Chromosomal Spread Preparation of Human Embryonic Stem Cells for Karyotyping

Although human embryonic stem cells (hESC) have been shown to present a stable diploid karyotype 1, many studies have reported that depending on culture ...

Federal University of Rio De Janeiro-UFRJ

&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x548C;&#x589E;&#x76CA;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x66FE;&#x7ECF;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5185;&#x3002;&#x5728;&#x5F00;&#x53D1;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;&#x81F3;&#x5C11;&#x6709;&#x4E09;&#x5206;&#x4E4B;&#x4E00;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x56FD;&#x5BB6;&#x7B79;&#x5907;&#x59D4;&#x5458;&#x4F1A;) &#x7684;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#x3002;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7B79;&#x5907;&#x59D4;&#x5458;&#x4F1A;&#x53EF;&#x80FD;&#x5B58;&#x6D3B;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x96C6;&#x6210;&#x5230;&#x4E86;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7535;&#x8DEF;&#x3002;&#x9274;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x73B0;&#x8C61;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F97;&#x5230;&#x7B54;&#x590D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x795E;&#x7ECF;&#x5206;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5168;&#x53CD;&#x5F0F;&#x7EF4;&#x7532;&#x9178;&#x9178; (RA) &#x4F34;&#x968F;&#x7740;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5982;&#x4E0A;&#x6587;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x76AE;&#x8D28;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7B79;&#x5907;&#x59D4;&#x5458;&#x4F1A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x80DA;&#x80CE;&#x764C; (EC) &#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (ES) &#x548C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x5E72; (iPS) &#x7EC6;&#x80DE;&#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7B79;&#x5907;&#x59D4;&#x5458;&#x4F1A;.&#x500D;&#x4F53;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#x7387;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x4E8C;&#x6298;&#x3001; &#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7684;&#x6D41;&#x884C;&#x7387;&#x5728; RA &#x635F;&#x5931;&#x5F15;&#x7269;&#x65F6;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5E7C;&#x7A1A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x8BD5;&#x56FE;&#x7406;&#x89E3;&#x795E;&#x7ECF;&#x6E90;&#x6027;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#xFF0C;&#x5FAE;&#x6838;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x751F;&#x5B58;&#x7D20;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x88AB;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x592A;&#x9633;RA &#x589E;&#x52A0;&#x5FAE;&#x6838;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x51E0;&#x4E4E; 2 &#x6298;&#x9875;&#x800C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; 50%&#xFF0C;&#x5B58;&#x6D3B;&#x8868;&#x8FBE;&#x6307;&#x793A;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x5206;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x4E22;&#x5931;&#x5176;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x673A;&#x5236;&#x3002;DNA &#x788E;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x6CA1;&#x6709;&#x5173;&#x4E8E;&#x6CBB;&#x7597; RA&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x6307;&#x793A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5F3A;&#x5236;&#x6027;&#x7684;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E90;&#x6027;&#x7684;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7B79;&#x5907;&#x59D4;&#x5458;&#x4F1A;&#x547D;&#x8FD0;&#x7684;&#x80DA;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x4EE5;&#x6392;&#x9664;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x662F; RA &#x7684;&#x5F85;&#x9047;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4E0E;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x6742;&#x6563;&#x540E;&#x679C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x7C7B;&#x98CE;&#x6E7F;&#x5173;&#x8282;&#x708E;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x53CA;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7684;&#x5229;&#x5F97;&#x6216;&#x635F;&#x5931;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x795E;&#x7ECF;&#x5206;&#x5316;&#x3001; &#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#x3001; &#x5FAE;&#x6838;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x5B58;&#x6D3B;&#x7D20;&#x5728;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E; RA&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BC1;&#x636E; somatically &#x751F;&#x6210;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x53D8;&#x5F02;&#x4F34;&#x968F;&#x795E;&#x7ECF;&#x53D1;&#x751F;&#x4F53;&#x5916;&#x4E0B;&#x8C03;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x3002;

&#x89C6;&#x9EC4;&#x9178;&#x6CBB;&#x7597;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#x795E;&#x7ECF;&#x53D1;&#x751F;&#x63D0;&#x51FA;&#x589E;&#x52A0;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#x548C;&#x5FAE;&#x6838;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

The existence of loss and gain of chromosomes, known as aneuploidy, has been previously described within the central nervous system. During development, at least one-third of neural progenitor cells (NPCs) are aneuploid. Notably, aneuploid NPCs may survive and functionally integrate into the mature neural circuitry. Given the unanswered significance of this phenomenon, we tested the hypothesis that neural differentiation induced by all-trans retinoic acid (RA) in pluripotent stem cells is accompanied by increased levels of aneuploidy, as previously described for cortical NPCs in vivo. In this work we used embryonal carcinoma (EC) cells, embryonic stem (ES) cells and induced pluripotent stem (iPS) cells undergoing differentiation into NPCs. Ploidy analysis revealed a 2-fold increase in the rate of aneuploidy, with the prevalence of chromosome loss in RA primed stem cells when compared to naÃ¯ve cells. In an attempt to understand the basis of neurogenic aneuploidy, micronuclei formation and survivin expression was assessed in pluripotent stem cells exposed to RA. RA increased micronuclei occurrence by almost 2-fold while decreased survivin expression by 50%, indicating possible mechanisms by which stem cells lose their chromosomes during neural differentiation. DNA fragmentation analysis demonstrated no increase in apoptosis on embryoid bodies treated with RA, indicating that cell death is not the mandatory fate of aneuploid NPCs derived from pluripotent cells. In order to exclude that the increase in aneuploidy was a spurious consequence of RA treatment, not related to neurogenesis, mouse embryonic fibroblasts were treated with RA under the same conditions and no alterations in chromosome gain or loss were observed. These findings indicate a correlation amongst neural differentiation, aneuploidy, micronuclei formation and survivin downregulation in pluripotent stem cells exposed to RA, providing evidence that somatically generated chromosomal variation accompanies neurogenesis in vitro.

Retinoic acid-treated pluripotent stem cells undergoing neurogenesis present increased aneuploidy and micronuclei formation.

L&#x26;#39;existence de la perte et le gain de chromosomes, connu sous le nom aneuplo&#xEF;die, a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;crit pr&#xE9;c&#xE9;demment dans le syst&#xE8;me nerveux central. Au cours du d&#xE9;veloppement, au moins un tiers des cellules prog&#xE9;nitrices neurales (PNJ) sont aneuplo&#xEF;des. Notamment, les PNJ aneuplo&#xEF;des peuvent survivre et fonctionnellement &#xE0; s&#x26;#39;int&#xE9;grer dans les circuits de neurones matures. &#xC9;tant donn&#xE9; l&#x26;#39;importance de ce ph&#xE9;nom&#xE8;ne sans r&#xE9;ponse, nous avons test&#xE9; l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se selon laquelle la diff&#xE9;renciation neurale induite par acide tout-trans r&#xE9;tino&#xEF;que (AR) dans les cellules souches pluripotentes est accompagn&#xE9;e par des niveaux accrus d&#x26;#39;aneuplo&#xEF;die, comme d&#xE9;crit pr&#xE9;c&#xE9;demment pour les PNJ corticales in vivo. Dans ce travail nous avons utilis&#xE9; carcinome embryonnaire (CE), les cellules souches embryonnaires (ES) et les cellules souches pluripotentes induites (iPS), les cellules subissant une diff&#xE9;renciation en PNJ. L&#x26;#39;analyse de plo&#xEF;die a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une augmentation de 2 fois le taux d&#x26;#39;aneuplo&#xEF;die, avec la pr&#xE9;valence de la perte de chromosomes dans les cellules souches RA amorc&#xE9;es par rapport &#xE0; des cellules na&#xEF;ves. Dans une tentative pour comprendre la base de l&#x26;#39;aneuplo&#xEF;die neurog&#xE8;ne, la formation de micronoyaux et d&#x26;#39;expression de la survivine a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;valu&#xE9;e dans des cellules souches pluripotentes expos&#xE9;s &#xE0; la PR. RA a augment&#xE9; apparition de micronoyaux de pr&#xE8;s de 2 fois tout en diminution de l&#x26;#39;expression de la survivine de 50%, indiquant des m&#xE9;canismes possibles par lesquels les cellules souches perdent leurs chromosomes lors de la diff&#xE9;renciation neuronale. Analyse fragmentation de l&#x26;#39;ADN n&#x26;#39;ont d&#xE9;montr&#xE9; aucune augmentation de l&#x26;#39;apoptose sur des corps embryo&#xEF;des trait&#xE9;s avec la polyarthrite rhumato&#xEF;de, ce qui indique que la mort cellulaire n&#x26;#39;est pas le destin obligatoire de PNJ aneuplo&#xEF;des d&#xE9;riv&#xE9;s de cellules pluripotentes. Afin d&#x26;#39;exclure que l&#x26;#39;augmentation de l&#x26;#39;aneuplo&#xEF;die &#xE9;tait une cons&#xE9;quence fausse de traitement de la PR, pas li&#xE9;e &#xE0; la neurogen&#xE8;se, des fibroblastes embryonnaires de souris ont &#xE9;t&#xE9; trait&#xE9;es avec RA dans les m&#xEA;mes conditions et aucune modification dans le gain ou la perte du chromosome ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s. Ces r&#xE9;sultats indiquent une corr&#xE9;lation entre la diff&#xE9;renciation neurale, aneuplo&#xEF;die, la formation de micronoyaux et la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de la survivine dans les cellules souches pluripotentes expos&#xE9;s &#xE0; la polyarthrite rhumato&#xEF;de, fournissant la preuve que somatiquement g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; variation chromosomique accompagne la neurogen&#xE8;se in vitro.

L&#x26;#39;acide r&#xE9;tino&#xEF;que trait&#xE9;s les cellules souches pluripotentes subissant Neurogen&#xE8;se aneuplo&#xEF;die Pr&#xE9;sent accrue et la formation de micronoyaux

Die Existenz von Verlust und Gewinn von Chromosomen, bekannt als Aneuploidie, wurde zuvor innerhalb des zentralen Nervensystems beschrieben. W&auml;hrend der Entwicklung sind mindestens ein Drittel der neuronalen Vorl&auml;uferzellen (NPCs) aneuploider. Insbesondere k&ouml;nnen aneuploider NPCs &uuml;berleben und funktional in der Reife neuralen Schaltkreis integrieren. Angesichts der unbeantwortete Bedeutung dieses Ph&auml;nomens, testeten wir die Hypothese, dass neuronale Differenzierung von All-Trans-Retins&auml;ure (RA) in pluripotenten Stammzellen induziert durch vermehrten Aneuploidie, wie oben beschrieben f&uuml;r in-vivo kortikale NPCs begleitet wird. In dieser Arbeit, die wir verwendet Embryonalkarzinom (EG) Zellen, embryonale Stammzellen (ES) und induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS) Differenzierung in NPCs. Ploidie Analyse unterzogen ergab eine 2-fold Zunahme der Rate von Aneuploidie, mit der Verbreitung des Chromosoms Verlust in RA grundiert Stammzellen im Vergleich zu naiven Zellen. In einem Versuch zu verstehen, die Grundlage der neurogenen Aneuploidie wurde Mikrokerne Formation und survivin Ausdruck in pluripotenten Stammzellen ausgesetzt RA beurteilt. RA erh&ouml;ht Mikrokerne Vorkommen von fast 2-fach w&auml;hrend survivin Ausdruck um 50 %, sank, die m&ouml;gliche Mechanismen, mit denen Stammzellen ihre Chromosomen w&auml;hrend neuronale Differenzierung verlieren, angibt. Analyse der DNA-Fragmentierung zeigte keine Zunahme der Apoptose auf Embryoid K&ouml;rper behandelt mit RA, darauf hinweist, dass Zelltod nicht das obligatorische Schicksal aneuploider NPCs von pluripotenten Zellen abgeleitet ist. Um auszuschlie&szlig;en, dass der Anstieg Aneuploidie eine vermeidbare Folge der RA-Behandlung, die nicht im Zusammenhang mit Neurogenese, M&auml;useembryonalen mit RA unter den gleichen Bedingungen behandelt wurden und keine &Auml;nderungen im Chromosom Gewinn oder Verlust beobachtet. Diese Befunde zeigen eine Korrelation zwischen neuronale Differenzierung, Aneuploidie, Bildung von Mikrokernen und survivin Heraufregulation in pluripotenten Stammzellen, RA, den Nachweis, dass somatically generierten chromosomalen Abweichungen Neurogenese in-vitro-begleitet ausgesetzt.

Retinoic S&auml;ure behandelt pluripotenten Stammzellen, die in der Neurogenese pr&auml;sentieren erh&ouml;hter Aneuploidie und Mikrokerne Bildung.

L&#39;esistenza di perdita e guadagno di cromosomi, noto come aneuploidia, &egrave; stato descritto in precedenza all&#39;interno del sistema nervoso centrale. Durante lo sviluppo, almeno un terzo delle cellule progenitrici neurali (NPC) sono aneuploidi. In particolare, aneuploidi NPC possono sopravvivere e funzionalmente integrare i circuiti neurali maturo. Data l&#39;importanza di questo fenomeno senza risposta, abbiamo testato l&#39;ipotesi che differenziazione neuronale indotta da acido all-trans retinoico (RA) in cellule staminali pluripotenti &egrave; accompagnato da aumento dei livelli di aneuploidia, come descritto in precedenza per gli NPC corticali in vivo. In questo lavoro abbiamo utilizzato le cellule di carcinoma embrionale (CE), embrionale (ES) cellule staminali e cellule staminali (iPS) pluripotenti indotte in fase di differenziazione in analisi NPC. ploidia ha rivelato un aumento del tasso di aneuploidie 2 volte, con la prevalenza del cromosoma perdita in RA innescata cellule staminali rispetto alle cellule ingenui. Nel tentativo di capire la base dell&#39;aneuploidia neurogena, micronuclei formazione e survivina espressione &egrave; stata valutata in cellule staminali pluripotenti esposte a ra RA aumentato occorrenza di micronuclei di quasi 2 volte mentre &egrave; diminuito survivina espressione del 50%, che indica possibili meccanismi con cui le cellule staminali perdono loro cromosomi durante la differenziazione neurale. Analisi di frammentazione del DNA hanno dimostrato nessun aumento di apoptosi su embryoid corpi trattati con RA, che indica che la morte cellulare non &egrave; il destino obbligatorio degli NPC aneuploidi derivato da cellule pluripotenti. Al fine di escludere che l&#39;aumento di aneuploidia fu una conseguenza spuria di trattamento RA, non correlato alla neurogenesi, fibroblasti embrionali del mouse sono stati trattati con RA alle stesse condizioni e senza alterazioni nel cromosoma guadagno o la perdita sono state osservate. Questi risultati indicano una correlazione tra differenziazione neurale, aneuploidia, formazione di micronuclei e survivina downregulation in cellule staminali pluripotenti esposti a RA, fornendo prove che somaticamente generato variazione cromosomica accompagna la neurogenesi in vitro.

Retinoico acidato staminali pluripotenti subendo neurogenesi presentano maggiore formazione di aneuploidia e micronuclei.

&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3068;&#x5229;&#x5F97;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x5185;&#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;NPC&#x306E;&#xFF09;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;3&#x5206;&#x306E;1&#x306F;&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x7570;&#x6570;NPC&#x306F;&#x751F;&#x304D;&#x6B8B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x56DE;&#x8DEF;&#x306B;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x73FE;&#x8C61;&#x306E;&#x672A;&#x89E3;&#x6C7A;&#x306E;&#x610F;&#x7FA9;&#x3092;&#x8003;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;NPC&#x3067;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E2D;&#x306E;&#x5168;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30A4;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;RA&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x5206;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x3092;&#x4F34;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x6211;&#x3005;&#x306F;NPC&#x3078;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x7D4C;&#x3066;&#x80CE;&#x5150;&#x6027;&#x764C;&#xFF08;EC&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#xFF08;ES&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#xFF08;iPS&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x500D;&#x6570;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;RA&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x6709;&#x75C5;&#x7387;&#x3068;&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;2&#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x795E;&#x7D4C;&#x56E0;&#x6027;&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3057;&#x3088;&#x3046;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x8A66;&#x307F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x6838;&#x5F62;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D3;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;RA&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x795E;&#x7D4C;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x3092;&#x5931;&#x3046;&#x5E79;&#x3053;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;50&#xFF05;&#x306E;survivin&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;RA&#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x307C;2&#x500D;&#x3067;&#x5C0F;&#x6838;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; DNA&#x65AD;&#x7247;&#x5316;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x7570;&#x6570;&#x6027;NPC&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;RA&#x3067;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x80DA;&#x69D8;&#x4F53;&#x4E0A;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304C;&#x795E;&#x7D4C;&#x65B0;&#x751F;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;RA&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30B9;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;RA&#x3067;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x640D;&#x76CA;&#x306B;&#x306F;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x65B0;&#x751F;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;RA&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x5206;&#x5316;&#x3001;&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x3001;&#x5C0F;&#x6838;&#x5F62;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x76F8;&#x95A2;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x795E;&#x7D4C;&#x767A;&#x751F;&#x306E;&#x73FE;&#x72B6;&#x5897;&#x52A0;&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x3068;&#x5C0F;&#x6838;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x65BD;&#x884C;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30A4;&#x30F3;&#x9178;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;

&#xC911;&#xC559; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC190;&#xC2E4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC774;&#xC218;&#xC131;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xC758; &#xC774;&#xB4DD; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC220; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (NPCs)&#xC758; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 1 / 3&#xC740; aneuploid. &#xD2B9;&#xD788;, aneuploid NPCs &#xC0DD;&#xC874; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD68C;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD569;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD604;&#xC0C1;&#xC758; &#xB2F5;&#xC774; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC10;&#xC548;&#xD560; &#xB54C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD84;&#xD654; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; retinoic &#xC0B0; (RA)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC774;&#xC218;&#xC131;, &#xC55E;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85;&#xD55C; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; NPCs &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB3D9;&#xBC18; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC791;&#xD488; embryonal &#xC554; (EC) &#xC138;&#xD3EC;, &#xBC30;&#xC544;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC904;&#xAE30; (ES&#xC758;) &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; (iPS) &#xC138;&#xD3EC; NPCs. Ploidy &#xBD84;&#xC11D;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xB97C; &#xACAA;&#xACE0; &#xACC4;&#xC2DC; &#xC774;&#xC218;&#xC131;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC774; 2-fold &#xC99D;&#xAC00;, &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xC758; &#xC720;&#xD589;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; RA&#xC5D0;&#xC11C; &#xC190;&#xC2E4; &#xC561; &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; &#xC140;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;. Neurogenic &#xC774;&#xC218;&#xC131;&#xC758; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xB3C4; micronuclei &#xD615;&#xC131;&#xACFC; survivin &#xC2DD; pluripotent &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xD3C9;&#xAC00; RA &#xC99D;&#xAC00; micronuclei &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC70;&#xC758; 2-fold 50% &#xC2DD; survivin &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD84;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC190;&#xC2E4; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. DNA &#xBD84;&#xC5F4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DC;&#xC5F0; embryoid &#xC2DC;&#xCCB4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC740; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; aneuploid NPCs &#xD544;&#xC218; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; RA &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; apoptosis&#xC5D0; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC218;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00; RA &#xCE58;&#xB8CC;, &#xC131;&#xCCB4;, &#xBB34;&#xAD00;&#xC758; &#xC2A4; &#xD4E8; &#xB9AC; &#xC5B4;&#xC2A4; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC678; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBBF8; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; RA&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC774;&#xB4DD; &#xB610;&#xB294; &#xC190;&#xC2E4;&#xC774; &#xC5C6;&#xB294; &#xBCC0;&#xACBD; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD84;&#xD654;, &#xC774;&#xC218;&#xC131;, micronuclei &#xD615;&#xC131;&#xACFC; pluripotent &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;, somatically &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xBCC0;&#xD615; &#xCCB4; &#xC678; &#xC131;&#xCCB4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC81C;&#xACF5; &#xB418;&#xB294; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; downregulation survivin &#xC0AC;&#xC774; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Retinoic &#xC0B0; &#xC131; &#xCC98;&#xB9AC; pluripotent &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xCCB4;&#xB97C; &#xBC1B;&#xACE0; &#xD604;&#xC7AC; &#xC99D;&#xAC00; &#xC774;&#xC218;&#xC131; &#xBC0F; micronuclei &#xD615;&#xC131;.

La existencia de p&#xE9;rdida y la ganancia de los cromosomas, conocido como aneuploid&#xED;a, se ha descrito previamente en el sistema nervioso central. Durante el desarrollo, por lo menos un tercio de las c&#xE9;lulas progenitoras neuronales (CPN) son aneuploides. En particular, los personajes aneuploides puede sobrevivir e integrar funcionalmente al circuito neural madura. Dada la importancia de este fen&#xF3;meno sin respuesta, hemos probado la hip&#xF3;tesis de que la diferenciaci&#xF3;n neuronal inducida por el &#xE1;cido trans-retinoico (RA) en c&#xE9;lulas madre pluripotentes se acompa&#xF1;a de aumento de los niveles de aneuploid&#xED;a, como se describi&#xF3; anteriormente para los NPCs corticales en vivo. En este trabajo se utiliz&#xF3; carcinoma embrionario (CE) las c&#xE9;lulas, las c&#xE9;lulas madre embrionarias (ES) y madre pluripotentes inducidas (iPS) a las c&#xE9;lulas sometidas a la diferenciaci&#xF3;n en los NPCs. An&#xE1;lisis de la ploid&#xED;a revel&#xF3; un aumento de 2 veces en la tasa de aneuploid&#xED;a, con la prevalencia de la p&#xE9;rdida del cromosoma en las c&#xE9;lulas madre de la AR con imprimaci&#xF3;n en comparaci&#xF3;n con c&#xE9;lulas de los animales. En un intento por entender la base de aneuploid&#xED;a neurog&#xE9;nica, la formaci&#xF3;n de micron&#xFA;cleos y de expresi&#xF3;n survivin se evalu&#xF3; en c&#xE9;lulas madre pluripotentes expuestos a la AR. RA mayor presencia de micron&#xFA;cleos en casi 2 veces, mientras que una menor expresi&#xF3;n de la survivina en un 50%, lo que indica posibles mecanismos por los que se derivan las c&#xE9;lulas pierden sus cromosomas durante la diferenciaci&#xF3;n neuronal. An&#xE1;lisis de la fragmentaci&#xF3;n del ADN demostr&#xF3; que no hab&#xED;a aumento de la apoptosis en los &#xF3;rganos embrionarios tratados con AR, lo que indica que la muerte celular no es el destino obligatorio de los NPCs aneuploides derivadas de las c&#xE9;lulas pluripotentes. Con el fin de excluir que el aumento de aneuploid&#xED;a fue consecuencia espuria de tratamiento de la AR, no relacionado con la neurog&#xE9;nesis, fibroblastos de embriones de rat&#xF3;n fueron tratados con AR en las mismas condiciones y alteraciones en ninguna ganancia o p&#xE9;rdida cromosoma se observaron. Estos resultados indican una correlaci&#xF3;n entre la diferenciaci&#xF3;n neuronal, la aneuploid&#xED;a, la formaci&#xF3;n de micron&#xFA;cleos y la regulaci&#xF3;n a la baja survivina en las c&#xE9;lulas madre pluripotentes expuestos a la AR, lo que demuestra que la variaci&#xF3;n cromos&#xF3;mica generados som&#xE1;ticamente acompa&#xF1;a a la neurog&#xE9;nesis in vitro.

&#xC1;cido retinoico tratados con c&#xE9;lulas madre pluripotentes sometidos neurog&#xE9;nesis actual aumento de aneuploid&#xED;a y formaci&#xF3;n de micron&#xFA;cleos

Priscila B. Campos

Institute of Biomedical Sciences

Federal University of Rio De Janeiro-UFRJ

Chromosomal Spread Preparation of Human Embryonic Stem Cells for Karyotyping

Priscila B. Campos

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Federal University of Rio De Janeiro-UFRJ

Chromosomal Spread Preparation of Human Embryonic Stem Cells for Karyotyping

Institute of Biomedical Sciences