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Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of ...

Roswell Park Cancer Institute

&#x7EC6;&#x80DE;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x5F02;&#x5E38;&#x662F;&#x6076;&#x6027;&#x8840;&#x6DB2;&#x75C5;&#x8BCA;&#x65AD;&#x53CA;&#x9884;&#x540E;&#x5224;&#x65AD;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6807;&#x51C6;&#x3002;&#x5E38;&#x89C4;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F02;&#x5E38;&#x6838;&#x578B;&#x5206;&#x6790;&#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F; (FISH)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x4E8E;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x4E30;&#x5EA6;&#x7684;&#x6837;&#x672C;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0D;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x4E0D;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x6B8B;&#x7559;&#x75C5; (MRD) &#x9636;&#x6BB5;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6D41;&#x4E3A;&#x4E86;&#x68C0;&#x6D4B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5F02;&#x5E38;&#x5728;&#x6682;&#x505C;&#x540E;&#x9C7C; (&#x9C7C;-&#x662F;&#xFF09;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x81EA;&#x52A8;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x65E5;&#x5FD7;&#x5927;&#x5C0F;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E0E;&#x57FA;&#x4E8E;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x9C7C;&#x7684;&#x9002;&#x7528;&#x6027;-&#x68C0;&#x6D4B;&#x6570;&#x503C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7578;&#x53D8;&#xFF0C;&#x786E;&#x7ACB;&#x4E86;&#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#x548C;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5E38;&#x89C4;&#x9C7C;&#x548C;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6025;&#x6027;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x767D;&#x8840;&#x75C5; (AML) &#x91C7;&#x8D2D;&#x4E34;&#x5E8A;&#x6807;&#x672C;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x7537;&#x6027;&#x548C;&#x5973;&#x6027;&#x5065;&#x5EB7;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6742;&#x4EA4;&#x4E0E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x679A;&#x4E3E;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668; (CEP) 8&#x3001; X &#x548C; Y &#x62C5;&#x4EFB;&#x9057;&#x4F20;&#x75C5;&#x3001; &#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0E;&#x4E09;&#x4F53;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;Monosomies &#x548C; 20,000 &#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5408;&#x5B50;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; 1%&#xFF0C;&#x9AD8;&#x7684;&#x7CBE;&#x786E;&#x5EA6;&#x3002;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x76F8;&#x5173; (R(2) = 0.99&#xFF09; &#x4E0E;&#x5E38;&#x89C4;&#x9C7C;&#x5206;&#x6790;&#x53D1;&#x73B0;&#x91C7;&#x8D2D;&#x4ECE;&#x4E09;&#x4F53;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81; (+8) 8 10 AML &#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x8BCA;&#x65AD;&#x6837;&#x54C1;&#x5E73;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9C7C;&#x7C7B;-&#x662F;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7F13;&#x89E3;&#x5F53;&#x65F6;&#x91C7;&#x8D2D;&#x7684;&#x6837;&#x54C1;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x68C0;&#x6D4B; MRD &#x548C;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559; + &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;

&#x56FE;&#x50CF;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8367;&#x5149;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F;&#x5728;&#x6682;&#x505C;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#x3002;

Cytogenetic abnormalities are important diagnostic and prognostic criteria for hematologic malignancies. Karyotyping and fluorescence in situ hybridization (FISH) are the conventional methods by which these abnormalities are detected. The sensitivity of these microscopy-based methods is limited by the abundance of the abnormal cells in the samples and therefore these analyses are commonly not applicable to minimal residual disease (MRD) stages. A flow cytometry-based imaging approach was developed to detect chromosomal abnormalities following FISH in suspension (FISH-IS), which enables the automated analysis of several log-magnitude higher number of cells compared with the microscopy-based approaches. This study demonstrates the applicability of FISH-IS for detecting numerical chromosome aberrations, establishes accuracy, and sensitivity of detection compared with conventional FISH, and feasibility to study procured clinical samples of acute myeloid leukemia (AML). Male and female healthy donor peripheral blood mononuclear cells hybridized with combinations of chromosome enumeration probes (CEP) 8, X, and Y served as models for disomy, monosomy, and trisomy. The sensitivity of detection of monosomies and trisomies amongst 20,000 analyzed cells was determined to be 1% with a high level of precision. A high correlation (R(2) = 0.99) with conventional FISH analysis was found based on the parallel analysis of diagnostic samples procured from 10 AML patients with trisomy 8 (+8). Additionally, FISH-IS analysis of samples procured at the time of clinical remission demonstrated the presence of residual +8 cells indicating that this approach may be used to detect MRD and associated chromosomal defects.

Image cytometry-based detection of aneuploidy by fluorescence in situ hybridization in suspension.

Anomalies cytog&eacute;n&eacute;tiques sont des crit&egrave;res importants de diagnostiques et pronostiques des cancers h&eacute;matologiques. Caryotypage et hybridation in situ fluorescence (FISH) sont les m&eacute;thodes conventionnelles, par lequel ces anomalies sont d&eacute;tect&eacute;es. La sensibilit&eacute; de ces m&eacute;thodes de microscopie est limit&eacute;e par l&#39;abondance des cellules anormales dans les &eacute;chantillons, et donc ces analyses ne sont g&eacute;n&eacute;ralement pas applicables aux stades de la maladie r&eacute;siduelle (MRD). Un &eacute;coulement cytometry-bas&eacute; d&#39;imagerie approche a &eacute;t&eacute; d&eacute;velopp&eacute; pour d&eacute;tecter des anomalies chromosomiques apr&egrave;s les poissons en suspension (poisson-est), qui permet l&#39;analyse automatis&eacute;e de plusieurs journaux magnitude plus grand nombre de cellules par rapport aux approches ax&eacute;es sur la microscopie. Cette &eacute;tude d&eacute;montre l&#39;applicabilit&eacute; du poisson-est pour d&eacute;tecter des aberrations, &eacute;tablit la pr&eacute;cision et la sensibilit&eacute; de d&eacute;tection par rapport aux poissons classiques et faisabilit&eacute; pour &eacute;tudier des &eacute;chantillons cliniques obtenus de la leuc&eacute;mie my&eacute;lo&iuml;de aigu&euml; (AML). Les cellules mononucl&eacute;aires de sang p&eacute;riph&eacute;rique donneur sain m&acirc;les et femelles hybridaient avec des combinaisons de sondes d&#39;&eacute;num&eacute;ration chromosome (CEP) 8, X et Y ont servi de mod&egrave;les pour la disomie et monosomie, trisomie. La sensibilit&eacute; de d&eacute;tection des monosomiques et trisomies parmi 20 000 cellules analys&eacute;es a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e &agrave; 1 % avec un niveau de pr&eacute;cision &eacute;lev&eacute;. Une forte corr&eacute;lation (r = 0,99) poissons classiques analyse a &eacute;t&eacute; jug&eacute;e fond&eacute;e sur l&#39;analyse parall&egrave;le des &eacute;chantillons diagnostiques achet&eacute;s aupr&egrave;s de dix patients AML avec Trisomie 8 (+ 8). En outre, des poissons-est l&#39;analyse des &eacute;chantillons obtenus au moment de r&eacute;mission clinique a d&eacute;montr&eacute; la pr&eacute;sence de cellules r&eacute;siduelles de + 8 indiquant que cette approche peut &ecirc;tre utilis&eacute;e pour d&eacute;tecter les MRD et associ&eacute;e &agrave; des anomalies chromosomiques.

Image cytometry-d&eacute;tection d&#39;aneuplo&iuml;die par hybridation in situ fluorescence en suspension.

Zytogenetische Anomalien sind wichtige diagnostische und prognostische Kriterien f&uuml;r hematologic Malignancies. Chromosomenanalyse und Fluoreszenz-in Situ-Hybridisierung (FISH) sind die herk&ouml;mmlichen Methoden, mit denen diese Anomalien erkannt werden. Die Empfindlichkeit dieser Mikroskopie-basierten Methoden wird begrenzt durch die F&uuml;lle der abnormen Zellen in den Proben, und daher diese Analysen sind h&auml;ufig nicht auf minimal residual Disease (MRD) Stufen anwendbar. Ein Flow Cytometry-basierten Ansatz imaging wurde entwickelt, um Chromosomenanomalien nach Fisch im Aussetzung zu erkennen (Fisch-ist), wodurch die automatische Analyse von mehrere Protokoll-Gr&ouml;&szlig;enordnung h&ouml;here Anzahl von Zellen im Vergleich mit der Mikroskopie-basierte Ans&auml;tze. Diese Studie zeigt die Anwendbarkeit der Fisch-ist f&uuml;r die Erkennung von numerische Chromosomenaberrationen, legt die Genauigkeit und Empfindlichkeit der Erkennung im Vergleich zu konventionellen Fisch und Machbarkeit beschaffte klinische Proben von Akuter Myeloischer Leuk&auml;mie (AML) zu studieren. M&auml;nnliche und weibliche gesunde Spender peripherem Blut mononukle&auml;ren Zellen hybridisiert mit Kombinationen von Chromosom-Enumeration Sonden (CEP) 8, X und Y diente als Vorbild f&uuml;r Disomie, Monosomie und Trisomie. Die Empfindlichkeit der Erkennung von Monosomien und Alkoholsyndrom unter 20.000 analysierten Zellen war entschlossen, 1 % ein hohes Ma&szlig; an Pr&auml;zision. Eine hohe Korrelation (Optionsbildschirm = 0,99) mit konventionellen Fisch Analyse fand anhand der parallelen Analyse diagnostischer Proben von 10 AML-Patienten mit Trisomie 8 (+ 8) beschafft. Dar&uuml;ber hinaus FISH-Analyse von Proben, die zum Zeitpunkt der klinischen Remission beschafft demonstrierte das Vorhandensein von residual + 8-Zellen, die darauf hinweist, dass dieser Ansatz verwendet werden kann, MRD und zugeh&ouml;rigen chromosomaler Defekte zu erkennen ist.

Bild Cytometry-basierte Erkennung von Aneuploidie durch Fluoreszenz in Situ Hybridisierung in der Schwebe.

Anomalie citogenetiche sono importanti criteri diagnostici e prognostici per neoplasie ematologiche. Cariotipo e l&#39;ibridazione in situ (FISH) sono i metodi convenzionali di cui queste anomalie vengono rilevate. La sensibilit&agrave; di questi metodi basati su microscopia &egrave; limitata dall&#39;abbondanza delle cellule anormali nei campioni e quindi queste analisi non sono comunemente applicabili alle fasi minimal residual disease (MRD). Un approccio di imaging basata su cytometry di flusso &egrave; stato sviluppato per rilevare anomalie cromosomiche seguito pesce in sospensione (pesce-&egrave;), che consente l&#39;analisi automatizzata di diversi log-grandezza superiore numero di cellule confrontato con gli approcci basati sulla microscopia. Questo studio dimostra l&#39;applicabilit&agrave; del pesce-&egrave; per la rilevazione di aberrazioni cromosomiche numeriche, stabilisce di precisione e sensibilit&agrave; di rilevazione rispetto ai convenzionali pesce e fattibilit&agrave; per studiare prelevati campioni clinici di leucemia mieloide acuta (AML). Cellule mononucleate di sangue periferico donatore sano maschio e femmina ibridato con combinazioni di sonde di enumerazione cromosoma (CEP) 8, X e Y serv&igrave; come modelli per uniparentale monosomia e la trisomia. La sensibilit&agrave; di rilevazione di monosomie e le Trisomie tra 20.000 cellule analizzate &egrave; stata determinata al 1% con un alto livello di precisione. Un&#39;alta correlazione (R(2) = 0.99) con pesce convenzionali analisi &egrave; stato trovato sulla base dell&#39;analisi parallela di diagnostiche campioni prelevati da 10 pazienti LMA con trisomia 8 (+ 8). Inoltre, pesce-&egrave; l&#39;analisi dei campioni prelevati al momento della remissione clinica ha dimostrato la presenza di residue + 8 celle, che indica che questo approccio pu&ograve; essere usato per rilevare difetti cromosomici associati e MRD.

Immagine cytometry-rilevamento di aneuploidia dall&#39;ibridazione in situ in sospensione.

&#x7D30;&#x80DE;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7570;&#x5E38;&#x9020;&#x8840;&#x5668;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x8A3A;&#x65AD;&#x3068;&#x4E88;&#x5F8C;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x57FA;&#x6E96;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Karyotyping &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CD;&#x5149;&#x6027;&#x306E;&#x73FE;&#x5834;&#x306E;&#x4EA4;&#x914D; (&#x9B5A;) &#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x3055;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x5FAE;&#x5C11;&#x6B8B;&#x5B58;&#x75C5;&#x5909; (MRD) &#x6BB5;&#x968E;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6D41;&#x308C; cytometry &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; &#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x9B5A;&#x6B21;&#x306E;&#x61F8;&#x6FC1;&#x6DB2;&#x3067;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F; (&#x9B5A;-&#x3067;&#x3059;&#xFF09;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x30ED;&#x30B0; &#x30DE;&#x30B0;&#x30CB;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C9;&#x9AD8;&#x3044;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; &#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x308B;&#x3068;&#x30BB;&#x30EB;&#x6570;&#x306E;&#x81EA;&#x52D5;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x9B5A;&#x306E;&#x9069;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;-&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x6570;&#x7570;&#x5E38;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x9B5A;&#x3068;&#x5B9F;&#x73FE;&#x6027;&#x6025;&#x6027;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5; (AML) &#x306E;&#x8ABF;&#x9054;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x5B66;&#x7FD2;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7537;&#x6027;&#x3068;&#x5973;&#x6027;&#x306E;&#x5065;&#x5EB7;&#x306A;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x5358;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5217;&#x6319;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6; &#xFF08;CEP&#xFF09; 8&#x3001;X &#x3068; Y &#x306E; disomy&#x3001;&#x30E2;&#x30CE;&#x30BD;&#x30DF;&#x30FC;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30BD;&#x30DF;&#x30FC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x7D44;&#x5408;&#x305B;&#x3092;&#x4EA4;&#x914D;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Monosomies &#x3068;&#x30C8;&#x30EA;&#x30BD;&#x30DF;&#x30FC; 20,000 &#x5206;&#x6790;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x306F; 1% &#x7CBE;&#x5EA6;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9AD8;&#x3044;&#x76F8;&#x95A2; (R(2) = 0.99) &#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x9B5A;&#x3068;&#x30C8;&#x30EA;&#x30BD;&#x30DF;&#x30FC; 8 (+8) 10 AML &#x60A3;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x8ABF;&#x9054;&#x8A3A;&#x65AD;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x5E73;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x9B5A;-&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x5BDB;&#x89E3;&#x6642;&#x306B;&#x8ABF;&#x9054;&#x3057;&#x305F;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; MRD &#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6B8B;&#x7559; +8 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8; &#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x86CD;&#x5149; in situ &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x61F8;&#x6FC1;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3067;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3002;

Cytogenetic &#xC774;&#xC0C1; &#xD608;&#xC561; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xBC0F; &#xC804;&#xC870; &#xAE30;&#xC900;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Karyotyping &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD615;&#xAD11; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; (&#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;)&#xB294;&#xC774; &#xC774;&#xC0C1;&#xC774; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xB418;&#xC9C0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xC794;&#xB958; &#xBCD1; (MRD) &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;-&#xAE30;&#xBC18; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC608;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD48D;&#xBD80;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cytometry &#xAE30;&#xBC18; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC811;&#xADFC; &#xD750;&#xB984; &#xC815;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC774;&#xC0C1;&#xC774; &#xAC10;&#xC9C0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; (&#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;-&#xC774;&#xB2E4;), &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;-&#xAE30;&#xBC18; &#xC811;&#xADFC;&#xBC95;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC140;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB85C;&#xADF8; &#xD06C;&#xAE30; &#xB192;&#xC740; &#xBC88;&#xD638;&#xC758; &#xC790;&#xB3D9;&#xB41C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xAC8C;. &#xC774; &#xD559;&#xBB38;&#xC740; &#xC124;&#xBA85; &#xD55C;&#xB2E4; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;&#xC758; &#xC801;&#xC6A9;-&#xC22B;&#xC790; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xCC29;&#xC624; &#xAC80;&#xCD9C;, &#xC815;&#xD655;&#xB3C4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xC120; &#xBC0F; &#xD0C0;&#xB2F9;&#xC131; &#xAE09;&#xC131; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; (AML)&#xC758; &#xC870;&#xB2EC;&#xB41C; &#xC784;&#xC0C1; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB0A8;&#xC131;&#xACFC; &#xC5EC;&#xC131;&#xC758; &#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xB9D0; &#xCD08; &#xD608;&#xC561; &#xB2E8; &#xC140; hybridized &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC5F4;&#xAC70;&#xD615; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; (CEP) 8, X &#xBC0F; Y disomy, monosomy, trisomy &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC5ED;&#xC784;&#xC758; &#xC870;&#xD569;. Monosomies trisomies 20000 &#xBD84;&#xC11D; &#xB41C; &#xC140; &#xB4E4;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C; &#xAC10;&#xB3C4; 1% &#xC815;&#xBC00;&#xB3C4;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB192;&#xC740; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4; (R(2) = 0.99) &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;&#xC640; &#xBD84;&#xC11D; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xC0D8;&#xD50C; trisomy 8 (+ 8)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; 10 AML &#xD658;&#xC790;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xC11C; &#xC870;&#xB2EC;&#xC758; &#xBCD1;&#xB82C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;-&#xC784;&#xC0C1; &#xC0AC; &#xD568; &#xB2F9;&#xC2DC; &#xC870;&#xB2EC; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC774; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; MRD&#xC640; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB41C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xACB0;&#xD568; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC794;&#xC5EC; + 8 &#xC140;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC99D;&#xBA85; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; cytometry &#xAE30;&#xBC18; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xD615;&#xAD11; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; &#xC11C; &#xC2A4; &#xD39C; &#xC158;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC774;&#xC218;&#xC131;&#xC758;.

Anormalidades citogen&eacute;ticas son criterios importantes de diagn&oacute;sticos y pron&oacute;sticos de tumores hematol&oacute;gicos malignos. Cariotipo y la hibridaci&oacute;n fluorescente in situ (FISH) son los m&eacute;todos convencionales, por el cual se detectan estas anormalidades. La sensibilidad de estos m&eacute;todos basados en la microscopia es limitada por la abundancia de las c&eacute;lulas anormales en las muestras y por lo tanto estos an&aacute;lisis com&uacute;nmente no son aplicables a las etapas de la enfermedad residual m&iacute;nima (MRD). Un flujo basado en citometr&iacute;a de imagen enfoque fue desarrollado para detectar anomal&iacute;as cromos&oacute;micas despu&eacute;s de pescado en suspensi&oacute;n (peces-es), que permite el an&aacute;lisis automatizado de varios registro magnitud mayor n&uacute;mero de c&eacute;lulas en comparaci&oacute;n con los enfoques basados en la microscopia. Este estudio demuestra la aplicabilidad de peces-es para la detecci&oacute;n de aberraciones cromos&oacute;micas num&eacute;ricas, establece la precisi&oacute;n y la sensibilidad de detecci&oacute;n en comparaci&oacute;n con peces convencionales y viabilidad para estudiar procuradas muestras cl&iacute;nicas de la leucemia mieloide aguda (AML). C&eacute;lulas mononucleares de sangre perif&eacute;rica de donantes sanos masculinos y femeninos se hibridaci&oacute;n con combinaciones de sondas de enumeraci&oacute;n de cromosoma (CEP) 8, X e Y sirvieron de modelos para uniparental, Monosom&iacute;a y trisom&iacute;a. La sensibilidad de detecci&oacute;n de monosomies y trisom&iacute;as entre 20.000 c&eacute;lulas analizadas fue determinada para ser 1% con un alto nivel de precisi&oacute;n. Una alta correlaci&oacute;n (r = 0.99) con pescado convencional an&aacute;lisis se encontraron en el an&aacute;lisis paralelo de diagn&oacute;sticos muestras de 10 pacientes AML con trisom&iacute;a 8 (+ 8). Adem&aacute;s, los pescados-es el an&aacute;lisis de muestras adquiridos en el momento de la remisi&oacute;n cl&iacute;nica demostr&oacute; la presencia de c&eacute;lulas residuales de + 8 que indica que este enfoque puede utilizarse para detectar MRD y defectos cromos&oacute;micos asociados.

Kristen Humphrey

Department of Flow and Image Cytometry

Roswell Park Cancer Institute

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

Kristen Humphrey

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Flow and Image Cytometry

Roswell Park Cancer Institute

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

Department of Flow and Image Cytometry