;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;MBP&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;HC-Pro&#x306E;21&#x5869;&#x57FA;&#x5BFE;&#x306E;siRNA&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;19 bp&#x3068;24 bp&#x306E;siRNA&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;FRNK&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5185;&#x306E;&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x75C7;&#x72B6;&#x3068;&#x5F31;&#x3044;&#x306E;sRNA&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;HC-Pro&#x306E;&#xFF08;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30AF;&#xFF09;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;MBP&#x306E;&#x591A;&#x6570;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#xFF1A;HA-HC-Pro&#x306F;&#x3001;&#xFF08;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30AF;&#xFF09;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; HC-Pro&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x9AD8;&#x53CE;&#x7387;&#x3092;&#x8A73;&#x7D30;&#x306B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30BA;&#x30C3;&#x30AD;&#x30FC;&#x30CB;&#x9EC4;&#x6591;&#x30E2;&#x30B6;&#x30A4;&#x30AF;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;HC-Pro&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;

HC-Pro potyviral &#xB77C;&#xC774;&#xD504; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;-&#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC678;&#xC5D0; HC &#xD504;&#xB85C; &#xC774;&#xC911; &#xC791;&#xC740; RNAs (sRNAs)&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. HC &#xD504;&#xB85C; &#xC911;&#xC7AC; sRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCCB4; &#xC678; &#xC870;&#xC0AC;, &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB2E4;&#xB7C9;&#xC774; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBAA9;&#xC801;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD638;&#xBC15; &#xC610;&#xB85C;&#xC6B0; &#xBAA8;&#xC790;&#xC774;&#xD06C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (ZYMV) HC &#xD504;&#xB85C; hexa-&#xD788;&#xC2A4;&#xD2F0;&#xB518; (6xHis) &#xB610;&#xB294; &#xB9D0;&#xD1A0;&#xC2A4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (MBP) &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD4E8;&#xC804;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xD4E8;&#xC804; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCE5C;&#xD654;&#xC131; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 6xHis:HC-&#xD504;&#xB85C; MBP:HC-&#xD504;&#xB85C; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6A9; &#xD574; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xAE30;&#xB3D9;&#xC131; &#xAD50;&#xB300; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC99D;&#xBA85; &#xADF8; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; MBP:HC-sRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; HC &#xD504;&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; 19&#xB85C; 21 bp siRNAs &#xD608;&#xC555;&#xACFC; 24 bp siRNAs. &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; FRNK &#xC0C1;&#xC790;&#xC5D0; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC99D;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xC57D;&#xD55C; sRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; HC-Pro(FINK) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; mbp:ha-hc-pro(fink)&#xC758; sRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC815;&#xD654; HC-&#xD504;&#xB85C;&#xC758; &#xACE0;&#xC218;&#xC775; &#xC790;&#xC138;&#xD558;&#xAC8C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2DD;, &#xC815;&#xD654; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD638;&#xBC15;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xC610;&#xB85C;&#xC6B0; &#xBAA8;&#xC790;&#xC774;&#xD06C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; HC &#xD504;&#xB85C;.

HC-Pro es un componente auxiliar-proteinasa, que act&#xFA;a como una prote&#xED;na multifuncional en el ciclo de vida potyviral. Aparte de su actividad proteol&#xED;tica, HC-Pro tiene la capacidad de unirse d&#xFA;plex peque&#xF1;os RNAs (sRNAs). Para investigar HC-Pro-mediada vinculante sRNA in vitro, altas cantidades de la prote&#xED;na purificada se requieren. Para este prop&#xF3;sito, el virus del mosaico amarillo del calabac&#xED;n (ZYMV) HC-Pro se expres&#xF3; como una fusi&#xF3;n con hexa-histidina (6xHis) o maltosa-prote&#xED;na de uni&#xF3;n (MBP) en Escherichia coli. Las prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n expresadas se purificaron por cromatograf&#xED;a de afinidad. 6xHis: HC-Pro y MBP: HC-Pro fueron parcialmente soluble. La movilidad electrofor&#xE9;tica cambio, los ensayos demostraron que s&#xF3;lo MBP: HC-Pro presenta la actividad sRNA vinculante. El HC-Pro recombinante unida siRNAs 21 pb, as&#xED; como 19 pb y 24 pb siRNAs. Una mutaci&#xF3;n puntual en el cuadro de FRNK altamente conservadas producido el HC-Pro (Fink) prote&#xED;na, previamente demostrado que se asocia con una reducci&#xF3;n de los s&#xED;ntomas virales y sRNA uni&#xF3;n d&#xE9;bil. En este estudio, sRNA vinculante de la MBP: HA-HC-Pro (Fink) no era detectable. El alto rendimiento de purificada HC-Pro ofrece la posibilidad de estudiar la bioqu&#xED;mica de la prote&#xED;na en detalle.

Expresi&#xF3;n, purificaci&#xF3;n y caracterizaci&#xF3;n funcional de prote&#xED;nas recombinantes del virus del mosaico amarillo del calabac&#xED;n HC-Pro

&#x5E2E;&#x52A9;&#x5668;&#x7EC4;&#x4EF6;-&#x86CB;&#x767D;&#x9176; (HC Pro) &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4; potyviruses&#x3002;&#x5728;&#x5B83;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x6291;&#x764C;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5C0F; RNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F; HC Pro &#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;HC Pro &#x4E5F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x6291;&#x5236;&#x5668;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;HC Pro &#x53EF;&#x80FD;&#x6291;&#x5236;&#x534E;&#x5242; 1 (HEN1) &#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6709;&#x975E;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5C0F; RNAs &#x589E;&#x52A0;&#x690D;&#x7269;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x77AC;&#x65F6;&#x6216;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8868;&#x8FBE;&#x5B83;&#x7684; HC Pro &#x7684;&#x95F4;&#x63A5;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x897F;&#x846B;&#x82A6;&#x9EC4;&#x82B1;&#x53F6;&#x75C5;&#x6BD2; (ZYMV) HC Pro &#x6291;&#x5236;&#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; HEN1 &#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; HC-Pro(FINK) &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5931;&#x53BB;&#x4E86;&#x5C0F; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; HEN1 &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x603B;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x7EC6;&#x83CC;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5374;&#x6CA1;&#x6709;&#x8FD9;&#x6837;&#x505A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x9176;&#x8054;&#x514D;&#x75AB;&#x5438;&#x9644;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x68C0;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B; HC-Pro(FRNK) &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C; HC-Pro(FINK) &#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; HEN1 &#x4E0E;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x5F3A;&#x4E8E; HC-Pro(FINK) HC-Pro(FRNK) &#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x6BCD;&#x9898;&#x6620;&#x5C04;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178; ZYMV HC-Pro &#x7684;&#x7ACB;&#x573A; 139 &#x548C; 320 &#x95F4;&#x4F4D;&#x4E8E; HEN1 &#x4E92;&#x52A8;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

&#x5C0F;&#x897F;&#x846B;&#x82A6;&#x9EC4;&#x82B1;&#x53F6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x5E2E;&#x52A9;&#x5668;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x4F53;&#x5916;&#x534E;&#x5242; 1 &#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

The helper component-proteinase (HC-Pro) is a multifunctional protein found among potyviruses. With respect to its silencing suppressor function, small RNA binding appears to be the major activity of HC-Pro. HC-Pro could also exhibit other suppressor activities. HC-Pro may inhibit the Hua Enhancer 1 (HEN1) activity. There is indirect evidence showing that either transient or stable expression of HC-Pro in plants results in an increase of non-methylated small RNAs. Here, we demonstrated that recombinant Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) HC-Pro inhibited the methyltransferase activity of HEN1 in vitro. Moreover, we found that the HC-Pro(FINK) mutant, which has lost small RNA-binding activity, inhibited HEN1 activity, while the truncated proteins and total soluble bacterial proteins did not. Using the ELISA-binding assay, we provided evidence that the HC-Pro(FRNK) wild-type and HC-Pro(FINK) both bound to HEN1, with HC-Pro(FRNK) binding stronger than HC-Pro(FINK). Motif mapping analysis revealed that the amino acids located between positions 139 and 320 of ZYMV HC-Pro were associated with HEN1 interaction.

The helper component-proteinase of the Zucchini yellow mosaic virus inhibits the Hua Enhancer 1 methyltransferase activity in vitro.

L&#x26;#39;aide composante-prot&#xE9;inase (HC-Pro) est une prot&#xE9;ine multifonctionnelle trouv&#xE9;e parmi les potyvirus. En ce qui concerne sa fonction de suppresseur de silencing, petit ARN de liaison semble &#xEA;tre la principale activit&#xE9; de HC-Pro. HC-Pro peut &#xE9;galement pr&#xE9;senter d&#x26;#39;autres activit&#xE9;s suppresseurs. HC-Pro peut inhiber la Enhancer Hua 1 (HEN1) l&#x26;#39;activit&#xE9;. Il ya des preuves indirectes montrant que l&#x26;#39;expression transitoire ou stable de HC-Pro dans les r&#xE9;sultats de plantes dans une augmentation de la non-m&#xE9;thyl&#xE9;s petits ARN. Ici, nous avons d&#xE9;montr&#xE9; que recombinant courgette jaune virus de la mosa&#xEF;que (ZYMV) HC-Pro a inhib&#xE9; l&#x26;#39;activit&#xE9; m&#xE9;thyltransf&#xE9;rase de HEN1 in vitro. En outre, nous avons constat&#xE9; que le HC-Pro (FINK) mutant, qui a perdu petit ARN activit&#xE9; de liaison, inhib&#xE9; l&#x26;#39;activit&#xE9; HEN1, tandis que les prot&#xE9;ines tronqu&#xE9;es et solubles totales prot&#xE9;ines bact&#xE9;riennes n&#x26;#39;a pas fait. En utilisant le test ELISA de liaison, nous avons fourni la preuve que le HC-Pro (FRNK) de type sauvage et HC-Pro (Fink) &#xE0; la fois li&#xE9; &#xE0; HEN1, avec HC-Pro (FRNK) une liaison plus forte que HC-Pro (Fink). Analyse cartographique Motif r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que les acides amin&#xE9;s situ&#xE9;s entre les positions 139 et 320 du ZYMV HC-Pro ont &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;interaction HEN1.

Le Helper Component-prot&#xE9;inase du virus de la mosa&#xEF;que jaune de la courgette Inhibe la Hua Enhancer une activit&#xE9; m&#xE9;thyltransf&#xE9;rase in vitro

Die Helfer-Komponente-Proteinase (HC-Pro) ist ein multifunktionales Protein unter Potyviruses gefunden. In Bezug auf seine silencing Tumorsuppressor-Funktion scheint kleine RNA-Bindung die Hauptaktivit&auml;t des HC-Pro. HC-Pro k&ouml;nnte auch andere Tumorsuppressor-Aktivit&auml;ten zeigen. HC-Pro kann die Hua-Enhancer-1 (Huhns1)-Aktivit&auml;t hemmen. Es gibt indirekte Beweise daf&uuml;r, dass entweder vor&uuml;bergehend oder stabile Ausdruck des HC-Pro in Pflanzen f&uuml;hrt zu einem Anstieg von kleine RNAs nicht methyliert. Hier wir bewiesen, dass rekombinante Zucchini yellow Mosaic Virus (ZYMV) HC-Pro hemmte die Methyltransferase-Aktivit&auml;t von in-vitro-Huhns1. Dar&uuml;ber hinaus fanden wir, dass die HC-Pro(FINK)-Mutant, die kleine RNS-bindene Aktivit&auml;t verloren hat, Huhns1 Aktivit&auml;t, gehemmt, w&auml;hrend die abgeschnittene Proteine und total l&ouml;sliche bakterielle Proteine nicht. Unter Verwendung der ELISA-Bindung-Probe, haben wir Beweise, die sowohl die HC-Pro(FRNK) Wild-Typ als auch HC-Pro(FINK) an Huhns1, mit HC-Pro(FRNK) binden st&auml;rker als HC-Pro(FINK) gebunden. Motiv-Zuordnung-Analyse ergab, dass die Aminos&auml;uren, gelegen zwischen Positionen 139 und 320 von ZYMV HC-Pro Huhns1 Interaktion zugeordnet waren.

Die Helfer-Komponente-Proteinase des Zucchini yellow Mosaic Virus hemmt die Hua Enhancer 1-Methyltransferase-Aktivit&auml;t in-vitro.

Il componente di supporto-proteinasi (HC-Pro) &egrave; una proteina multifunzionale si trova tra potyviruses. Per quanto riguarda la sua funzione di silenziamento soppressore, piccolo RNA binding sembra essere l&#39;attivit&agrave; principale di HC-Pro. HC-Pro potrebbe presentare anche altre attivit&agrave; suppressor. HC-Pro pu&ograve; inibire l&#39;attivit&agrave; di Hua Enhancer 1 (HEN1). Ci sono prove indirette mostrando quell&#39;espressione transiente o stabile di HC-Pro nei risultati di piante in un aumento delle non-metilato piccolo RNAs. Qui, abbiamo dimostrato che recombinant virus del mosaico giallo del zucchine (ZYMV) HC-Pro inibito l&#39;attivit&agrave; di methyltransferase del HEN1 in vitro. Inoltre, abbiamo trovato che il mutante HC-Pro(FINK), che ha perso il piccolo attivit&agrave; RNA-binding, inibito HEN1 attivit&agrave;, mentre le proteine troncate e proteine batteriche totali solubili non ha fatto. Utilizzando il test ELISA-associazione, abbiamo fornito la prova che il selvaggio-tipo HC-Pro(FRNK) e HC-Pro(FINK) sono entrambi legati a HEN1, con HC-Pro(FRNK) di associazione pi&ugrave; forte di HC-Pro(FINK). Motif mappatura analisi hanno rivelato che gli amminoacidi che si trova tra posizioni 139 e 320 di ZYMV HC-Pro sono stati associati con interazione HEN1.

Il componente helper-proteinasi il virus del mosaico giallo zucchine inibisce l&#39;attivit&agrave; di metiltransferasi Hua Enhancer 1 in vitro.

&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;HC-Pro&#xFF09;&#x306F;&#x30DD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B5;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;small RNA&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;HC-Pro&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x601D;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x3002; HC-Pro&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; HC-Pro&#x306F;&#x3001;&#x83EF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;1&#xFF08;HEN1&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x975E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;small RNA&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;HC-Pro&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x5F0F;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30BA;&#x30C3;&#x30AD;&#x30FC;&#x30CB;&#x9EC4;&#x6591;&#x30E2;&#x30B6;&#x30A4;&#x30AF;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;ZYMV&#xFF09;HC-Pro&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;HEN1&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x9593;&#x306B;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;RNA&#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5931;&#x3063;&#x3066;&#x3057;&#x307E;&#x3063;&#x305F;HC-Pro&#x306E;&#xFF08;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30AF;&#xFF09;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x3001;&#x3001;HEN1&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; ELISA&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;HC-Pro&#x306E;&#xFF08;FRNK&#xFF09;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;HC-Pro&#x306E;&#xFF08;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30AF;&#xFF09;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;H&#x200B;&#x200B;C-Pro&#x306E;&#xFF08;FRNK&#xFF09;HC-Pro&#x306E;&#xFF08;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30AF;&#xFF09;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x7D50;&#x5408;&#x5F37;&#x3044;&#x3068;&#x3001;HEN1&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x4F4D;&#x7F6E;139&#x3068;ZYMV HC-Pro&#x306E;320&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x304C;HEN1&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30BA;&#x30C3;&#x30AD;&#x30FC;&#x30CB;&#x9EC4;&#x6591;&#x30E2;&#x30B6;&#x30A4;&#x30AF;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x83EF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;1&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;

&#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; (HC-Pro)&#xB294; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; potyviruses &#xC0AC;&#xC774; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xADF8; silencing &#xC5B5;&#xC555; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD558;&#xC5EC; &#xC791;&#xC740; RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; HC-&#xD504;&#xB85C;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xD65C;&#xB3D9; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;. HC &#xD504;&#xB85C; &#xB610;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC5B5;&#xC555; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC804;&#xC2DC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. HC &#xD504;&#xB85C; Hua &#xC99D;&#xAC15; 1 (HEN1) &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. HC-&#xD504;&#xB85C;&#xC758; &#xADF8; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xB610;&#xB294; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC2DD; &#xBE44; &#xAC20; &#xC791;&#xC740; Rnas&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xAC04;&#xC811; &#xC99D;&#xAC70;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD638;&#xBC15; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9; &#xBAA8;&#xC790;&#xC774;&#xD06C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (ZYMV) &#xC2DC;&#xC5F0; HC Pro HEN1 &#xCCB4; &#xC678;&#xC758; methyltransferase &#xD65C;&#xB3D9; &#xC800;&#xD574;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC798;&#xB9B0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xC138;&#xADE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCD1D; &#xC6A9; &#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB3D9;&#xC548; &#xC791;&#xC740; RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC783;&#xC740;, HC-Pro(FINK) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; HEN1 &#xD65C;&#xB3D9; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. HC-Pro(FRNK) &#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xD0C0;&#xC785; &#xBC0F; HC-Pro(FINK) HEN1, HC-Pro(FRNK) HC-Pro(FINK) &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xAC15;&#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD568;&#xAED8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; ELISA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;. &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB9E4;&#xD551; &#xBD84;&#xC11D; &#xC704;&#xCE58; 139 &#xBC0F; 320 ZYMV HC-&#xD504;&#xB85C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; HEN1 &#xC0C1;&#xD638; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;.

&#xD638;&#xBC15; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9; &#xBAA8;&#xC790;&#xC774;&#xD06C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC131;&#xBD84;&#xC744; &#xCCB4; &#xC678; Hua &#xC99D;&#xAC15; 1 methyltransferase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

El ayudante componente-proteinasa (HC-Pro) es una prote&#xED;na multifuncional encontrado entre potyvirus. Con respecto a su funci&#xF3;n supresora de silenciamiento, los peque&#xF1;os ARN de uni&#xF3;n parece ser la principal actividad de HC-Pro. HC-Pro tambi&#xE9;n podr&#xED;a presentar otras actividades supresoras. HC-Pro puede inhibir la Enhancer Hua 1 (HEN1) la actividad. Hay evidencia indirecta que muestra que la expresi&#xF3;n sea transitoria o estable de HC-Pro en los resultados de las plantas en un aumento de la no-metilados peque&#xF1;os RNAs. Aqu&#xED;, hemos demostrado que recombinante del virus del mosaico amarillo del calabac&#xED;n (ZYMV) HC-Pro inhibe la actividad de la metiltransferasa HEN1 in vitro. Adem&#xE1;s, se encontr&#xF3; que el HC-Pro (Fink) mutante, que ha perdido peque&#xF1;o ARN actividad de uni&#xF3;n, inhibi&#xF3; HEN1 actividad, mientras que las prote&#xED;nas truncadas y el total de prote&#xED;nas bacterianas solubles no lo hizo. Utilizando la prueba de ELISA de uni&#xF3;n, nos proporcionan evidencia de que el HC-Pro (FRNK) de tipo salvaje y HC-Pro (Fink), ambos obligados a HEN1, con HC-Pro (FRNK) de uni&#xF3;n m&#xE1;s fuerte que el HC-Pro (Fink). An&#xE1;lisis con motivos mapeo revel&#xF3; que los amino&#xE1;cidos situados entre las posiciones 139 y 320 de ZYMV HC-Pro se asociaron con HEN1 interacci&#xF3;n.

El ayudante de componentes de la proteinasa del virus del mosaico amarillo del calabac&#xED;n Inhibe la Hua Enhancer una actividad metiltransferasa in vitro

&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x91CC;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7ECF;&#x5E38;&#x6210;&#x4E3A;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x6C89;&#x9ED8;&#x672A;&#x77E5;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x901A;&#x5E38;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x6D89;&#x53CA;&#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; Rna (siRNAs) &#x76F4;&#x63A5;&#x6216;&#x95F4;&#x63A5;&#x5730;&#x9488;&#x5BF9;&#x540C;&#x6E90; DNA &#x548C; mRNA &#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x548C;&#x9000;&#x5316;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6BD4;&#x8F83;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x70DF;&#x8349;&#x548C;&#x70DF;&#x8349;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7269;&#x79CD;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5236;&#x4F5C;&#x4E86;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684; siRNAs&#x3002;N.&#x672C;&#x751F;&#x70DF;&#xFF0C;&#x5728; self-silencing &#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x6D89;&#x53CA; mRNA &#x964D;&#x89E3;&#x548C;&#x5BC6; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x7F16;&#x7801;&#x533A;&#x3002;&#x5728;&#x7EA2;&#x82B1;&#xFF0C;self-silencing &#x53D1;&#x751F;&#x65E0;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684; mRNA &#x964D;&#x89E3;&#xFF0C;&#x4F4E;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7F16;&#x7801;&#x533A;&#x540C;&#x6E90;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x91CC;&#xFF0C;siRNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x6C89;&#x9ED8; mRNA &#x964D;&#x89E3;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5E73;&#x79FB;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x53D1;&#x8D77;&#x548C;&#x8BBE;&#x7ACB;&#x7684; self-silencing de novo &#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x663E;&#x8457;&#x5DEE;&#x5F02;&#x4E0E;&#x5DEE;&#x5F02; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x8868;&#x660E; RNA &#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x7EC6;&#x8282;&#x867D;&#x7136;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x8282;&#x7701;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x6240;&#x4E0D;&#x540C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x5173;&#x95ED;&#x690D;&#x7269;&#x7269;&#x79CD;&#x3002;

&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x70DF;&#x8349;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7269;&#x79CD;&#x95F4;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x6C89;&#x9ED8;&#x3002;

In plants, transgenes frequently become spontaneously silenced for unknown reasons. Typically, transgene silencing involves the generation of small interfering RNAs (siRNAs) that directly or indirectly target cognate DNA and mRNA sequences for methylation and degradation, respectively. In this report, we compared spontaneous silencing of a transgene in Nicotiana benthamiana and Nicotiana tabacum. In both species, abundant siRNAs were produced. In N. benthamiana, the self-silencing process involved mRNA degradation and dense DNA methylation of the homologous coding region. In N. tabacum, self-silencing occurred without complete mRNA degradation and with low methylation of the cognate coding region. Our data indicated that in plants, siRNA-mediated spontaneous silencing is, in addition to mRNA degradation, based on translational inhibition. Differences in the initiation and establishment of self-silencing together with marked differences in the degree of de novo DNA methylation showed that the mechanistic details of RNA silencing, although largely conserved, may vary also in genetically close plant species.

Diverse spontaneous silencing of a transgene among two Nicotiana species.

Chez les plantes, les transg&#xE8;nes deviennent souvent spontan&#xE9;ment r&#xE9;duit au silence pour des raisons inconnues. En r&#xE8;gle g&#xE9;n&#xE9;rale, le silence du transg&#xE8;ne implique la g&#xE9;n&#xE9;ration de petits ARN interf&#xE9;rents (siRNA) qui, directement ou indirectement l&#x26;#39;ADN cible et apparent&#xE9; s&#xE9;quences d&#x26;#39;ARNm pour la m&#xE9;thylation et la d&#xE9;gradation, respectivement. Dans ce rapport, nous avons compar&#xE9; silence spontan&#xE9;e d&#x26;#39;un transg&#xE8;ne dans Nicotiana benthamiana et Nicotiana tabacum. Dans les deux esp&#xE8;ces, abondantes siRNA ont &#xE9;t&#xE9; produites. Dans N. benthamiana, le processus d&#x26;#39;auto-silencing impliqu&#xE9;s d&#xE9;gradation de l&#x26;#39;ARNm et de m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN dense de la r&#xE9;gion de codage homologue. Dans N. tabacum, auto-silencing a eu lieu sans d&#xE9;gradation de l&#x26;#39;ARNm complet et &#xE0; la m&#xE9;thylation faible de la r&#xE9;gion de codage apparent&#xE9;. Nos donn&#xE9;es indiqu&#xE9; dans les plantes, siARN m&#xE9;di&#xE9;e silencieux spontan&#xE9;e est, en outre la d&#xE9;gradation de l&#x26;#39;ARNm, bas&#xE9;e sur l&#x26;#39;inhibition de translation. Les diff&#xE9;rences dans l&#x26;#39;initiation et mise en place de l&#x26;#39;auto-taire avec des diff&#xE9;rences marqu&#xE9;es dans le degr&#xE9; de m&#xE9;thylation d&#x26;#39;ADN de novo a montr&#xE9; que les d&#xE9;tails m&#xE9;canistiques de RNA silencing, bien que largement conserv&#xE9;e, peut varier aussi en esp&#xE8;ces v&#xE9;g&#xE9;tales g&#xE9;n&#xE9;tiquement proches.

Divers Silencing spontan&#xE9;e d&#x26;#39;un transg&#xE8;ne Parmi les esp&#xE8;ces de Nicotiana Deux

Bei Pflanzen werden transgene h&auml;ufig spontan aus unbekannten Gr&uuml;nden verstummt. In der Regel beinhaltet die Transgene Schweigen zu die Generation von kleinen interferierender RNAs (SiRNAs), die direkt oder indirekt cognate DNA und mRNA-Sequenzen f&uuml;r Methylierung und Erniedrigung, bzw. Ziel. In diesem Bericht verglichen wir spontan zum Schweigen, der ein Transgen in Nicotiana Benthamiana und Nicotiana Tabacum. Beide Arten wurden reichlich SiRNAs produziert. N. Benthamiana beteiligt der self-silencing Prozess mRNA Abbau- und dichten DNA-Methylierung der homologen kodierende Region. In N. Tabacum kam die self-silencing ohne vollst&auml;ndiger Abbau der mRNA und mit niedrigen Methylierung von das Cognate Kodierung der Region. Unsere Daten zeigten, dass in Pflanzen, SiRNA-vermittelte spontane Unterdr&uuml;ckender neben mRNA Abbau, auf translational Hemmung basiert. Unterschiede in der Initiierung und Etablierung eines self-silencing zusammen mit deutliche Unterschiede im Grad der de Novo DNA-Methylierung zeigte, dass die mechanistischen Details RNA silencing, schlie&szlig;en Obwohl weitgehend konserviert, variieren auch genetisch Pflanzenarten.

Diverse spontane Unterdr&uuml;ckender von eine Transgene unter zwei Nicotiana-Arten.

Nelle piante, transgeni frequentemente diventano spontaneamente silenziati per ragioni sconosciute. Transgene silenziamento comporta in genere, la generazione del piccolo RNAs d&#39;interferenza (siRNAs) che direttamente o indirettamente come destinazione affine sequenze del DNA e mRNA per metilazione e degrado, rispettivamente. In questa relazione, abbiamo confrontato il silenziamento spontanea di un transgene in Nicotiana benthamiana e Nicotiana tabacum. In entrambe le specie, abbondanti siRNAs sono state prodotte. Nel N. benthamiana, il processo di self-silencing coinvolto degradazione di mRNA e densa metilazione del DNA della regione codificante omologa. Nel N. tabacum, self-silencing &egrave; avvenuto senza degradazione di mRNA completo e con bassa metilazione di cognate codifica regione. Nostri dati hanno indicato che nelle piante, siRNA-mediated silencing spontanea &egrave;, oltre alla degradazione di mRNA, basata sulla inibizione traslazionale. Le differenze nell&#39;iniziazione e istituzione di self-silencing insieme a marcate differenze nel grado di de novo metilazione del DNA ha dimostrato che i dettagli meccanicistici di silenziamento del RNA, anche se in gran parte conservate, possono variare anche in geneticamente vicino specie vegetali.

Diversi silenziamento spontanea di un transgene tra due specie di Nicotiana.

&#x690D;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x7406;&#x7531;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306B;&#x6C88;&#x9ED9;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306B;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x540C;&#x65CF;DNA&#x3068;mRNA&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#xFF08;siRNA&#xFF09;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x4F34;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30A2;&#x30CA;&#xB7;&#x30D9;&#x30F3;&#x30B5;&#x30DF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x30A2;&#x30CA;&#x30BF;&#x30D0;&#x30AB;&#x30E0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E21;&#x7A2E;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;siRNA&#x3092;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x3002; N.&#x30D9;&#x30F3;&#x30B5;&#x30DF;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;mRNA&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x3068;&#x76F8;&#x540C;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3002; N.&#x306E;&#x30A2;&#x30CA;&#x30BF;&#x30D0;&#x30AB;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x6291;&#x5236;&#x306F;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;mRNA&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x540C;&#x65CF;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x4F4E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x3067;&#x306F;&#x3001;siRNA&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x52A3;&#x5316;&#x306E;mRNA&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x306E;de novo DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30BB;&#x30EB;&#x30D5;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x3068;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;RNA&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x7A2E;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x3067;&#x3082;&#x5909;&#x308F;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;

&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x7A2E;&#x9593;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;

&#xC2DD;&#xBB3C;, transgenes &#xC790;&#xC8FC; &#xB420; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE68;&#xBB35; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC774;&#xC720;&#xB85C;. &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC9C1;&#xC811; &#xB610;&#xB294; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC01;&#xAC01; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xBC0F; &#xC800;&#xD558;, &#xB3D9;&#xC871; DNA&#xC640; mRNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBC29;&#xD574; RNAs (siRNAs) &#xC138;&#xB300; &#xD3EC;&#xD568; transgene &#xC785;&#xC744;. &#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; Nicotiana benthamiana &#xBC0F; Nicotiana tabacum transgene&#xC758; &#xC785;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50;. &#xB450; &#xC885;&#xC758; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; siRNAs &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBA85;. benthamiana self-silencing &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xCC38;&#xC5EC; mRNA &#xC800;&#xD558;&#xC640; &#xB3D9;&#xC885; &#xCF54;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xC9D9;&#xC740; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;. &#xBA85;. tabacum self-silencing &#xC644;&#xC804; &#xD55C; mRNA &#xC800;&#xD558; &#xC5C6;&#xC774;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xCF54;&#xB529; &#xB3D9;&#xACC4;&#xC5B4;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xBA54; &#xD2F8; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; &#xC2DD;&#xBB3C;, &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; &#xC785;&#xC744; siRNA &#xC911;&#xC7AC;, mRNA &#xC800;&#xD558; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xAC1C;&#xC2DC; &#xACE0; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4;&#xC758;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xCC28;&#xC774; &#xD568;&#xAED8; self-silencing&#xC758; &#xC124;&#xB9BD;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; RNA &#xCE68;&#xBB35;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860; &#xC801;&#xC778; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874;, &#xB2E4;&#xB97C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC885;.

&#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC790;&#xC5F0;&#xC758; &#xC785;&#xC744; transgene &#xB450; Nicotiana &#xC885; &#xC911;.

En las plantas, los transgenes con frecuencia se silenci&#xF3; de forma espont&#xE1;nea, por razones desconocidas. Por lo general, silenciamiento de transgenes implica la generaci&#xF3;n de peque&#xF1;os RNAs de interferencia (siRNAs) que directa o indirectamente ADN diana afines y las secuencias de ARNm de la metilaci&#xF3;n y la degradaci&#xF3;n, respectivamente. En este informe, se compar&#xF3; el silenciamiento espont&#xE1;nea de un transg&#xE9;n en Nicotiana benthamiana y Nicotiana tabacum. En ambas especies, abundantes siRNAs fueron producidos. En N. benthamiana, el proceso de auto-silenciamiento participan la degradaci&#xF3;n del ARNm y la metilaci&#xF3;n del ADN denso de la regi&#xF3;n hom&#xF3;loga de codificaci&#xF3;n. En N. tabacum, la auto-silenciamiento se produjo sin la degradaci&#xF3;n del ARNm completo y con la metilaci&#xF3;n bajo de la regi&#xF3;n codificante cognado. Nuestros datos indicaron que en las plantas, ARNsi mediada por silenciamiento espont&#xE1;nea es, adem&#xE1;s de ARNm degradaci&#xF3;n, basado en la inhibici&#xF3;n de traslaci&#xF3;n. Las diferencias en el inicio y la consolidaci&#xF3;n de la auto-silenciamiento, junto con marcadas diferencias en el grado de metilaci&#xF3;n del ADN de novo demostraron que conocer el mecanismo de silenciamiento de ARN, aunque conservado en gran parte, puede variar tambi&#xE9;n en especies de plantas gen&#xE9;ticamente cercanos.

El silenciamiento diversa espont&#xE1;nea de un transg&#xE9;n Entre dos especies de Nicotiana

&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x52A9;&#x624B;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; (HC Pro) &#x7684; potyviruses &#x5305;&#x542B; autoproteolytic &#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x86CB;&#x767D; 1 (P1) &#x548C; NIa &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6210;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x591A;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86; autoproteolytic (ZYMV) &#x5C0F;&#x897F;&#x846B;&#x82A6;&#x9EC4;&#x82B1;&#x53F6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x57DF; HC Pro&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x8868;&#x8FBE; MBP:HC-&#x5305;&#x542B;&#x7F3A;&#x5931;&#x6216;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x5728;&#x4EFB;&#x4E00; N-&#x6216; C-&#x603B;&#x7AD9;&#x7684; HC Pro &#x86CB;&#x767D; Pro&#xFF1A; &#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x68C0;&#x67E5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x5FC5;&#x9700;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; ZYMV HC-Pro &#x662F;&#x6709;&#x522B;&#x4E8E;&#x70DF;&#x8349;&#x8680;&#x523B; HC Pro &#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x5728; potyviruses &#x4E4B;&#x95F4;&#xFF0C;&#x5747;&#x53D7;&#x5230;&#x4FDD;&#x80B2;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x57DF;&#x3002;

Autoproteolytic &#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5E2E;&#x52A9;&#x5668;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x897F;&#x846B;&#x82A6;&#x5206;&#x6790;&#x9EC4;&#x8272;&#x82B1;&#x53F6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;

The multifunctional helper component proteinase (HC-Pro) of potyviruses contains an autoproteolytic function that, together with the protein 1 (P1) and NIa proteinase, processes the polyprotein into mature proteins. In this study, we analysed the autoproteolytic active domain of zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) HC-Pro. Several Escherichia coli-expressed MBP:HC-Pro:GFP mutants containing deletions or point mutations at either the N- or C-terminus of the HC-Pro protein were examined. Our results showed that amino acids essential for the proteolytic activity of ZYMV HC-Pro are distinct from those of the tobacco etch virus HC-Pro, although the amino acid sequences in the proteolytic active domain are conserved among potyviruses.

Analysis of the autoproteolytic activity of the recombinant helper component proteinase from zucchini yellow mosaic virus.

La prot&#xE9;inase aide multifonctionnel composante (SC-Pro) de potyvirus contient une fonction autoprot&#xE9;olytique que, conjointement avec la prot&#xE9;ine 1 (P1) et NIa prot&#xE9;inase, traite la polyprot&#xE9;ine en prot&#xE9;ines matures. Dans cette &#xE9;tude, nous avons analys&#xE9; le domaine autoprot&#xE9;olytique active du virus de la mosa&#xEF;que jaune de la courgette (ZYMV) HC-Pro. Plusieurs d&#x26;#39;Escherichia coli a exprim&#xE9; MBP: HC-Pro: mutants GFP contenant des d&#xE9;l&#xE9;tions ou des mutations ponctuelles &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N-ou C-terminale de la prot&#xE9;ine HC-Pro ont &#xE9;t&#xE9; examin&#xE9;s. Nos r&#xE9;sultats ont montr&#xE9; que les acides amin&#xE9;s essentiels pour l&#x26;#39;activit&#xE9; prot&#xE9;olytique de ZYMV HC-Pro sont distinctes de celles du virus etch du tabac HC-Pro, bien que les s&#xE9;quences d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s dans le domaine prot&#xE9;olytique active sont conserv&#xE9;es chez les potyvirus.

Analyse de l&#x26;#39;activit&#xE9; de la prot&#xE9;inase autoprot&#xE9;olytique composant auxiliaire recombinant du virus de la mosa&#xEF;que jaune de la courgette

Die multifunktionale Helfer Komponente Proteinase (HC-Pro) des Potyviruses enth&auml;lt eine Autoproteolytic Funktion, die zusammen mit dem Protein 1 (P1) und NIa Proteinase, verarbeitet das Polyprotein in Reife Proteine. In dieser Studie analysierten wir Autoproteolytic active Dom&auml;ne Zucchini yellow Mosaic Virus (ZYMV) HC-Pro. Mehrere Escherichia-coli-ausgedr&uuml;ckt-MBP:HC-Pro: GFP-Mutanten mit L&ouml;schungen oder Punktmutationen auf entweder die N - oder Carboxyl-Terminus des Proteins HC-Pro wurden untersucht. Unsere Ergebnisse zeigten, dass Aminos&auml;uren essenziell f&uuml;r die proteolytische Aktivit&auml;t der ZYMV HC-Pro unterscheiden sich von denen des Tabaks etch Virus HC-Pro, obwohl in der Aminos&auml;ure-Sequenzen sind proteolytische active-Dom&auml;ne unter Potyviruses konserviert.

Analyse der Autoproteolytic T&auml;tigkeit des rekombinanten Helfer-Komponente-Proteinase aus Zucchini gelb Mosaik-Virus.

La proteinasi componente Supporto multifunzionale (HC-Pro) di potyviruses contiene un autoproteolytic funzione che, insieme con la proteina 1 (P1) e NIa proteinasi, elabora il polyprotein in proteine mature. In questo studio, abbiamo analizzato il dominio attivo autoproteolytic del virus del mosaico giallo zucchine (ZYMV) HC-Pro. Diversi Escherichia coli espressi MBP:HC-mutanti Pro: GFP contenente delezioni o mutazioni puntiformi a o N - o C-terminale della proteina HC-Pro sono stati esaminati. I nostri risultati hanno mostrato che gli amminoacidi essenziali per l&#39;attivit&agrave; proteolitica di ZYMV HC-Pro sono distinte da quelle del tabacco etch virus HC-Pro, anche se l&#39;amminoacido sequenze nel dominio attivo proteolitico sono conservate tra potyviruses.

Analisi dell&#39;attivit&agrave; autoproteolytic della proteinasi componente helper ricombinante da zucchine giallo del virus del mosaico.

&#x30DD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;HC-Pro&#xFF09;&#x306F;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;1&#xFF08;P1&#xFF09;&#x3068;NIA&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x3001;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x30DD;&#x30EA;&#x3092;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x3001;autoproteolytic&#x95A2;&#x6570;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BA;&#x30C3;&#x30AD;&#x30FC;&#x30CB;&#x9EC4;&#x6591;&#x30E2;&#x30B6;&#x30A4;&#x30AF;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;ZYMV&#xFF09;HC-Pro&#x306E;autoproteolytic&#x6D3B;&#x6027;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x767A;&#x73FE;MBP&#xFF1A;HC-Pro&#x306F;&#xFF1A;HC-Pro&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x307E;&#x305F;&#x306F;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x5931;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x542B;&#x3080;GFP&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x6D3B;&#x6027;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x9593;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;ZYMV HC-Pro&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x30A8;&#x30C3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;HC-Pro&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30BA;&#x30C3;&#x30AD;&#x30FC;&#x30CB;&#x9EC4;&#x6591;&#x30E2;&#x30B6;&#x30A4;&#x30AF;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;Autoproteolytic&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x5206;&#x6790;

Potyviruses&#xC758; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; (HC-Pro)&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; autoproteolytic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 1 (P1)&#xACFC; &#xD568;&#xAED8;,&#xC744; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xB294; polyprotein&#xB97C; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; NIa &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD638;&#xBC15; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9; &#xBAA8;&#xC790;&#xC774;&#xD06C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (ZYMV)&#xC758; autoproteolytic &#xD65C;&#xC131; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D; HC &#xD504;&#xB85C;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC744; &#xD45C;&#xBA85; MBP:HC-&#xC0AD;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; N-&#xB610;&#xB294; C-&#xC885;&#xC810; HC &#xD504;&#xB85C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD504;&#xB85C;: GFP &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xD544;&#xC218; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xB3D9; ZYMV HC-&#xD504;&#xB85C;&#xC758; &#xB2F4;&#xBC30;&#xC758; &#xAD6C;&#xBD84;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC5E3;&#xC9C0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; HC-&#xD504;&#xB85C;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; potyviruses &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; &#xBCF4;&#xC874; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xB85D; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;.

&#xD638;&#xBC15;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xC758; autoproteolytic &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xC610;&#xB85C;&#xC6B0; &#xBAA8;&#xC790;&#xC774;&#xD06C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;.

La proteinasa ayudante componente multifuncional (HC-Pro) de potyvirus contiene una funci&#xF3;n autoproteol&#xED;tica que, junto con la prote&#xED;na 1 (P1) y proteinasa NIA, procesa la poliprote&#xED;na en prote&#xED;nas maduras. En este estudio, hemos analizado el dominio autoproteol&#xED;tica activa del virus de mosaico amarillo del calabac&#xED;n (ZYMV) HC-Pro. Varios Escherichia coli expresado MBP: HC-Pro: mutantes GFP contienen deleciones o mutaciones puntuales ya sea en el N o C-terminal de la prote&#xED;na HC-Pro fueron examinados. Nuestros resultados mostraron que los amino&#xE1;cidos esenciales para la actividad proteol&#xED;tica de ZYMV HC-Pro son distintas de las del virus del tabaco etch HC-Pro, aunque las secuencias de amino&#xE1;cidos en el dominio activo proteol&#xED;tica se conservan entre los potyvirus.

Kajohn Boonrod

Proteomics division,
AlPlanta,
Proteomics division, AlPlanta

Neustadt an der Weinstrasse, Germany

Homemade Site Directed Mutagenesis of Whole Plasmids

Kajohn Boonrod

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Proteomics division,AlPlanta,Proteomics division, AlPlanta

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AlPlanta,
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