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A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

We present here a simple, rapid, and extremely flexible technique for the immobilization and visualization of growing yeast cells by epifluorescence ...

Princeton University

&#xCEA0;&#xD504; &#xB9B4;&#xB808;&#xC774; &#xBC0F; &#xCEA0;&#xD504; chemotaxis&#xC5D0; &#xADF8; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC124;&#xC815; &#xB41C; &#xC5ED;&#xD560; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; RasC &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC740; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC2DD;&#xBB3C; rasC &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC18C; &#xBB34;&#xC791;&#xC704; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xC804;&#xC2DC;, &#xB35C; &#xD3B8;&#xAD11; &#xBC0F; F &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC30;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC140; RasC &#xB610;&#xD55C; &#xBD80;&#xC871; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; &#xC140; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD06C;&#xAE30;&#xAC00; &#xD070; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC99D;&#xAC00; &#xC561;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xACC4; endocytosis&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC140; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; cytokinesis&#xB294; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC218; &#xC788;&#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654;&#xAC00; &#xC5C6;&#xB2E4;. rasC &#xC140;&#xB3C4; &#xC800;&#xC870;&#xD55C; &#xC5FD; &#xC0B0; &#xBC0F; &#xC804;&#xC2DC; chemotaxed F &#xB9D0;&#xB77C; &#xCD95;&#xC801; &#xAC10;&#xC18C;, ERK2 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC0F; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; Rasc&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD608; &#xC2E0;&#xD638; transducing&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC5FD; &#xC0B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; Akt/PKB &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C;.

Dictyostelium RasC &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC744; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD06C;&#xAE30;, &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBC0F; endocytosis &#xBCC0;&#xACBD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x9664;&#x4E86;&#x5728;&#x8425;&#x5730;&#x7EE7;&#x7535;&#x5668;&#x53CA;&#x8425;&#x5730;&#x8D8B;&#x5176;&#x5148;&#x524D;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x533A;&#x57DF;&#x5BA1;&#x8BA1;&#x4E8B;&#x52A1;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x627E;&#x6765;&#x4E00;&#x4E9B;&#x8425;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x8425;&#x517B;&#x533A;&#x57DF;&#x5BA1;&#x8BA1;&#x4E8B;&#x52A1;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5C55;&#x51FA;&#x51CF;&#x5C11;&#x968F;&#x673A;&#x8FD0;&#x52A8;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E24;&#x6781;&#x5206;&#x5316;&#xFF0C;&#x6539;&#x53D8;&#x4E86; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x5E03;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x533A;&#x57DF;&#x5BA1;&#x8BA1;&#x4E8B;&#x52A1;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5305;&#x542B;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x5927;&#x5C0F;&#x5927;&#x4E8E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x5E45;&#x5EA6;&#x662F;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x6DB2;&#x76F8;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#x662F;&#x76F8;&#x5BF9;&#x6B63;&#x5E38;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x533A;&#x57DF;&#x5BA1;&#x8BA1;&#x4E8B;&#x52A1;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FD8;&#x5DEE;&#x5230;&#x53F6;&#x9178;&#x548C;&#x5C55;&#x51FA;&#x7684; chemotaxed &#x51CF;&#x5C11; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3001; &#x51CF;&#x5C11; ERK2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x964D;&#x4F4E; Akt/PKB &#x53F6;&#x9178;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x6307;&#x793A;&#x533A;&#x57DF;&#x5BA1;&#x8BA1;&#x4E8B;&#x52A1;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x8FD8;&#x53C2;&#x4E0E;&#x6C19;&#x6C14;&#x4E2D;&#x8425;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D8B;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;

&#x76D8;&#x57FA;&#x7F51;&#x67C4;&#x533A;&#x57DF;&#x5BA1;&#x8BA1;&#x4E8B;&#x52A1;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x4F1A;&#x6539;&#x53D8;&#x8425;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5927;&#x5C0F;&#x3001; &#x52A8;&#x529B;&#x548C;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

In addition to its previously established roles in cAMP relay and cAMP chemotaxis, loss of signal transduction through the RasC protein was found to impact a number of vegetative cell functions. Vegetative rasC- cells exhibited reduced random motility, were less polarized and had altered F-actin distribution. Cells lacking RasC also contained more protein and were larger in size than wild type cells. These increases were associated with increased liquid phase endocytosis. Despite the increase in cell size, cytokinesis was relatively normal and there was no change in the rate of cell division. rasC- cells also chemotaxed poorly to folate and exhibited reduced F-actin accumulation, reduced ERK2 phosphorylation and reduced Akt/PKB phosphorylation in response to folate, indicating that RasC was also involved in transducing chemotactic signals in vegetative cells.

Loss of the Dictyostelium RasC protein alters vegetative cell size, motility and endocytosis.

En plus de ses r&ocirc;les pr&eacute;&eacute;tablis en relais cAMP et cAMP chimiotactisme, perte de transduction de signal par l&#39;interm&eacute;diaire de la prot&eacute;ine de la SRAC a &eacute;t&eacute; trouv&eacute; &agrave; l&#39;impact d&#39;un certain nombre de fonctions de la cellule v&eacute;g&eacute;tative. SRAC-cellules v&eacute;g&eacute;tatives motilit&eacute; al&eacute;atoire r&eacute;duite, &eacute;taient moins polaris&eacute;e et avait modifi&eacute; la r&eacute;partition de l&#39;actine F. Cellules d&eacute;pourvues de SRAC aussi contient plus de prot&eacute;ines et sont de plus grandes taille que les cellules de type sauvage. Ces augmentations ont &eacute;t&eacute; associ&eacute;es par endocytose en phase liquide accrue. Malgr&eacute; l&#39;augmentation de la taille des cellules, la cytocin&egrave;se &eacute;tait relativement normale et il n&#39;y n&#39;avait aucun changement dans le taux de division cellulaire. SRAC-cellules aussi chemotaxed mal de folate et expos&eacute; r&eacute;duit l&#39;accumulation de F-actine, r&eacute;duit la phosphorylation ERK2 et r&eacute;duit la phosphorylation Akt/PKB en r&eacute;ponse &agrave; l&#39;acide folique, indiquant que la SRAC &eacute;tait &eacute;galement impliqu&eacute;e dans la transduction de signaux chimiotactiques dans les cellules v&eacute;g&eacute;tatives.

Perte de la prot&eacute;ine de Dictyostelium RasC modifie l&#39;endocytose, la motilit&eacute; et la taille des cellules v&eacute;g&eacute;tatives.

Der Verlust des Dictyostelium Rasc Protein ver&#xE4;ndert vegetative Zelle Gr&#xF6;&#xDF;e, Motilit&#xE4;t und Endozytose.

Oltre ai suoi ruoli precedentemente stabiliti nel campo rel&egrave; e chemiotassi cAMP, perdita della trasduzione del segnale attraverso le proteine RasC &egrave; stato trovato per l&#39;impatto di una serie di funzioni delle cellule vegetative. RasC-cellule vegetative esposta ridotta motilit&agrave; casuale, erano meno polarizzata e aveva alterato la distribuzione F-actina. Cellule manca RasC anche contenevano pi&ugrave; proteine ed erano pi&ugrave; grande in dimensioni di cellule wild type. Questi aumenti sono stati associati con endocitosi maggiore fase liquida. Nonostante l&#39;aumento delle dimensioni delle cellule, Citocinesi in era relativamente normale e non non c&#39;era nessun cambiamento del tasso di divisione cellulare. rasC-cellule anche chemotaxed mal di folati ed esposte ridotto accumulo di F-actina, ridotta fosforilazione ERK2 e ridotto la fosforilazione di Akt/PKB in risposta ai Folati, indicando che il RasC fu anche coinvolto nella transducing chemiotattiche segnali nelle cellule vegetative.

Perdita della proteina Dictyostelium RasC altera endocitosi, la motilit&agrave; e la dimensione delle cellule vegetative.

&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; &#x30EA;&#x30EC;&#x30FC; &#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3001;RasC &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x6804;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x6570;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6804;&#x990A; rasC &#x7D30;&#x80DE;&#x6E1B;&#x5C11;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x904B;&#x52D5;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x504F;&#x5149;&#x3057; F &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x5909;&#x3048;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F; RasC &#x306B;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x5897;&#x52A0;&#x6DB2;&#x76F8;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB; &#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x304C;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;rasC &#x7D30;&#x80DE;&#x3082; chemotaxed &#x8449;&#x9178;&#x306B;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x3068;&#x5C55;&#x793A; F &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B; ERK2 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; Akt/PKB RasC &#x304C;&#x307E;&#x305F;&#x6804;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x8449;&#x9178;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x6027;&#x7C98;&#x83CC; RasC &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x6804;&#x990A;&#x751F;&#x9577;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB; &#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Adem&aacute;s de sus papeles previamente establecidas en campo rel&eacute; y campo quimiotaxis, p&eacute;rdida de transducci&oacute;n de la se&ntilde;al a trav&eacute;s de la prote&iacute;na RasC encontraron al impacto de una serie de funciones de la c&eacute;lula vegetativa. RasC-c&eacute;lulas vegetativas exhibi&oacute; reducida motilidad al azar, fueron menos polarizado y hab&iacute;a alterado la distribuci&oacute;n de F-actina. Las c&eacute;lulas que carec&iacute;an RasC tambi&eacute;n contienen m&aacute;s prote&iacute;nas y eran m&aacute;s grandes en tama&ntilde;o que las c&eacute;lulas de tipo salvaje. Estos aumentos se asociaron con endocitosis mayor fase l&iacute;quida. A pesar del aumento en el tama&ntilde;o de celda, citocinesis era relativamente normal y no hubo cambios en la tasa de divisi&oacute;n celular. rasC-c&eacute;lulas tambi&eacute;n chemotaxed mal a folato y expuesta reduce la acumulaci&oacute;n de la F-actina, reducci&oacute;n ERK2 fosforilaci&oacute;n y fosforilaci&oacute;n de Akt/PKB en respuesta a folato, indicando que RasC tambi&eacute;n estuvo implicado en la transducci&oacute;n de se&ntilde;ales quimiot&aacute;cticas en c&eacute;lulas vegetativas.

P&eacute;rdida de la prote&iacute;na de Dictyostelium RasC altera la endocitosis, la motilidad y el tama&ntilde;o de la c&eacute;lula vegetativa.

&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#xFF0C;&#x5F02;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x53D1;&#x73B0;&#x53EA;&#x6709;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7FA4;&#x4F53;&#x7684;&#x5E73;&#x5747;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x901A;&#x8FC7;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4E2A;&#x522B;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FDB;&#x884C;&#x533A;&#x5206;&#x8367;&#x5149;&#x62A5;&#x544A;&#x57FA;&#x56E0;&#x63D2;&#x5165;&#x5230;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6C89;&#x9ED8;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6C89;&#x9ED8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6C89;&#x9ED8;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x72EC;&#x7ACB;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5F02;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x5F62;&#x6210;&#x6709;&#x81EA;&#x4E3B;&#x7684;&#x8F68;&#x8FF9;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E2D;&#x95F4;&#x8868;&#x578B;&#xFF0C;&#x5982; sir1&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x79CD;&#x7FA4;&#xFF0C;&#x538B;&#x6291;&#x7684;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A; derepressed&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x5176;&#x4ED6;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x90A3;&#x4E9B;&#x706D;&#x6D3B; SAS-&#x6211;&#x6240;&#x6709;&#x4E0E;&#x4E2D;&#x7EA7;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D; H4 K16 acetylase&#xFF0C;&#x7531;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x548C;&#x8150;&#x70C2;&#x7684;&#x6C89;&#x9ED8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x53D7;&#x5230;&#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;&#x8BBE;&#x7ACB;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4E16;&#x4EE3;&#x968F;&#x673A;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x91CF;&#x5316;&#x6C89;&#x9ED8;&#x4E2D;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x6C89;&#x9ED8;&#x4E0D;&#x660E;&#x663E;&#x4ECE;&#x5168;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;

&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x4E2D;&#x95F4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6C89;&#x9ED8;&#x56FD;&#x5BB6;&#x3002;

Analysis of transcriptional silencing in Saccharomyces has provided valuable insights into heterochromatin formation and function. However, most of these studies revealed only the average behaviors of populations of cells. Here, we examined transcriptional silencing by monitoring individual yeast cells carrying distinguishable fluorescent reporter genes inserted at two different silent loci. These studies showed that two silent loci in a single cell behave independently, demonstrating that heterochromatin formation is locus autonomous. Furthermore, some silencing mutants with an intermediate phenotype, such as sir1, consist of two distinct populations, one repressed and one derepressed, while other mutants, such as those inactivating the SAS-I histone H4 K16 acetylase, consist of cells all with an intermediate level of expression. Finally, both establishment and decay of silencing can be influenced by specific gene activators, with establishment occurring stochastically over several generations. Thus, quantifying silencing in individual cells reveals aspects of silencing not evident from population-wide measurements.

Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.

Analyse de silencing transcriptionnel chez Saccharomyces a fourni des indications pr&#xE9;cieuses sur la formation h&#xE9;t&#xE9;rochromatine et la fonction. Cependant, la plupart de ces &#xE9;tudes ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que les comportements moyens des populations de cellules. Ici, nous avons examin&#xE9; le silencing transcriptionnel par la surveillance des cellules de levure individuelles portant distinguables g&#xE8;nes rapporteurs fluorescents ins&#xE9;r&#xE9;s &#xE0; deux loci diff&#xE9;rents silencieux. Ces &#xE9;tudes ont montr&#xE9; que deux loci silencieux dans une seule cellule se comporter ind&#xE9;pendamment, ce qui d&#xE9;montre que la formation de l&#x26;#39;h&#xE9;t&#xE9;rochromatine est locus autonome. En outre, certains mutants silencieux avec un ph&#xE9;notype interm&#xE9;diaire, tels que sir1, compos&#xE9;e de deux populations distinctes, l&#x26;#39;une et l&#x26;#39;autre r&#xE9;prim&#xE9;e d&#xE9;r&#xE9;prim&#xE9;e, tandis que d&#x26;#39;autres mutants, tels que ceux inactivation de la SAS-je histone H4 K16 ac&#xE9;tylase, se composent de toutes les cellules avec un interm&#xE9;diaire niveau d&#x26;#39;expression. Enfin, &#xE0; la fois l&#x26;#39;&#xE9;tablissement et la d&#xE9;composition de silence peut &#xEA;tre influenc&#xE9;e par des activateurs de g&#xE8;nes sp&#xE9;cifiques, avec mise en place produisent stochastiquement sur plusieurs g&#xE9;n&#xE9;rations. Ainsi, la quantification de silence dans des cellules individuelles r&#xE9;v&#xE8;le des aspects de r&#xE9;duire au silence ne ressort pas de la population &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;chelle des mesures.

Monocellulaires observations r&#xE9;v&#xE8;lent interm&#xE9;diaires &#xC9;tats silencing transcriptionnel

Analyse der transcriptional silencing in Saccharomyces hat wertvolle Einblicke in Heterochromatin Bildung und Funktion bereitgestellt. Die meisten dieser Studien zeigte jedoch nur die durchschnittlichen Verhalten der Bev&ouml;lkerung der Zellen. Hier haben wir gepr&uuml;ft, transcriptional silencing durch die &Uuml;berwachung der einzelnen Hefezellen, die Durchf&uuml;hrung unterscheidbar fluoreszierende Reporter-Gene, die an zwei verschiedenen Stille Loci eingef&uuml;gt. Diese Studien zeigten, dass zwei Stille Loci in einer einzelnen Zelle unabh&auml;ngig voneinander Verhalten zeigen, dass Heterochromatin Bildung Locus autonom ist. Dar&uuml;ber hinaus einige silencing Mutanten mit einer zwischengeschalteten Ph&auml;notyp, wie sir1, bestehen aus zwei unterschiedlichen Populationen, unterdr&uuml;ckt und derepressed, w&auml;hrend andere Mutanten, wie die Abt&ouml;tung der SAS-ich Histon H4 K16 Acetylase, alle mit einer mittleren Ebene des Ausdrucks aus Zellen bestehen. Schlie&szlig;lich k&ouml;nnen Aufbau und Zerfall des Unterdr&uuml;ckender durch spezifisches gen Aktivatoren, mit Einrichtung, die &uuml;ber mehrere Generationen stochastisch auftretenden beeinflusst werden. So zeigt die Quantifizierung Unterdr&uuml;ckender in einzelnen Zellen Aspekte zum Schweigen nicht offensichtlich von der Bev&ouml;lkerung-weite Messung.

Einzeller-Beobachtungen zeigen transcriptional silencing Zwischenzust&auml;nde.

Analisi di silenziamento trascrizionale in Saccharomyces ha fornito informazioni preziose in funzione e la formazione di eterocromatina. Tuttavia, la maggior parte di questi studi hanno rivelato solo i comportamenti medi delle popolazioni di cellule. Qui, abbiamo esaminato silenziamento trascrizionale monitorando le cellule di lievito individuali che trasportano geni reporter fluorescente distinguibili inseriti in due differenti loci silenziosi. Questi studi hanno mostrato che due loci silenziosi in una singola cella si comportano in modo indipendente, dimostrando che la formazione di eterocromatina &egrave; locus autonoma. Inoltre, alcuni mutanti silenziamento con un fenotipo intermedio, ad esempio sir1, consistono di due popolazioni distinte, una repressa e derepressed, mentre altri mutanti, come quelli inattivanti SAS-io istone H4 K16 acetylase, costituiti da cellule tutte con un livello intermedio di espressione. Infine, sia istituzione e deperimento del silenzio pu&ograve; essere influenzati da attivatori gene specifico, con l&#39;istituzione che si verificano casualmente sopra parecchie generazioni. Cos&igrave;, quantificando tacere in singole cellule rivela aspetti del silenzio non evidente da misurazioni del livello di popolazione.

Cella singola osservazioni rivelano Stati silenziamento trascrizionali intermedi.

&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#x5C5E;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x5024;&#x306E;&#x307F;&#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;2&#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8B58;&#x5225;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x86CD;&#x5149;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;2&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x304C;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x8ECC;&#x8DE1;&#x81EA;&#x5F8B;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x632F;&#x308B;&#x821E;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;SAS-I&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;H4 K16&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x3067;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;SIR1&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3068;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x96C6;&#x56E3;&#x3001;&#x6291;&#x5727;&#x3055;&#x308C;1&#x3068;&#x8131;&#x6291;&#x5236;1&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308A;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3068;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x78BA;&#x7ACB;&#x304C;&#x6570;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x304B;&#x3089;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x3067;&#x306A;&#x3044;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

&#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; Saccharomyces transcriptional &#xCE68;&#xBB35;&#xC758; &#xC12C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xB9CC; &#xC140;&#xC758; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xD615;&#xAD11; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC790;&#xB3D9; loci&#xC5D0; &#xC0BD;&#xC785; &#xB4E4;&#xACE0; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558; &#xC5EC; transcriptional &#xC785;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4; &#xC790;&#xC728;&#xC740; &#xC12C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC140;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xCE68;&#xBB35; loci &#xD558;&#xC9C0; &#xD589;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, sir1, &#xB4F1; &#xC911;&#xAC04; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC73C;&#xB85C; &#xC77C;&#xBD80; silencing &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC778;&#xAD6C; &#xC5B5;&#xC555;&#xC640; &#xD55C; &#xB3D9;&#xC548; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; SAS &#xB4F1; &#xB2E4;&#xB978; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; derepressed &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838;-&#xB098; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; acetylase H4 K16, &#xC140; &#xC2DD;&#xC758; &#xC911;&#xAC04; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC124;&#xB9BD;&#xACFC; &#xCE68;&#xBB35;&#xC758; &#xBD80;&#xD328; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC744; &#xD2B9;&#xC815; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD65C;&#xC131; &#xC81C;, &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xB300;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; stochastically &#xC124;&#xB9BD; &#xB41C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC140;&#xC5D0; &#xC785;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xC778;&#xAD6C; &#xC804;&#xCCB4; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xBA85; &#xC785;&#xC744;&#xC758; &#xC591;&#xC0C1;&#xC744; &#xACC4;&#xC2DC; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xAD00;&#xCE21; &#xC911;&#xAC04; transcriptional silencing &#xC0C1;&#xD0DC; &#xACF5;&#xAC1C;.

An&#xE1;lisis de silenciamiento transcripcional en Saccharomyces ha proporcionado informaci&#xF3;n valiosa sobre la formaci&#xF3;n de heterocromatina y la funci&#xF3;n. Sin embargo, la mayor&#xED;a de estos estudios revelaron s&#xF3;lo los comportamientos promedio de las poblaciones de c&#xE9;lulas. Aqu&#xED;, examinamos el silenciamiento transcripcional mediante el control de las c&#xE9;lulas individuales de levadura que llevan distinguibles genes reporteros fluorescentes insertados en dos loci diferentes en silencio. Estos estudios demostraron que dos loci de silencio en una sola c&#xE9;lula se comporta de forma independiente, lo que demuestra que la formaci&#xF3;n de la heterocromatina es el locus aut&#xF3;noma. Adem&#xE1;s, algunos mutantes silenciamiento con un fenotipo intermedio, tal como SIR1, consisten en dos poblaciones distintas, reprimido uno y un desreprimido, mientras que otros mutantes, como los que la inactivaci&#xF3;n de la SAS-I histona H4 acetilasa K16, consisten en todas las c&#xE9;lulas con un intermedio nivel de expresi&#xF3;n. Por &#xFA;ltimo, tanto el establecimiento y la decadencia del silenciamiento pueden ser influenciados por los activadores de genes espec&#xED;ficos, con el establecimiento que ocurre estoc&#xE1;sticamente largo de varias generaciones. Por lo tanto, la cuantificaci&#xF3;n de silenciamiento en las c&#xE9;lulas individuales revela aspectos de silenciar no sea evidente en toda la poblaci&#xF3;n las medidas.

Unicelulares observaciones revelan los estados intermedios de silenciamiento transcripcional

&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x8D28;&#x91CF;&#x629B;&#x5C04;&#x7269;&#x7684;&#x5BA3;&#x4F20;&#x5458;&#x5931;&#x53BB;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5728;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x7684;&#xFF0C;&#x5E76;&#x83B7;&#x5F97;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x9547;&#x538B;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x4F7F;&#x8BE5;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x540E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x9547;&#x538B;&#x8981;&#x6C42;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x91CD;&#x5851;&#x7684;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x5BA3;&#x4F20;&#x5458;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x5168;&#x7403;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x524D;&#x548C;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x540E;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4E00;&#x534A;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x6761;&#x4EF6;&#x5927;&#x5927;&#x6539;&#x53D8;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x548C;&#x538B;&#x6291;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x53C2;&#x5C55;&#x867D;&#x7136;&#x505A;&#x63A5;&#x53D7;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x91CD;&#x5851;&#x7684;&#x521B;&#x529E;&#x4EBA;&#x503E;&#x5411;&#x4E8E;&#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x4E2A; TATA &#x6846;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x7684;&#x5B89;&#x6392;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x591A;&#x4E2A;&#x4F8B;&#x5B50;&#x5728;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x52A0;&#x6CD5;&#x4E4B;&#x524D;&#x5047;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x9884;&#x5148;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x53EF;&#x8BBF;&#x95EE;&#x6027;&#x4E2D;&#x786E;&#x5B9A;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x5426;&#x4F1A;&#x6539;&#x53D8;&#x5BF9;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6DFB;&#x52A0;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x7F51;&#x7AD9;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#xFF0C;&#x7531;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x50A8;&#x5B58;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7AD9;&#x70B9;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x51B3;&#x5B9A;&#x66F4;&#x6539;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x91CD;&#x65B0;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4E2D;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x3002;

&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x76F8;&#x5173;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x53EF;&#x8BBF;&#x95EE;&#x6027;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x91CD;&#x5851;&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5168;&#x7403;&#x8F6C;&#x578B;&#x4E2D;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x3002;

Several well-studied promoters in yeast lose nucleosomes upon transcriptional activation and gain them upon repression, an observation that has prompted the model that transcriptional activation and repression requires nucleosome remodeling of regulated promoters. We have examined global nucleosome positioning before and after glucose-induced transcriptional reprogramming, a condition under which more than half of all yeast genes significantly change expression. The majority of induced and repressed genes exhibit no change in promoter nucleosome arrangement, although promoters that do undergo nucleosome remodeling tend to contain a TATA box. Rather, we found multiple examples where the pre-existing accessibility of putative transcription factor binding sites before glucose addition determined whether the corresponding gene would change expression in response to glucose addition. These results suggest that selection of appropriate transcription factor binding sites may be dictated to a large extent by nucleosome prepositioning but that regulation of expression through these sites is dictated not by nucleosome repositioning but by changes in transcription factor activity.

Chromatin-dependent transcription factor accessibility rather than nucleosome remodeling predominates during global transcriptional restructuring in Saccharomyces cerevisiae.

Plusieurs promoteurs bien &#xE9;tudi&#xE9;s chez la levure perdre nucl&#xE9;osomes lors de l&#x26;#39;activation de la transcription et &#xE0; acqu&#xE9;rir sur la r&#xE9;pression, une observation qui a pouss&#xE9; le mod&#xE8;le que l&#x26;#39;activation de la transcription et de la r&#xE9;pression exige remodelage du nucl&#xE9;osome des promoteurs r&#xE9;glement&#xE9;s. Nous avons examin&#xE9; le positionnement des nucl&#xE9;osomes mondiale avant et apr&#xE8;s reprogrammation induite par le glucose de la transcription, une condition en vertu de laquelle plus de la moiti&#xE9; de tous les g&#xE8;nes de la levure de modifier sensiblement l&#x26;#39;expression. La majorit&#xE9; des g&#xE8;nes induits et r&#xE9;prim&#xE9;s ne pr&#xE9;sentent pas de changement dans arrangement promoteur nucl&#xE9;osome, bien que les promoteurs qui ne subissent remodelage du nucl&#xE9;osome ont tendance &#xE0; contenir une bo&#xEE;te TATA. Plut&#xF4;t, nous avons trouv&#xE9; de nombreux exemples o&#xF9; l&#x26;#39;accessibilit&#xE9; de pr&#xE9;-existante de sites putatifs de facteur de transcription liant avant l&#x26;#39;addition de glucose d&#xE9;termine si le g&#xE8;ne correspondant changerait expression en r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;addition de glucose. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que la s&#xE9;lection des sites appropri&#xE9;s pour des facteurs de transcription de liaison peuvent &#xEA;tre dict&#xE9; dans une large mesure par le pr&#xE9;positionnement nucl&#xE9;osome, mais que la r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;expression par le biais de ces sites est dict&#xE9;e non pas par nucl&#xE9;osome repositionnement, mais par des changements dans l&#x26;#39;activit&#xE9; du facteur de transcription.

Chromatine d&#xE9;pendant de l&#x26;#39;accessibilit&#xE9; des facteurs de transcription Plut&#xF4;t que de remodelage du nucl&#xE9;osome pr&#xE9;domine durant la restructuration de la transcription mondial chez Saccharomyces cerevisiae

Mehrere gut erforscht Projekttr&auml;gern in Hefe Nucleosomes auf transcriptional Aktivierung zu verlieren und gewinnen sie auf Unterdr&uuml;ckung, eine Beobachtung, die das Modell aufgefordert hat, dass transkriptionelle Aktivierung und Repression erfordert Nukleosom Umbau des geregelten Promotoren. Wir sind global Nukleosom Positionierung vor untersucht und nach Glukose-induzierte transkriptionelle Neuprogrammierung, eine Bedingung, unter denen mehr als die H&auml;lfte aller Hefe Gene deutlich Ausdruck &auml;ndern. Die Mehrheit der induzierten und verdr&auml;ngte Gene zeigen keine &Auml;nderung in Projekttr&auml;ger Nukleosom Anordnung, Promotoren, die Nukleosom Umbau unterzogen werden, tendenziell eine TATA-Box enthalten. Vielmehr fanden wir mehrere Beispiele, wo die bereits bestehende Zug&auml;nglichkeit der vermeintlichen Transkription Faktor Bindungsstellen vor Zugabe von Glukose bestimmt, ob das entsprechende Gen Ausdruck als Reaktion auf Glukose Zusatz &auml;ndern w&uuml;rde. Diese Ergebnisse legen nahe, die Auswahl der entsprechenden Transkription Faktor Bindung, die Websites diktiert werden, k&ouml;nnen zu einem gro&szlig;en Teil von Nukleosom Stationierung aber, dass Verordnung des Ausdrucks durch diese Seiten nicht durch Nukleosom Neupositionierung aber durch &Auml;nderungen in Transkription Faktor-Aktivit&auml;t diktiert wird.

Chromatin-abh&auml;ngige Transkription Faktor Zug&auml;nglichkeit als Nukleosom Umbau &uuml;berwiegt bei globalen transkriptionelle Umstrukturierungen in Saccharomyces Cerevisiae.

Diversi promotori ben studiate in lievito perdono nucleosomes all&#39;attivazione trascrizionale e li guadagno sulla repressione, un&#39;osservazione che ha richiesto il modello di tale attivazione trascrizionale e repressione richiede nucleosome rimodellamento dei promotori regolamentati. Abbiamo esaminato globale nucleosome posizionamento prima e dopo glucosio-indotta riprogrammazione transcriptional, una condizione in cui pi&ugrave; della met&agrave; di tutti i geni di lievito significativamente cambiare espressione. La maggior parte dei geni indotti e represse non esibiscono alcun cambiamento nella disposizione nucleosome promotore, sebbene promotori che subiscono nucleosome rimodellamento tendono a contenere un TATA box. Piuttosto, abbiamo trovato pi&ugrave; esempi dove l&#39;accessibilit&agrave; dei siti di legame del fattore putativo trascrizione prima dell&#39;aggiunta di glucosio preesistente determinato se il gene corrispondente sarebbe cambiare espressione in risposta all&#39;aggiunta di glucosio. Questi risultati suggeriscono che la selezione della associazione di fattore di trascrizione appropriata siti possono essere dettate in larga misura dal nucleosoma preposizionamento ma che regolamento di espressione attraverso questi siti &egrave; dettata non dal nucleosoma riposizionamento ma dai cambiamenti nell&#39;attivit&agrave; del fattore di trascrizione.

L&#39;accessibilit&agrave; di fattore di trascrizione della cromatina-dipendente anzich&eacute; nucleosome rimodellamento predomina durante la ristrutturazione globale di transcriptional in Saccharomyces cerevisiae.

&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x3088;&#x304F;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x5931;&#x3046;&#x3068;&#x5F3E;&#x5727;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x518D;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x6C42;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x524D;&#x3068;&#x5F8C;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x534A;&#x5206;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x3092;&#x305D;&#x306E;&#x4E0B;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3093;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;TATA&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x50BE;&#x5411;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3068;&#x6291;&#x5236;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x3080;&#x3057;&#x308D;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x6DFB;&#x52A0;&#x524D;&#x306B;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5F0F;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x4F8B;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306F;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x4E8B;&#x524D;&#x914D;&#x7F6E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x518D;&#x914D;&#x7F6E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6539;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#xB7;&#x30BB;&#x30EC;&#x30D3;&#x30B7;&#x30A8;&#xFF08;Saccharomyces cerevisiae&#xFF09;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x8EE2;&#x5199;&#x518D;&#x69CB;&#x7BC9;&#x4E2D;&#x306B;&#x512A;&#x52E2;

&#xC5EC;&#xB7EC; &#xC774;&#xC57C;&#xAE30;&#xB3C4; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD6A8; &#xBAA8; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2DC; nucleosomes&#xB97C; &#xC783;&#xAC8C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC5B5;&#xC81C;, &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xBB3B;&#xB294; &#xBA54;&#xC2DC;&#xC9C0;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4; &#xAD00;&#xCC30; &#xC2DC; &#xC5BB;&#xC744; &#xACE0; &#xC5B5;&#xC555; nucleosome &#xADDC;&#xC81C; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xC694;&#xAD6C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; nucleosome &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4; &#xACE0; transcriptional &#xC7AC;&#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC808;&#xBC18; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC2DD; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xC720;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC5B5;&#xC555; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB300;&#xB2E4;&#xC218; nucleosome &#xAC1C;&#xC7A5; &#xBC1B;&#xC544;&#xC57C; &#xD560; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; TATA &#xC0C1;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC774; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; nucleosome &#xBC30;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654;&#xAC00; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC624;&#xD788;&#xB824;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC804;&#xC5D0; &#xC0C1; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xAE30;&#xC874; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xD574;&#xB2F9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC5EC;&#xBD80; &#xACB0;&#xC815; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC608;&#xC81C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC591;&#xC744; &#xD55C; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; nucleosome prepositioning &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xADF8;&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2DD;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xB294; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; nucleosome &#xC7AC;&#xBC30;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC544;&#xB2D9;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD070; &#xC815;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xC2DC;&#xAE30; &#xBC14;&#xB78D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nucleosome &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; chromatin &#xC885;&#xC18D; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xC811;&#xADFC;&#xC131; transcriptional &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0; &#xAD6C;&#xC870; &#xC870;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; predominates.

Varias bien estudiados los promotores en la levadura pierde nucleosomas tras la activaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n y obtener los mismos a la represi&#xF3;n, una observaci&#xF3;n que ha hecho que el modelo que la activaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n y la represi&#xF3;n requiere remodelaci&#xF3;n nucleosoma de los promotores regulados. Hemos examinado el posicionamiento de nucleosomas mundial antes y despu&#xE9;s de la glucosa inducida por la reprogramaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n, una condici&#xF3;n bajo la cual m&#xE1;s de la mitad de todos los genes de la levadura de manera significativa cambi&#xF3; de expresi&#xF3;n. La mayor&#xED;a de los genes inducidos y reprimidos exhiben ning&#xFA;n cambio en la disposici&#xF3;n promotor nucleosoma, aunque los promotores que se someten a la remodelaci&#xF3;n nucleosoma tienden a contener una caja TATA. Por el contrario, encontramos m&#xFA;ltiples ejemplos donde la accesibilidad preexistente de supuestos factor de transcripci&#xF3;n sitios de uni&#xF3;n antes de la adici&#xF3;n de glucosa en determinar si el gen correspondiente se cambia la expresi&#xF3;n en respuesta a la adici&#xF3;n de glucosa. Estos resultados sugieren que la selecci&#xF3;n de sitios apropiados factor de transcripci&#xF3;n de uni&#xF3;n pueden ser dictado en gran medida por nucleosoma preposicionamiento pero que la regulaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n a trav&#xE9;s de estos sitios est&#xE1; dictada no por nucleosoma reposicionamiento pero por cambios en la actividad del factor de transcripci&#xF3;n.

La cromatina dependiente de Accesibilidad factor de transcripci&#xF3;n lugar de Remodelaci&#xF3;n Nucleosoma predomina durante la reestructuraci&#xF3;n global de la transcripci&#xF3;n en Saccharomyces cerevisiae

La plupart des promoteurs dans la levure contient une r&#xE9;gion nucl&#xE9;osome appauvri (NDR), mais les m&#xE9;canismes par lesquels les NDR sont &#xE9;tablies et maintenues in vivo sont actuellement dans le flou. Nous avons examin&#xE9; la fa&#xE7;on dont l&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome de placement nucl&#xE9;osome est modifi&#xE9;e en l&#x26;#39;absence de deux types distincts d&#x26;#39;activit&#xE9; remodelage du nucl&#xE9;osome. Chez les mutants de deux SNF2, qui code pour le composant ATPase du complexe de remodelage SWI / SNF, et ASF1, qui code pour un chaperon d&#x26;#39;histones, des ensembles distincts de promoteurs de g&#xE8;nes effectuer nucl&#xE9;osomes en exc&#xE8;s dans leurs NDR par rapport &#xE0; de type sauvage. En SnF2 mutants, nucl&#xE9;osomes promoteur exc&#xE9;dentaires en corr&#xE9;lation avec l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes r&#xE9;duite. Dans les deux mutants, les nucl&#xE9;osomes exc&#xE8;s occupent des s&#xE9;quences d&#x26;#39;ADN qui sont &#xE9;nerg&#xE9;tiquement moins favorable pour la formation des nucl&#xE9;osomes, indiquant que les histone-ADN intrins&#xE8;ques des interactions ne sont pas suffisantes pour le positionnement des nucl&#xE9;osomes in vivo, et que SnF2 et Asf1 promouvoir &#xE9;quilibration thermodynamique de tableaux nucl&#xE9;osomiques. Des cellules d&#xE9;pourvues de SNF2 ou ASF1 encore accomplir des changements dans la structure du nucl&#xE9;osome promoteur associ&#xE9;es &#xE0; grande &#xE9;chelle reprogrammation transcriptionnelle. Toutefois, la r&#xE9;organisation de la chromatine dans les mutants est r&#xE9;duite dans une mesure par rapport &#xE0; cellules de type sauvage, m&#xEA;me si les changements de transcription se d&#xE9;rouler normalement. En r&#xE9;sum&#xE9;, le remodelage actif est n&#xE9;cessaire pour la distribution de nucl&#xE9;osomes &#xE0; des postes &#xE9;nerg&#xE9;tiquement favorables in vivo et pour la r&#xE9;organisation de la chromatine en r&#xE9;ponse aux changements dans l&#x26;#39;activit&#xE9; transcriptionnelle.

Chromatine Remodelers nucl&#xE9;osomes claires &#xE0; partir des sites d&#xE9;favorables intrins&#xE8;que d&#x26;#39;&#xE9;tablir des r&#xE9;gions appauvries en nucl&#xE9;osomes au Promoteurs

&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x5BA3;&#x4F20;&#x5458;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x8D2B;&#x5730;&#x533A; (NDR)&#xFF0C;&#x4F46; Ndr &#x662F;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x548C;&#x7EF4;&#x6301;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x76EE;&#x524D;&#x8FD8;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x5982;&#x4F55;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5B89;&#x7F6E;&#x4E24;&#x79CD;&#x622A;&#x7136;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x91CD;&#x5851;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6CA1;&#x6709;&#x6539;&#x53D8;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A; SNF2&#xFF0C;&#x5B83;&#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x7684; Swi/&#x7231;&#x68EE;&#x91CD;&#x5851;&#x590D;&#x6742;&#x548C; ASF1&#xFF0C;&#x5B83;&#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4F34;&#x4FA3;&#xFF0C;ATPase &#x7EC4;&#x4EF6;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x643A;&#x5E26;&#x591A;&#x4F59;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5728;&#x5176;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7684; Ndr&#x3002;&#x5728; snf2 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x591A;&#x4F59;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5173;&#x8054;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x591A;&#x4F59;&#x7684;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5360;&#x636E;&#x5927;&#x529B;&#x4E3A;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5185;&#x5728;&#x4E0E;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;-DNA &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5E76;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;Snf2 &#x548C; Asf1 &#x4FC3;&#x8FDB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x5E73;&#x8861;&#x4E0D;&#x592A;&#x6709;&#x5229;&#x7684; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7F3A;&#x4E4F; SNF2 &#x6216; ASF1 &#x4ECD;&#x5B8C;&#x6210;&#x4E0E;&#x5927;&#x578B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x8F6C;&#x5F55;&#x53D8;&#x5316;&#x6B63;&#x5E38;&#x8FDB;&#x884C;&#xFF0C;&#x5728;&#x591A;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4;&#x51CF;&#x5C11;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x5206;&#x53D1;&#x5230;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5927;&#x529B;&#x6709;&#x5229;&#x9635;&#x5730;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x548C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x79EF;&#x6781;&#x91CD;&#x5851;&#x3002;

&#x67D3;&#x8272;&#x8D28; remodelers &#x6E05;&#x9664;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x4ECE;&#x672C;&#x8D28;&#x4E0A;&#x4E0D;&#x826F;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5728;&#x5021;&#x5BFC;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x8D2B;&#x5730;&#x533A;&#x3002;

Most promoters in yeast contain a nucleosome-depleted region (NDR), but the mechanisms by which NDRs are established and maintained in vivo are currently unclear. We have examined how genome-wide nucleosome placement is altered in the absence of two distinct types of nucleosome remodeling activity. In mutants of both SNF2, which encodes the ATPase component of the Swi/Snf remodeling complex, and ASF1, which encodes a histone chaperone, distinct sets of gene promoters carry excess nucleosomes in their NDRs relative to wild-type. In snf2 mutants, excess promoter nucleosomes correlate with reduced gene expression. In both mutants, the excess nucleosomes occupy DNA sequences that are energetically less favorable for nucleosome formation, indicating that intrinsic histone-DNA interactions are not sufficient for nucleosome positioning in vivo, and that Snf2 and Asf1 promote thermodynamic equilibration of nucleosomal arrays. Cells lacking SNF2 or ASF1 still accomplish the changes in promoter nucleosome structure associated with large-scale transcriptional reprogramming. However, chromatin reorganization in the mutants is reduced in extent compared to wild-type cells, even though transcriptional changes proceed normally. In summary, active remodeling is required for distributing nucleosomes to energetically favorable positions in vivo and for reorganizing chromatin in response to changes in transcriptional activity.

Chromatin remodelers clear nucleosomes from intrinsically unfavorable sites to establish nucleosome-depleted regions at promoters.

Die meisten Promotoren in Hefe enthalten eine Nukleosom-abgereichertem Region (NDR), aber die Mechanismen, mit denen Unzustellbarkeitsberichte erstellt und fortgeschrieben in-vivo, sind derzeit unklar. Wir haben untersucht, wie genomweiten Nukleosom Platzierung wird diesbez&uuml;glich zwei verschiedene Arten von Nukleosom Umbau Aktivit&auml;t ver&auml;ndert. Unterschiedliche S&auml;tze von Gen-Promotoren tragen in Mutanten der beiden SNF2, die codiert die ATPase-Komponente des Swi/Snf Umbau komplexer und ASF1, die ein Histon Chaperone codiert, &uuml;bersch&uuml;ssige Nucleosomes in ihre Unzustellbarkeitsberichten relativ Wild-Typ. In snf2 Mutanten korrelieren &uuml;bersch&uuml;ssige Projekttr&auml;ger Nucleosomes mit reduzierten Genexpression. In beiden Mutanten besetzen die &uuml;bersch&uuml;ssige Nucleosomes DNA-Sequenzen, die energetisch ung&uuml;nstigeren Nukleosom Bildung, angibt, dass intrinsische Histon-DNA-Wechselwirkungen Nukleosom Positionierung in-vivo nicht ausreichen und dass Snf2 und Asf1 thermodynamischen Gleichgewichtszustand nucleosomal Arrays f&ouml;rdern sind. Zellen, die in Ermangelung SNF2 oder ASF1 noch erreichen die &Auml;nderungen im Projekttr&auml;ger-Nukleosom-Struktur, die gro&szlig; angelegte transkriptionelle Programmierung zugeordnet. Chromatin-Reorganisation in Mutanten wird jedoch im Umfang im Vergleich zu Wildtyp Zellen, verringert, obwohl transkriptionelle &Auml;nderungen ganz normal fortgesetzt. Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen ist die aktive Umbau f&uuml;r die Verteilung von Nucleosomes energetisch g&uuml;nstigen Positionen in-vivo und Reorganisation von Chromatin in Reaktion auf &Auml;nderungen in transkriptionelle Aktivit&auml;t erforderlich.

Chromatin-Remodelers deaktivieren Nucleosomes von intrinsisch ung&uuml;nstigen Standorten Nukleosom-abgereichertem Regionen an Promotoren herstellen.

La maggior parte dei promotori nel lievito contengono una regione nucleosome-esaurito (NDR), ma i meccanismi da cui i rapporti di mancato recapito sono stabiliti e aggiornati in vivo sono attualmente poco chiari. Abbiamo esaminato come genome-wide nucleosome posizionamento &egrave; alterato in assenza di due tipi distinti di nucleosome rimodellamento attivit&agrave;. Mutanti di entrambi SNF2, che codifica per la componente di atpasi del rimodellamento complesso Swi/Snf e ASF1, che codifica per un accompagnatore dell&#39;istone, insiemi distinti di promotori del gene portano nucleosomes in eccesso nei loro rapporti di mancato recapito rispetto al wild-type. Snf2 mutanti, nucleosomi promotore in eccesso correlano con espressione genica ridotta. Entrambi mutanti, i nucleosomes in eccesso occupano le sequenze del DNA che sono energeticamente meno favorevoli per la formazione del nucleosoma, che indica che le interazioni DNA-istone intrinseca non sono sufficienti per nucleosoma posizionamento in vivo, e che Snf2 e Asf1 promuovere equilibrio termodinamico di matrici nucleosomal. Cellule manca SNF2 o ASF1 ancora realizzare i cambiamenti nel promotore nucleosome struttura associata riprogrammazione transcriptional su larga scala. Tuttavia, riorganizzazione della cromatina in mutanti &egrave; ridotto in misura rispetto al wild-type cellule, anche se le modifiche transcriptional procedere normalmente. In sintesi, rimodellamento attivo &egrave; richiesto per la distribuzione di nucleosomi energeticamente posizioni in vivo e per la riorganizzazione della cromatina in risposta ai cambiamenti nell&#39;attivit&agrave; trascrizionale.

Imprese di ristrutturazione della cromatina chiara nucleosomi da siti intrinsecamente sfavorevole per stabilire le regioni nucleosome-esaurito presso promotori.

&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6B20;&#x4E4F;&#x9818;&#x57DF;&#xFF08;NDR&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;NDR&#x306E;&#x304C;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x7DAD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x304C;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;SWI / SNF&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;ATPase&#x6210;&#x5206;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;SNF2&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;ASF1&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;NDR&#x306B;&#x904E;&#x5270;&#x306A;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x3002; snf2&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x904E;&#x5270;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x9084;&#x5143;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x904E;&#x5270;&#x306A;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;-DNA&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x306F;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3001;&#x3068;Snf2&#x3068;ASF1&#x306F;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x5E73;&#x8861;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7CBE;&#x529B;&#x7684;&#x306B;&#x4E0D;&#x5229;&#x3067;&#x3042;&#x308B;DNA&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x5360;&#x6709;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SNF2&#x307E;&#x305F;&#x306F;ASF1&#x3092;&#x6B20;&#x304F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x7D9A;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x3069;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306B;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x6539;&#x9020;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7CBE;&#x529B;&#x7684;&#x306B;&#x6709;&#x5229;&#x306A;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x914D;&#x5E03;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x6539;&#x7BC9;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x67AF;&#x6E07;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x4E0D;&#x5229;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;

&#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; nucleosome &#xACE0;&#xAC08; &#xC601;&#xC5ED; (NDR)&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; Ndr&#xB294; &#xC124;&#xB9BD; &#xD558; &#xACE0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC9C0; &#xB418;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xD604;&#xC7AC; &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;. &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; nucleosome &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; nucleosome&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC30;&#xCE58;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Swi/Snf &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0;, &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xBC0F; ASF1 &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; ATPase &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xB450; snf2&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC758; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xC9D1;&#xD569; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785;&#xC744; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; Ndr&#xC5D0; &#xCD08;&#xACFC; nucleosomes&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;. Snf2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xCD08;&#xACFC; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; nucleosomes &#xAC10;&#xC18C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xC0C1;&#xAD00;. &#xB450; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCD08;&#xACFC; nucleosomes &#xC815;&#xB825;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; nucleosome &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; DNA &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBD80; nucleosome vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xACE0; Snf2 &#xBC0F; Asf1 nucleosomal &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559;&#xC801; &#xD3C9;&#xD615; &#xD64D;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD88;&#xB9AC;&#xB294; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xCC28;&#xC9C0;. SNF2 &#xB610;&#xB294; ASF1 &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xC140; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; nucleosome &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; transcriptional &#xC7AC;&#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBCC0;&#xD654; &#xB2EC;&#xC131;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; chromatin &#xAC1C;&#xD3B8; transcriptional &#xBCC0;&#xACBD; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558;&#xB354;&#xB77C;&#xB3C4; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC140;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, &#xD65C;&#xC131; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; nucleosomes vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xB825;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xB9AC;&#xD55C; &#xC704;&#xCE58;&#xB85C; &#xBC30;&#xD3EC; &#xD558; &#xACE0; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0; chromatin transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Chromatin remodelers &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; nucleosome &#xACE0;&#xAC08; &#xC601;&#xC5ED; &#xC124;&#xC815; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD88;&#xB9AC; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; nucleosomes &#xC120;&#xD0DD;&#xC744; &#xCDE8;&#xC18C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La mayor&#xED;a de los promotores en la levadura contienen una regi&#xF3;n empobrecida en nucleosoma (NDR), pero los mecanismos por los cuales los NDR son establecidas y mantenidas in vivo son claro en la actualidad. Hemos examinado c&#xF3;mo el genoma de colocaci&#xF3;n nucleosoma est&#xE1; alterada en la ausencia de dos tipos distintos de actividad de remodelaci&#xF3;n nucleosoma. En los mutantes de ambos SNF2, que codifica el componente de la ATPasa del complejo SWI / SNF remodelaci&#xF3;n y ASF1, que codifica una chaperona de histonas, distintos grupos de promotores de genes llevan nucleosomas en exceso en sus informes de no entrega con respecto al de tipo salvaje. En Snf2 mutantes, el exceso de nucleosomas promotor se correlaciona con la expresi&#xF3;n de genes reducido. En ambos mutantes, los nucleosomas exceso ocupar las secuencias de ADN que son energ&#xE9;ticamente menos favorable para la formaci&#xF3;n de nucleosoma, lo que indica que intr&#xED;nsecas histona-ADN interacciones no son suficientes para el posicionamiento de nucleosomas in vivo, y que Snf2 y Asf1 promover equilibraci&#xF3;n termodin&#xE1;mico de matrices nucleosomal. Las c&#xE9;lulas que carecen SNF2 o ASF1 a&#xFA;n as&#xED; lograr los cambios en la estructura del nucleosoma promotor asociados a gran escala de la reprogramaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n. Sin embargo, la reorganizaci&#xF3;n de la cromatina en los mutantes se reduce en extensi&#xF3;n en comparaci&#xF3;n con c&#xE9;lulas de tipo salvaje, a pesar de los cambios transcripcionales proceder normalmente. En resumen, la remodelaci&#xF3;n activo se requiere para la distribuci&#xF3;n de nucleosomas a posiciones energ&#xE9;ticamente favorables en vivo y para la reorganizaci&#xF3;n de la cromatina en respuesta a cambios en la actividad transcripcional.

La cromatina Remodelers nucleosomas claras desde los lugares donde intr&#xED;nsecamente desfavorables para establecer regiones nucleosoma agotando a los promotores

Crossovers (COs) between homologous chromosomes ensure their faithful segregation during meiosis. We identify C. elegans COSA-1, a cyclin-related protein conserved in metazoa, as a key component required to convert meiotic double-strand breaks (DSBs) into COs. During late meiotic prophase, COSA-1 localizes to foci that correspond to the single CO site on each homolog pair and indicate sites of eventual concentration of other conserved CO proteins. Chromosomes gain and lose competence to load CO proteins during meiotic progression, with competence to load COSA-1 requiring prior licensing. Our data further suggest a self-reinforcing mechanism maintaining CO designation. Modeling of a nonlinear dose-response relationship between IR-induced DSBs and COSA-1 foci reveals efficient conversion of DSBs into COs when DSBs are limiting and a robust capacity to limit cytologically differentiated CO sites when DSBs are in excess. COSA-1 foci serve as a unique live cell readout for investigating CO formation and CO interference.

COSA-1 reveals robust homeostasis and separable licensing and reinforcement steps governing meiotic crossovers.

For most organisms, chromosome segregation during meiosis relies on deliberate induction of DNA double-strand breaks (DSBs) and repair of a subset of these DSBs as inter-homolog crossovers (COs). However, timing and levels of DSB formation must be tightly controlled to avoid jeopardizing genome integrity. Here we identify the DSB-2 protein, which is required for efficient DSB formation during C. elegans meiosis but is dispensable for later steps of meiotic recombination. DSB-2 localizes to chromatin during the time of DSB formation, and its disappearance coincides with a decline in RAD-51 foci marking early recombination intermediates and precedes appearance of COSA-1 foci marking CO-designated sites. These and other data suggest that DSB-2 and its paralog DSB-1 promote competence for DSB formation. Further, immunofluorescence analyses of wild-type gonads and various meiotic mutants reveal that association of DSB-2 with chromatin is coordinated with multiple distinct aspects of the meiotic program, including the phosphorylation state of nuclear envelope protein SUN-1 and dependence on RAD-50 to load the RAD-51 recombinase at DSB sites. Moreover, association of DSB-2 with chromatin is prolonged in mutants impaired for either DSB formation or formation of downstream CO intermediates. These and other data suggest that association of DSB-2 with chromatin is an indicator of competence for DSB formation, and that cells respond to a deficit of CO-competent recombination intermediates by prolonging the DSB-competent state. In the context of this model, we propose that formation of sufficient CO-competent intermediates engages a negative feedback response that leads to cessation of DSB formation as part of a major coordinated transition in meiotic prophase progression. The proposed negative feedback regulation of DSB formation simultaneously (1) ensures that sufficient DSBs are made to guarantee CO formation and (2) prevents excessive DSB levels that could have deleterious effects.

The C. elegans DSB-2 protein reveals a regulatory network that controls competence for meiotic DSB formation and promotes crossover assurance.

Meiotic recombination is initiated by the programmed induction of double-strand DNA breaks (DSBs), lesions that pose a potential threat to the genome. A subset of the DSBs induced during meiotic prophase become designated to be repaired by a pathway that specifically yields interhomolog crossovers (COs), which mature into chiasmata that temporarily connect the homologs to ensure their proper segregation at meiosis I. The remaining DSBs must be repaired by other mechanisms to restore genomic integrity prior to the meiotic divisions. Here we show that HIM-6, the Caenorhabditis elegans ortholog of the RecQ family DNA helicase BLM, functions in both of these processes. We show that him-6 mutants are competent to load the MutSγ complex at multiple potential CO sites, to generate intermediates that fulfill the requirements of monitoring mechanisms that enable meiotic progression, and to accomplish and robustly regulate CO designation. However, recombination events at a subset of CO-designated sites fail to mature into COs and chiasmata, indicating a pro-CO role for HIM-6/BLM that manifests itself late in the CO pathway. Moreover, we find that in addition to promoting COs, HIM-6 plays a role in eliminating and/or preventing the formation of persistent MutSγ-independent associations between homologous chromosomes. We propose that HIM-6/BLM enforces biased outcomes of recombination events to ensure that both (a) CO-designated recombination intermediates are reliably resolved as COs and (b) other recombination intermediates reliably mature into noncrossovers in a timely manner.

DNA helicase HIM-6/BLM both promotes MutSγ-dependent crossovers and antagonizes MutSγ-independent interhomolog associations during caenorhabditis elegans meiosis.

Morquio A syndrome (mucopolysaccharidosis IVA) is an autosomal recessive disorder that results from deficient activity of the enzyme N-acetylgalactosamine-6-sulfatase (GALNS) due to alterations in the GALNS gene, which causes major skeletal and connective tissue abnormalities and effects on multiple organ systems. The GALNS alterations associated with Morquio A are numerous and heterogeneous, and new alterations are continuously identified. To aid detection and interpretation of GALNS alterations, from previously published research, we provide a comprehensive and up-to-date listing of 277 unique GALNS alterations associated with Morquio A identified from 1,091 published GALNS alleles. In agreement with previous findings, most reported GALNS alterations are missense changes and even the most frequent alterations are relatively uncommon. We found that 48% of patients are assessed as homozygous for a GALNS alteration, 39% are assessed as heterozygous for two identified GALNS alterations, and in 13% of patients only one GALNS alteration is detected. We report here the creation of a locus-specific database for the GALNS gene (http://galns.mutdb.org/) that catalogs all reported alterations in GALNS to date. We highlight the challenges both in alteration detection and genotype-phenotype interpretation caused in part by the heterogeneity of GALNS alterations and provide recommendations for molecular testing of GALNS.

Karl Zawadzki

Department of Molecular Biology

Princeton University

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

Karl Zawadzki

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Princeton University

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

Department of Molecular Biology