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Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Miltenyi Biotec,GmbH

&#x540E;&#x4EE3;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x6210;&#x5E74;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x8111;&#x7684;&#x8111;&#x5BA4;&#x4E0B;&#x533A; &#xFF08;SVZ) &#x7EC4;&#x6210;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; polysialylated &#x672A;&#x6210;&#x719F;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; &#xFF08;PSA(+) &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5B89;&#x57FA; interneurons &#x5230;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5230;&#x55C5;&#x7403; (OB) &#x6765;&#x533A;&#x5206;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76F4;&#x63A5;&#x4ECE;&#x5916;&#x5730;&#x8D44;&#x4EA7;&#x7BA1;&#x5236;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6210;&#x4EBA;&#x5927;&#x8111;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20; PSA(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x7EAF;&#x5316;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x7684;&#x5723;&#x4EBA;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5206;&#x6790;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5BCC;&#x524D;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x751F;&#x5B58;&#x7D20;&#x3001; Sox-4&#x3001; Meis2&#x3001; Dishevelled 2&#x3001; C3aR1 &#x548C;&#x7406;&#x7814; 3110003A17 &#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x548C;&#x8BB8;&#x591A;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x65E0;&#x7684;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x3002;&#x805A;&#x7C7B;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8F74;&#x7A81;&#x5BFC;&#x5411;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7C07;&#x5377;&#x5165;&#x8D8B;&#x5F3A;&#x70C8;&#x662F;&#x589E;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EBF;&#x7D22;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5728;&#x6210;&#x4EBA;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x591A;&#x53D1;&#x6027;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x7624;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6210;&#x4EBA;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x90FD;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x524D;&#x4F53;&#x7684;&#x91CF;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5E73;&#x8861;&#x70B9;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;

&#x4ECE;&#x6210;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5927;&#x8111;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x524D;&#x4F53;&#x7684;&#x7EAF;&#x5316;&#xFF1A; &#x5168;&#x9762;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3001; &#x5206;&#x5316;&#x3001; &#x548C;&#x7A33;&#x6001;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

The progeny of neural stem cells in the subventricular zone (SVZ) of the adult mammalian brain consists in polysialylated NCAM-expressing immature neurons (PSA(+) cells), which migrate to the olfactory bulb (OB) to differentiate into GABAergic interneurons. We purified murine PSA(+) cells directly from the adult brain by FACS and analyzed their gene expression profile by SAGE. Comparative analyses led to the identification of precursor-enriched genes, including Survivin, Sox-4, Meis2, Dishevelled-2, C3aR1 and Riken 3110003A17, and many so far uncharacterized transcripts. Cluster analysis showed that groups of genes involved in axon guidance and gene clusters implicated in chemotaxis are strongly upregulated, indicating a role of both cues in the control of cell migration in the adult brain. Furthermore, genes involved in apoptosis and cell proliferation are co-expressed, suggesting that the amount of precursors that is present in the adult brain is a result of an equilibrium of these processes.

Purification of neuronal precursors from the adult mouse brain: comprehensive gene expression analysis provides new insights into the control of cell migration, differentiation, and homeostasis.

La descendance des cellules souches neurales dans la zone sous-ventriculaire (ZSV) du cerveau des mammif&#xE8;res adultes consiste &#xE0; polysialylated NCAM-exprimant neurones immatures (PSA (+) des cellules), qui migrent vers le bulbe olfactif (OB) &#xE0; se diff&#xE9;rencier en interneurones GABAergiques. Nous avons purifi&#xE9; murin PSA (+) directement &#xE0; partir de cellules du cerveau adulte par FACS et analys&#xE9; leur profil d&#x26;#39;expression g&#xE9;nique par le SAGE. Des analyses comparatives ont permis d&#x26;#39;identifier de pr&#xE9;curseur enrichies g&#xE8;nes, y compris la survivine, Sox-4, Meis2, Dishevelled-2, C3aR1 et Riken 3110003A17, et de nombreuses transcriptions non caract&#xE9;ris&#xE9;s &#xE0; ce jour. L&#x26;#39;analyse typologique a montr&#xE9; que des groupes de g&#xE8;nes impliqu&#xE9;s dans le guidage axonal et groupes de g&#xE8;nes impliqu&#xE9;s dans le chimiotactisme sont fortement r&#xE9;gul&#xE9;s &#xE0; la hausse, indiquant un r&#xF4;le de deux types de signaux dans le contr&#xF4;le de la migration des cellules dans le cerveau adulte. En outre, les g&#xE8;nes impliqu&#xE9;s dans l&#x26;#39;apoptose et la prolif&#xE9;ration des cellules sont co-exprim&#xE9;s, sugg&#xE9;rant que la quantit&#xE9; de pr&#xE9;curseurs qui est pr&#xE9;sent dans le cerveau de l&#x26;#39;adulte est un r&#xE9;sultat d&#x26;#39;un &#xE9;quilibre de ces proc&#xE9;d&#xE9;s.

Purification de pr&#xE9;curseurs neuronaux du cerveau de souris adultes: compl&#xE8;te Analyse expression g&#xE9;nique apporte un nouvel &#xE9;clairage dans le contr&#xF4;le de la migration cellulaire, la diff&#xE9;renciation et l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie

Die Reinigung von neuronalen Vorl&#xE4;uferzellen aus dem Gehirn erwachsener M&#xE4;use: umfassende Genexpressionsanalyse gibt neue Einblicke in die Steuerung der Zellwanderung, Differenzierung und Hom&#xF6;ostase.

La progenie di cellule staminali neurali nella zona subventricolare (SVZ) del cervello dei mammiferi adulti &egrave; costituito da neuroni immaturi polysialylated esprimendo NCAM (cellule PSA(+)), che migrano al bulbo olfattivo (OB) di differenziare in GABAergic interneurons. Abbiamo purificato murine PSA(+) cellule direttamente dal cervello adulto di FACS e analizzato il loro profilo di espressione genica di salvia. Analisi comparative ha portato per l&#39;identificazione del precursore arricchito geni, compresi Survivin, Sox-4, Meis2, 3110003A17 Dishevelled-2, C3aR1 e Riken e molte trascrizioni finora atipici. Cluster analysis ha mostrato che gruppi di geni coinvolti nella guida assone e cluster gene implicato nella chemiotassi sono fortemente sovraregolati, indicando un ruolo di entrambi spunti nel controllo della migrazione delle cellule nel cervello adulto. Inoltre, i geni coinvolti nella cella l&#39;apoptosi e la proliferazione sono espressi, suggerendo che la quantit&agrave; di precursori che &egrave; presente nel cervello adulto &egrave; il risultato di un equilibrio di questi processi.

Purificazione dei precursori neuronali del cervello di topo adulto: analisi di espressione genica globale fornisce nuove intuizioni nel controllo dell&#39;omeostasi, differenziazione e migrazione cellulare.

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x6210;&#x4F53;&#x8133;&#x306E;&#x8133;&#x5BA4;&#x4E0B;&#x5E2F;&#xFF08;SVZ&#xFF09;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5B50;&#x5B6B;&#x306F;&#x3001;GABA&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x4ECB;&#x5728;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x5206;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x55C5;&#x7403;&#xFF08;OB&#xFF09;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A2;&#x30EB;&#x9178;NCAM&#x767A;&#x73FE;&#x672A;&#x719F;&#x306A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#xFF08;PSA&#xFF08;+&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF09;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;FACS&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6210;&#x4F53;&#x8133;&#x304B;&#x3089;&#x76F4;&#x63A5;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;PSA&#xFF08;+&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x3001;SAGE&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x89E3;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F03;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D3;&#x30F3;&#x3001;&#x30BD;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;-4&#x3001;Meis2&#x3001;Dishevelled-2&#x3001;C3aR1&#x3068;&#x7406;&#x7814;3110003A17&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x5316;&#x5B66;&#x8D70;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304C;&#x6210;&#x4F53;&#x8133;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x5F37;&#x304F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x4F53;&#x8133;&#x5185;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x306E;&#x91CF;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x5E73;&#x8861;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6210;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8133;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;&#xFF1A;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x3001;&#x5206;&#x5316;&#x3001;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5E2F; (SVZ) &#xC131;&#xC778; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB450;&#xB1CC;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC790;&#xC190; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xD560; &#x55C5; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB370; (OB)&#xB97C; GABAergic &#xC218; &#xC788;&#xB294; polysialylated &#xC5EC; &#xD45C;&#xD604; &#xBBF8; &#xC219; &#xC2E0;&#xACBD; (PSA(+) &#xC138;&#xD3EC;)&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. FACS&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC131;&#xC778; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; murine PSA(+) &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC815;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C; &#xBD84;&#xC11D;. &#xBE44;&#xAD50; &#xBD84;&#xC11D; &#xC804;&#xC870; &#xB18D;&#xCD95; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, Survivin, &#xC0AD;&#xC2A4;-4, Meis2, Dishevelled 2, c3ar1&#xC640; Riken 3110003A17 &#xC2E0;&#xBD84;&#xC99D;&#xACFC; &#xB9CE;&#xC740; &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC0C8;&#xB86D;&#xAC70;&#xB098; &#xC131;&#xC801;&#xD45C;&#xB97C; &#xC774;&#xB04C;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xBD84;&#xC11D; &#xCD95; &#xC0AD; &#xC9C0;&#xCE68;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; chemotaxis&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; upregulated, &#xC131;&#xC778; &#xB1CC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xB3D9;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xB450; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, apoptosis &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; co-expressed, &#xC131;&#xC778; &#xB1CC;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xC120;&#xAD6C;&#xC790;&#xC758; &#xAE08;&#xC561;&#xC740; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xADE0;&#xD615;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548;.

&#xC131;&#xC778; &#xC950;&#xC758; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC120;&#xAD6C;&#xC790;&#xC758; &#xC815;&#xD654;: &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xACFC; &#xBD84;&#xD654;, homeostasis&#xC758; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D;.

La progenie de c&#xE9;lulas madre neurales en la zona subventricular (SVZ) del cerebro adulto de mam&#xED;feros consiste en polysialylated NCAM-que expresan las neuronas inmaduras (PSA (+) las c&#xE9;lulas), que migran al bulbo olfatorio (OB) que se diferencian en interneuronas GABA&#xE9;rgicas. Nos purifica murino PSA (+) las c&#xE9;lulas directamente desde el cerebro adulto por FACS y se analiza su perfil de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica por SAGE. An&#xE1;lisis comparativos condujo a la identificaci&#xF3;n de enriquecidos precursor-genes, incluyendo survivina, Medias 4-, Meis2, Dishevelled 2-, C3aR1 y 3110003A17 Riken, y muchas transcripciones hasta ahora no caracterizados. El an&#xE1;lisis de conglomerados mostr&#xF3; que los grupos de genes implicados en la gu&#xED;a de axones y grupos de genes implicados en la quimiotaxis son fuertemente upregulated, lo que indica un papel de ambas se&#xF1;ales en el control de la migraci&#xF3;n celular en el cerebro adulto. Adem&#xE1;s, los genes implicados en la apoptosis y proliferaci&#xF3;n celular son co-expresados, lo que sugiere que la cantidad de precursores que est&#xE1; presente en el cerebro adulto es un resultado de un equilibrio de estos procesos.

La purificaci&#xF3;n de los precursores neuronales del cerebro del rat&#xF3;n adulto: An&#xE1;lisis Integral de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica ofrece nuevas perspectivas en el control de la migraci&#xF3;n celular, la diferenciaci&#xF3;n y la homeostasis

&Gamma;-&#x6C28;&#x57FA;&#x4E01;&#x9178; (GABA) &#x80FD;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x662F;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EC4;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x6027;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5728;&#x4FE1;&#x606F;&#x5904;&#x7406;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x4ECE;&#x76AE;&#x8D28;&#x3001; &#x55C5;&#x7403;&#x3001; &#x7EB9;&#x72B6;&#x4F53;&#x548C;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x8131;&#x7FA7;&#x9176; 67-&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GAD67-GFP) &#x6572;&#x5165;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5C0F;&#x8111;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x5B9A;&#x4E49;&#x5B89;&#x57FA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E00;&#x79CD;&#x666E;&#x904D;&#x9002;&#x7528;&#x7684;&#x8111;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x6D41;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x6D53;&#x7F29;&#x3001; &#x548C;&#x5168;&#x7403; mRNA &#x6269;&#x589E;&#x4E3A;&#x654F;&#x611F;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x7684; singularization &#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x5F15;&#x8D77;&#x4E0D;&#x540C;&#x8111;&#x533A;&#x7684;&#x5B89;&#x57FA;&#x9AD8;&#x52A8;&#x6001;&#x8303;&#x56F4;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7F16;&#x53F7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x805A;&#x7C7B;&#x663E;&#x793A;&#x6307;&#x793A;&#x5B89;&#x57FA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x5176;&#x533A;&#x57DF;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x540E;&#x80A2;&#x548C;&#x524D;&#x8111;&#x5B89;&#x57FA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x524D;&#x8111;&#x5B89;&#x57FA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684; Distal &#x5C11;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC4;&#xFF0C;ETS/&#x798F;&#x514B;&#x65AF;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3001; &#x7279;&#x5B9A;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x6052;&#x65ED;-&#x548C; LHX-&#x5BB6;&#x65CF;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E0E;&#x5357;&#x5B9D;-&#x5BB6;&#x5EAD;&#xFF0C;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5B9A;&#x4E49;&#x540E;&#x8111;&#x6291;&#x5236;&#x6027;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;

&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7279;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF;&#x5B89;&#x57FA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;

Gamma-aminobutyric acid (GABA)ergic neurons are a diverse group of inhibitory neurons playing crucial roles in information processing. We analyzed the gene expression of regionally defined GABAergic neurons from the cortex, olfactory bulb, striatum, and cerebellum of glutamate decarboxylase 67-green fluorescence protein (GAD67-GFP) knock-in mice. We introduce a generally applicable method for singularization of brain cells, flow cytometric enrichment, and global mRNA amplification for sensitive gene expression profiling. Systematic quantification elicited a high dynamic range of GABAergic cell numbers in different brain regions. Clustering of our gene expression results revealed major differences between hind and forebrain GABAergic neurons indicating that the development of GABAergic neurons depends on their regional location. While GABAergic neurons of the forebrain are characterized by three main groups of transcription factors of the Distal-less-family, the POU-family, and ETS/FOX family, specific members of the ZIC- and LHX-family of transcription factors appear to define hindbrain inhibitory neurons.

Gene expression analysis defines differences between region-specific GABAergic neurons.

Acide gamma-aminobutyrique (GABA) neurones ergiques sont un groupe diversifi&#xE9; de neurones inhibiteurs jouant un r&#xF4;le crucial dans le traitement de l&#x26;#39;information. Nous avons analys&#xE9; l&#x26;#39;expression du g&#xE8;ne de la r&#xE9;gion d&#xE9;finis neurones GABAergiques du cortex, bulbe olfactif, le striatum et le cervelet de la d&#xE9;carboxylase 67-prot&#xE9;ine verte glutamate de fluorescence (GAD67-GFP) souris knock-in. Nous introduisons une m&#xE9;thode g&#xE9;n&#xE9;ralement applicable pour la singularisation des cellules du cerveau, l&#x26;#39;enrichissement par cytom&#xE9;trie en flux, et d&#x26;#39;amplification d&#x26;#39;ARNm mondiale pour le profilage d&#x26;#39;expression g&#xE9;nique sensibles. La quantification syst&#xE9;matique suscit&#xE9; une plage dynamique &#xE9;lev&#xE9;e du nombre de cellules GABAergiques dans diff&#xE9;rentes r&#xE9;gions du cerveau. Clustering de nos r&#xE9;sultats d&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; des diff&#xE9;rences importantes entre les arri&#xE8;res et le cerveau ant&#xE9;rieur des neurones GABAergiques indiquant que le d&#xE9;veloppement des neurones GABAergiques d&#xE9;pend de leur localisation r&#xE9;gionale. Bien que les neurones GABAergiques du cerveau ant&#xE9;rieur sont caract&#xE9;ris&#xE9;es par trois grands groupes de facteurs de transcription de la partie distale du-moins-de la famille, le POU-famille, et STE / famille FOX, certains membres de la ZIC et LHX-famille de facteurs de transcription semblent d&#xE9;finir rhombenc&#xE9;phale neurones inhibiteurs.

Analyse de l&#x26;#39;expression g&#xE9;nique D&#xE9;finit Diff&#xE9;rences entre particuliers &#xE0; une r&#xE9;gion neurones GABAergiques

Gamma - Aminobutters&auml;ure (GABA) ergic Neuronen sind eine heterogene Gruppe von hemmenden Neuronen spielen wichtige Rolle bei der Informationsverarbeitung. Wir analysierten die Genexpression von Regional definierten GABAergic Neuronen aus dem Kortex, Riechkolben Striatum und Kleinhirn Glutamat-Decarboxylase-67-gr&uuml;ne Fluoreszenz-Protein (GAD67-GFP) Knock-in M&auml;use. Wir f&uuml;hren eine allgemein g&uuml;ltige Methode zum Singularisierung der Gehirnzellen, flie&szlig;en Cytometric Bereicherung und globale mRNA Verst&auml;rkung f&uuml;r empfindliche Gene Expression profiling. Systematische Quantifizierung l&ouml;ste eine hohe dynamische Reichweite von GABAergic-Zell-Zahlen in verschiedenen Hirnregionen. Clustering der Ergebnisse unserer Gen-Ausdruck offenbart gro&szlig;e Unterschiede zwischen den hinter- und Stirnhirn GABAergic-Neuronen, die darauf hinweist, dass die Entwicklung der GABAergic Neuronen ihre regionalen Standort abh&auml;ngt. W&auml;hrend GABAergic Neuronen des Stirnhirns durch drei Hauptgruppen von Transkriptionsfaktoren der Distal-weniger-Familie gekennzeichnet sind, erscheinen die POU-Familie und ETS/FOX Familie, bestimmte Mitglieder von der ZIC und LHX-Familie von Transkriptionsfaktoren Hinterhirn hemmenden Neuronen zu definieren.

Genexpressionsanalyse definiert Unterschiede zwischen den regionsspezifischen GABAergic Neuronen.

Neuroni ergic acido gamma - aminobutirrico (GABA) sono un gruppo eterogeneo di neuroni inibitori giocare ruoli cruciali nell&#39;elaborazione delle informazioni. Abbiamo analizzato l&#39;espressione genica dei neuroni GABAergico regionalmente definiti dalla corteccia, bulbo olfattivo, striato e cervelletto di glutammato decarbossilasi 67-verde fluorescenza della proteina (GAD67-GFP) knock-in topi. Introduciamo un metodo generalmente applicabile per singularization delle cellule cerebrali, arricchimento cytometric di flusso e amplificazione globale del mRNA per analisi di espressione genica sensibile. Quantificazione sistematica ha suscitato un numeri di cellulare ad alta gamma dinamica di GABAergic nelle regioni differenti del cervello. Clustering dei nostri risultati di espressione genica ha rivelato differenze importanti tra i neuroni GABAergico hind e proencefalo che indica che lo sviluppo dei neuroni GABAergico dipende dalla loro posizione regionale. Mentre i neuroni di GABAergic del proencefalo sono caratterizzati da tre principali gruppi di fattori di trascrizione della famiglia distali-di meno, il POU-famiglia e famiglia ETS/FOX, specifici membri della famiglia ZIC e LHX di fattori di trascrizione sembrano definire i neuroni inibitori hindbrain.

Analisi di espressione genica definisce le differenze tra i neuroni GABAergico specifiche della regione.

&#x3B3;-&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x916A;&#x9178;&#xFF08;GABA&#xFF09;ERGIC&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x60C5;&#x5831;&#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5927;&#x8133;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3001;&#x55C5;&#x7403;&#x3001;&#x7DDA;&#x6761;&#x4F53;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x30C7;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;67&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C0F;&#x8133;&#xFF08;GAD67-GFP&#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A4;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x5730;&#x57DF;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;GABA&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x89E3;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8133;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3057;&#x3001;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;mRNA&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x306E;singularization&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x8133;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;GABA&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x6570;&#x306E;&#x9AD8;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;GABA&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x5F8C;&#x308D;&#x8DB3;&#x3068;&#x524D;&#x8133;GABA&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x76F8;&#x9055;&#x70B9;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x524D;&#x8133;&#x306E;GABA&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x9060;&#x4F4D;&#x306E;&#x4F4E;&#x3044;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3001;POU&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;ETS / FOX&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x4E00;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;ZIC&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;LHX-&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x306F;&#x3001;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x308B;&#x6291;&#x5236;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x5F8C;&#x8133;&#x3002;

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x5730;&#x57DF;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;GABA&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x9055;&#x70B9;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xAC10;&#xB9C8;-aminobutyric &#xC0B0; (GABA) ergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC815;&#xBCF4; &#xCC98;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC815;&#xC758; GABAergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xD53C; &#xC9C8;, &#x55C5;&#xAC00;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC950; &#xB178;&#xD06C;&#xC5D0;&#xC11C; glutamate decarboxylase 67 &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP GAD67)&#xC758; &#xC18C; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB1CC; &#xC138;&#xD3EC;, &#xD750;&#xB984; cytometric &#xB18D;&#xCD95; &#xBC0F; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; mRNA &#xC99D;&#xD3ED; singularization &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC801;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654; elicited &#xB2E4;&#xB978; &#xB1CC; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; Gabaergic&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB3D9;&#xC801; &#xBC94;&#xC704; &#xC140; &#xBC88;&#xD638;. &#xC9C4; &#xC2DD; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1; GABAergic &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xB4B7; &#xB2E4;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xAC1C; GABAergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xCC28;&#xC774;&#xC810;&#xC744; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74; GABAergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xAC1C;&#xC758; Distal &#xC801;&#xC740; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC8FC;&#xC694; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5;, POU ETS/&#xD3ED;&#xC2A4; &#xAC00;&#xC871;, &#xD2B9;&#xC815; &#xD68C;&#xC6D0;&#xC758; ZIC-&#xBC0F; LHX-&#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;&#xB294; &#xAC00;&#xC871;&#xACFC; hindbrain &#xC5B5;&#xC81C; &#xB274;&#xB7F0; &#xC815;&#xC758; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4;.

&#xC9C4; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xBCC4; GABAergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCC28;&#xC774;&#xC810;&#xC744; &#xC815;&#xC758;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC1;cido gamma-aminobut&#xED;rico (GABA), las neuronas &#xE9;rgicas son un grupo diverso de las neuronas inhibitorias a jugar un papel crucial en el procesamiento de informaci&#xF3;n. Se analiz&#xF3; la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica de las neuronas GABA&#xE9;rgicas definidos regionalmente a partir de la corteza cerebral, bulbo olfatorio, el cuerpo estriado y el cerebelo de la glutamato decarboxilasa 67-prote&#xED;na de fluorescencia verde (GFP-GAD67) knock-en ratones. Se introduce un m&#xE9;todo de aplicaci&#xF3;n general para la singularizaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas cerebrales, el enriquecimiento de citometr&#xED;a de flujo, y amplificaci&#xF3;n de ARNm para el mundial de perfiles de expresi&#xF3;n de los genes sensibles. Cuantificaci&#xF3;n sistem&#xE1;tica provoc&#xF3; un alto rango din&#xE1;mico del n&#xFA;mero de c&#xE9;lulas GABA&#xE9;rgicas en diferentes regiones cerebrales. La agrupaci&#xF3;n de los resultados de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica revelaron grandes diferencias entre las neuronas GABA&#xE9;rgicas del cerebro anterior y posteriores que indican que el desarrollo de las neuronas GABA&#xE9;rgicas depende de su ubicaci&#xF3;n regional. Mientras que las neuronas GABA&#xE9;rgicas del cerebro anterior se caracterizan por tres grandes grupos de factores de transcripci&#xF3;n del Distal-less de la familia, la familia POU, y ETS / de la familia Fox, los miembros espec&#xED;ficos de la ZIC-y LHX de la familia de factores de transcripci&#xF3;n parecen definir hindbrain neuronas inhibidoras.

Sandra Pennartz

Miltenyi Biotec,GmbH

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue