Method Article
Shear stress investigations on an oil-water emulsion system result in drop breakup over the experimental time. To count drop sizes in pumping processes, the suitability of inline endoscopy was successfully demonstrated in this protocol.
Las bombas se utilizan principalmente cuando se transfieren caldos de cultivo estériles en los procesos de producción biofarmacéuticas y biotecnológicas. Sin embargo, durante el proceso de bombeo fuerzas de corte se producen, que puede conducir a la pérdida de productos cualitativa y / o cuantitativa. Para calcular el esfuerzo mecánico con un gasto limitado experimental, se utilizó un sistema de emulsión de aceite-agua, cuya idoneidad se demostró para detecciones tamaño de gota en biorreactores 1. Como gota de ruptura del sistema de emulsión de aceite-agua es una función de la tensión mecánica, la caída de los tamaños necesitan ser contados en el tiempo experimental de las investigaciones de estrés de cizallamiento. En estudios anteriores, la endoscopia inline se ha demostrado ser una técnica de medición precisa y fiable para las detecciones de tamaño de gota en dispersiones líquido / líquido. El objetivo de este protocolo es demostrar la idoneidad de la técnica de endoscopia en línea para las mediciones de tamaño de gota en los procesos de bombeo. Con el fin de expresar el tamaño de la gota, el diámetro medio de Sauterd 32 se utilizó como el diámetro representante de gotas en la emulsión aceite-agua. Los resultados mostraron baja variación en los diámetros medios Sauter, que se cuantificaron por desviaciones estándar por debajo de 15%, lo que indica la fiabilidad de la técnica de medición.
Las bombas se utilizan para transferir los cultivos de células en las industrias farmacéuticas y biotecnológicas. Durante el proceso de bombeo, el estrés mecánico puede resultar en el daño celular irreversible, lo que podría poner en peligro la cantidad y la calidad del producto 1-4. El nivel de estrés mecánico depende de la configuración del tipo de bomba y la bomba, como se ha demostrado en estudios previos 5-6. Comúnmente, las bombas peristálticas, jeringas y el diafragma se utilizan para un solo uso de aplicaciones basadas en tecnología (SU). Estas bombas resultan en altas fuerzas de cizallamiento locales causadas por la compresión de la tubería de la bomba y el flujo pulsante 7.
Para superar estos inconvenientes, bombas centrífugas de levitación magnética (bombas centrífugas MagLev) constituyen una alternativa prometedora. El motor es accionado magnéticamente a fin de evitar huecos estrechos entre el impulsor y la carcasa de la bomba (Figura 1). Un estudio anterior investigó la centrífuga MagLevbombas y mostró la tensión mecánica menor en células de ovario de hámster chino (CHO) en comparación con las bombas de diafragma 5 peristáltica y 4 pistones. Además, los análisis de hemólisis no revelaron trauma sangre y trombo formación significativa sobre un rango de condiciones de operación utilizando estas bombas 8-11. Los resultados demuestran que el uso de estas bombas diseñadas específicamente se aplica menos estrés mecánico sobre los sistemas biológicos en comparación con las bombas peristálticas y el diafragma. Para investigar la tensión mecánica con un gasto limitado experimental, un sistema modelo de emulsión de aceite-agua se recomienda debido a su costo (aproximadamente 99,8%) y (ca. 99,5%) la aplicación de tiempo reducido en comparación con los sistemas de cultivo de células biológicas.
Como gota de ruptura del sistema de emulsión de aceite-agua es una función de la tensión mecánica, la caída de tamaños deben ser contados en el tiempo experimental de las investigaciones de estrés de cizallamiento. Muchas de las técnicas para el dimensionamiento gotas están disponibles, which se puede dividir en sonido, láser y técnicas de foto base 12. En particular, el uso de la sonda en línea endoscopia foto-óptico muestra tamaños de gota casi idénticos para las detecciones manuales y automáticas (desviación estándar por debajo de 10%) y permite una detección de 250 gotas por minuto 13. Debido a su exactitud y fiabilidad, la técnica endoscopio ha demostrado ser una técnica de medición estándar eficaz para distribuciones de tamaño de gota en dispersiones líquido / líquido cuando se compara con otras sondas comúnmente utilizados (por ejemplo, fibra óptica adelante-atrás-ratio (FBR) sensor , método de haz enfocado de reflectancia (FBRM) y la técnica de medición de reflectancia óptica de dos dimensiones (2D-ORM)) 12,14. Por otra parte, la adecuación de la endoscopia en línea para la medición de tamaños de gota en un recipiente agitado se ha demostrado varias veces en las investigaciones anteriores 15-18.
Basado en un estudio previo 6, este protocolo describeel uso de la endoscopia en línea para determinar tamaños de gota (diámetro medio Sauter) de un sistema de emulsión de aceite-agua en las bombas. El diámetro medio Sauter fue utilizado como un criterio de comparación con el fin de estimar el esfuerzo mecánico de los multi-uso (MU) bombas centrífugas MagLev, un peristáltica y un solo uso (SU) 4-pistón de la bomba de diafragma.
Figura 1. levitación magnética del sistema de bomba centrífuga. (A) El principio de un motor sin cojinetes y (B) la PuraLev 200mu se muestran como un ejemplo. Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Las investigaciones se realizaron con una configuración de bomba de tubería (Figu re 2), que permite a los experimentos de tensión mecánica en las tasas de flujo de hasta 60 L min -1 y caídas de presión hasta 2 bar a realizar. Como se muestra en la Fig u ra 2, la configuración experimental se compone de el recipiente de almacenamiento, el circuito de la bomba, y el equipo para la técnica de endoscopia en línea. El impulsor del recipiente de almacenamiento sólo se utiliza para mezclar el tensioactivo. Elementos periféricos se integraron en el circuito cerrado para monitorear el caudal V y caída de presión p en diferentes ajustes de la bomba. Las investigaciones se variaron con la válvula de mano-rueda.
1. Configuración Experimental
2. Medición y Análisis de Imágenes
Figura 2. Montaje experimental circuito de la bomba para la configuración de la bomba por tubería utilizando la endoscopia en línea como la técnica de medición:. (1) recipiente de almacenamiento, (2) Puerto jeringa, (3) de la bomba, (4) el sensor de presión, (5) sensor de flujo, ( 6) estroboscopio, (7) ordenador con el software proporcionado por el fabricante, y (8) de la sonda endoscopio. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Evaluación óptica
Fig u ra 3 muestra las imágenes de reconocimiento de las partículas después de un tiempo de bombeo de 1 hr. Los superiores cuatro imágenes muestran las gotas antes del reconocimiento y las cuatro imágenes inferiores muestran las gotas marcadas por el software de reconocimiento. Las gotas detectados aparecen resaltados con un borde verde. Comparando las imágenes superior e inferior muestra que los bordes de la gota se detectaron precisamente por el software de reconocimiento de imágenes. Las imágenes de la izquierda muestran la distribución de la gota para la centrífuga MagLev bombas PuraLev 200mu y PuraLev 600MU, y los de la derecha muestran el diafragma de 4 pistones y la bomba peristáltica. Una evaluación óptica permite una clasificación inicial de la tensión mecánica en el sistema modelo de emulsión. Esto reveló que tamaños de gota más grandes y gota cuenta inferiores fueron generadas por las bombas centrífugas MagLev comparación con el diaphr 4 pistonesbomba de agm y peristáltica. En consecuencia, las bombas centrífugas MagLev, especialmente el PuraLev 200mu, mostraron una reducción rotura gota, indicando tensiones mecánicas inferiores.
Figura 3. Imágenes de la endoscopia en línea. Emulsión gotas antes (A, B, C, D) y después (E, F, G, H) el reconocimiento de las partículas después de 1 hora de bombear usando (A, E) el PuraLev 200mu, ( B, F) el PuraLev 600MU, (C, G) la bomba de diafragma de 4 pistones, y (D, H) de la bomba peristáltica en condiciones de funcionamiento idénticas (3,4 L min -1 y 0,03 bar). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta cifra.
Me Sauterun diámetro
Investigaciones posteriores revelaron desviaciones estándar por debajo d 32 ± 0,4 micras y garantiza resultados reproducibles utilizando inline endoscopia 19. Por lo tanto, múltiples investigaciones no eran necesarios para este enfoque, que reduce adicionalmente el gasto experimental.
Con el fin de expresar el tamaño de la gota, el diámetro medio Sauter d 32 (ver Ec. 1) se utilizó como el diámetro representante de gotas en la emulsión aceite-agua para este enfoque. En general, el diámetro medio Sauter disminuyó con el tiempo para todos los tipos de bombas y ajustes de la bomba hasta alcanzar el estado de equilibrio 12. Las investigaciones en este estudio confirmaron la progresión del diámetro medio Sauter (Fig u re 4A a D), curvas de la PuraLev 200mu (Fig u RE &# 160; 4A) y la bomba peristáltica (fig u re 4D) están discutiendo ejemplarmente en este protocolo.
En contraste con la PuraLev 200mu, el medio Sauter diámetros eran hasta 40% más pequeño para la bomba peristáltica a las mismas condiciones de operación (caudal = 3,4 L min -1; caída de presión = 0,03 bar). Como consecuencia de ello, las tensiones mecánicas superiores resultaron en un aumento de la ruptura de la gota y tamaños de gota, por lo tanto de menor tamaño. Además, el diámetro de Sauter media disminuyó con el aumento de la caída de presión en el PuraLev 200mu (Fig u re 4A), lo que indica la dependencia del tamaño de la gota en caída de presión. En contraste, la bomba peristáltica mostró un diámetro medio Sauter de 32,60min d = 10 micras, con el final del experimento para todos los parámetros del proceso (Figu re 4D). Por lo tanto, el diámetro medio Sauter se encontró que era independiente de la caída de presión. Sin embargo, los resultados reflejan la comprensión física de la ruptura caída: de mayor tensión mecánica, se determinaron Sauter diámetros medios más pequeños (véase también la Fig u ra 5).
Para cada punto de medición, al menos 300 gotas se determinaron con el fin de garantizar la seguridad estadística. La desviación estándar máxima disminuyó por PuraLev 200mu de d 32,4min ± 42 micras y para el PuraLev 600MU de d 32,6min ± 21 micras a aproximadamente 32 d ± 0,5 micras, con el final del proceso de bombeo. La desviación estándar de la disminución se debió a una mayor distribución del tamaño de gota homogénea hasta que se alcanzó el estado de equilibrio. En comparación to las bombas centrífugas MagLev, las bombas de diafragma peristálticos y 4 pistones revelaron desviaciones estándar por debajo d 32 ± 10 micras.
(1)
Figura 4. perfiles típicos de Sauter significan diámetros d 32 con el tiempo y la determinación de los diámetros medios medidos Sauter d 32, m. Comparación de Sauter diámetros medios d 32 (A) para el PuraLev 200mu, (B) para el PuraLev 600MU, (C) para la bomba de diafragma 4-pistón, y (D) para la bomba peristáltica. Los diámetros medios Sauter D 32 se determinaron con un caudal de 3,4 L min -1 y caídas de presión que van desde 0,03 hasta 0,61 bar.La medida Sauter diámetro medio d 32, se calculó m para los últimos 10 minutos (límite). La desviación estándar resultante de los diámetros medios Sauter d 32 (N ≥ 300) se muestra. Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Sauter diámetro medio medido como un sistema de comparación
Como se describió anteriormente, el diámetro medio Sauter disminuyó con el tiempo hasta que los tamaños de gota alcanzaron el estado estacionario. En el último 10 min del tiempo experimental, el valor medio de la Sauter diámetro medio se calculó para determinar el diámetro medido Sauter, que se utilizó como criterio de comparación de medias (ver límite de la Fig u ra 4A-D). Los diámetros medios medidos Sauter d 32, m se muestran para una velocidad de flujo de 3,4 L &# 160; min -1 y una caída de presión rango 0,03-0,61 bar en la Fig u ra 5. Más grandes medidos Sauter diámetros medios se determinaron para ambas bombas centrífugas MagLev (200mu y 600MU) y la bomba de diafragma 4-pistón en menores caídas de presión y las velocidades del impulsor. La bomba peristáltica reveló mide medio Sauter diámetros de d 32, m = 10 m para todos los parámetros del proceso. Como se mencionó anteriormente, las fuerzas de cizallamiento fueron independientes de la caída de presión para la bomba peristáltica.
Los Sauter diámetros medios medidos más grande de d 32, m = 36 micras para el PuraLev 200mu yd 32, m = 34 micras para el PuraLev 600MU se obtuvieron a una caída de presión de 0,03 bar. En comparación con sus homólogos, el MagLev bomba centrífuga serie obtiene hasta un 59% más grande mide medio Sauter diámetros. Estos resultados indica una menor tasa de ruptura de la gota y por lo tanto menor tensión mecánica resultante de la utilización de las bombas centrífugas.
La desviación estándar de la medida medio Sauter diámetros durante el estado estacionario fue inferior al 15%, confirmando de ese modo valores fiables y precisos para los tamaños de gota.
Figura 5. Comparación de las medidas Sauter diámetros medios d 32, m. Medido Sauter diámetros medios de las bombas centrífugas MagLev y sus contrapartes en el 3,4 L min -1 y presión gotas de 0,03, 0,30 y 0,61 bar. Las desviaciones estándar resultantes de los Sauter diámetros medios medidos d 32, m durante el estado estacionario se muestran.
Abreviaturas Please clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
2D-ORM | medición de reflectancia óptica bidimensional |
CCD | dispositivo de carga acoplada |
CHO | Ovario de hámster chino |
cmc | concentración micelar crítica |
FBR | adelante-atrás-relación |
FBRM | método de reflectancia haz enfocado |
MU | multiuso |
SU | de un solo uso |
Nomenclatura
![]() | [M 3 s -1] | velocidad de flujo |
c | [M 3 m -3] | concentración |
d 32 | [M] | Diámetro medio de Sauter |
d 32, m | [M] | Sauter diámetro medio medido |
d s | [M] | diámetro de la superficie |
d v | [M] | diámetro de volumen |
F | [Hz] | frecuencia |
n | [S-1] | velocidad del impulsor |
N | [-] | número de gotas |
p | Papá | Presión |
t | segundo | hora |
β | [kg m -3] | concentración de masa |
ρ | [kg m -3] | densidad |
69; | [M 3 m -3] | fracción de masa |
Tabla 1. Tabla de abreviaturas y nomenclatura.
El objetivo de este protocolo es demostrar la idoneidad de la técnica de endoscopia en línea para las mediciones de tamaño de gota en los procesos de bombeo. Para este propósito, la caída de tamaños de un sistema de emulsión de aceite-agua se determinaron y un diámetro medio Sauter medido se calculó para caracterizar la tensión mecánica de la centrífuga MagLev bombas, así como sus homólogos, un peristáltica y una bomba de diafragma 4-pistón. Los resultados mostraron baja variación de la medida medio Sauter diámetros, los cuales fueron cuantificados por desviaciones estándar por debajo de 15%, lo que indica que los tamaños de gota se han medido de forma fiable y precisa. Como consecuencia, el diámetro medio de Sauter medido con éxito podría ser utilizado como un criterio de comparación para evaluar la tensión mecánica de las bombas investigados. Las bombas centrífugas MagLev revelaron mayores medidos Sauter diámetros medios, indicando tensiones mecánicas más bajas en las gotas de emulsión en comparación con las bombas de diafragma peristálticos y 4 pistones. En StudIES hasta la fecha, la endoscopia inline se ha demostrado ser una técnica robusta y simple para la medición del tamaño de gota fiable 1,6,12-14,20-21, que también fue confirmado por este estudio. En comparación con las técnicas de medición alternativos, tales como el sensor de FBR de fibra óptica, la FBRM y la técnica 2D-ORM, la técnica endoscopio se pueden utilizar como el método estándar para la obtención de datos precisos en aplicaciones de líquido / líquido 12,14.
El fácil manejo de la endoscopia en línea y de la simple producción del sistema de emulsión de aceite-agua no biológica permite un procedimiento claro para detecciones tamaño de gota de acuerdo con el texto del protocolo (véase más arriba). Sin embargo, se debe mencionar que la posición de la sonda endoscopio depende del flujo de fluido en el recipiente de almacenamiento. Otras investigaciones (datos no mostrados) han revelado que la lente de la sonda debe estar situado directamente debajo del tubo de entrada para caudales más bajos hasta 5 L min -1a fin de evitar una detección múltiple de una gota 19. Para imágenes nítidas a velocidades de flujo más de 5 L min -1, se recomienda colocar la sonda al menos 10 cm del tubo de entrada. Independiente de los parámetros del proceso, el titular de la endoscopia en línea debe ser estable a fin de evitar un desplazamiento de la sonda, lo que puede dar lugar a imágenes borrosas.
Además, particularmente Cabe señalar que el tamaño de la gota detectada es cercana al límite inferior de detección del sistema de foto-óptico aplicada, donde el diámetro mínimo gota detectable es 6,5 m. A medida que el software proporcionado por el fabricante se ha mejorado, las técnicas de endoscopia en línea pueden detectar de manera fiable un tamaño de gota mínima de 1 m. Por otra parte, el tratamiento de la imagen se seguirá desarrollando para permitir el monitoreo en línea de aplicaciones industriales.
Aunque el presente estudio se centró en relativamente bajas tasas de flujo de hasta 3,4 L 60; min -1, los estudios futuros deben considerar una amplia gama de condiciones de operación. Las primeras investigaciones se han llevado a cabo a velocidades de flujo de hasta 20 L min -1 (datos no mostrados). Sin embargo, una dilución 1: 2 (c surfactante = 0,09 ml L-1, c = 0,64 ml de aceite L -1) del sistema de emulsión de aceite-agua se recomienda a caudales de más de 10 L min -1 19, como una mayor ruptura gota causado por el aumento de la tensión mecánica de lo contrario afectará caer la detección y reducir el número de gotas detectadas. Las pruebas se llevaron a cabo con una dilución 1: 2 y se comparan con los resultados de un sistema de emulsión de aceite-agua sin diluir. Para ambos enfoques, el medio Sauter diámetros han sido medidos con fiabilidad (desviación estándar por debajo de 5%). Por lo tanto, la fracción de volumen reducido (dilución 1: 2) no influyó en la medida medio Sauter diámetros, y por lo tanto una ruptura gota-gota era insignificante.
nt "> Estos potentes enfoques experimentales proporcionan una buena base para la mejora de la técnica de endoscopia, así como el software de adquisición de imágenes, el reconocimiento y el resultado analizador relacionada. Además, la idoneidad de la técnica de endoscopia para clasificar tipos de bombas y series de acuerdo a su mecánico estrés fue demostrado con éxito. Los resultados obtenidos son esenciales para el desarrollo del diseño de la bomba y la optimización de bombas para reducir el daño celular.Wolfgang Dornfeld y Reto Schöb son empleados de Levitronix, Ltd., fabricante de las bombas centrífugas MagLev.
Los autores desean agradecer a la Comisión de Tecnología e Innovación (CTI, Suiza) por su apoyo financiero (núm 13.236,1 PFFLI-LS).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
CCD camera | Allied Vision Technologies GmbH | GX2750 | Equipment for inline endoscopy |
C-Flex Biopharmaceutical Tubing | Saint-Gobain Performance Plastics | 374-375-4 | Tube Select a tubing length of about 45 cm before the pump. |
C-Flex Biopharmaceutical Tubing | Saint-Gobain Performance Plastics | 374-375-3 | Tube Select a tubing length of about 45 cm after the pump and clamp on the flow sensor to this tubing. |
CLAVE Connector | Victus | 011-C2000 | Sampling port |
Controller LPC-200.1-02 | Levitronix GmbH | 100-30030 | PuraLev 200MU controller |
Controller LPC-600.1-02 | Levitronix GmbH | 100-30033 | PuraLev 600MU controller |
LeviFlow Clamp-On Sensor LFSC-12 | Levitronix GmbH | 100-30329 | Flow sensor for flow rates below 5 L min-1 |
LeviFlow Converter LFC-1C-CS | Levitronix GmbH | 100-30328 | Flow sensor output device |
Masterflex I/P Easy Load | Fisher Scientific AG | EW-77963-10 | Peristaltic pump |
Mitos free flow valve | Parker Hannifin Europe Sàrl | FFLQR16S6S6AM | Valve |
Mobil Eal Arctic | Exxon Mobil Corporation | Mobil EAL Arctic 22 | Oil Prepare the emulsion directly before the experiment. |
Motor | Elektromotorenwerk Brienz AG | 7WAC72N4THTF | Motor for agitator shaft |
Motor BSM-1.4 | Levitronix GmbH | 100-10005 | PuraLev 200MU motor |
Motor LPM-600.4 | Levitronix GmbH | 100-10038 | PuraLev 600MU motor |
Norm-Ject 10 ml Luer Lock | Restek Corporation | 22775 | Syringe |
Pump Head LPP-200.5 | Levitronix GmbH | 100-90525 | PuraLev 200MU pump head |
Pump Head LPP-600.18 | Levitronix GmbH | 100-90548 | PuraLev 600MU pump head |
Quattroflow 1200-SU | Almatechnik AG | QF 1200 | 4-piston diaphragm pump |
SciPres Sensor | SciLog | 080-695PSX | Pressure sensor |
SciPres Sensor Monitor | SciLog | 080-690 | Pressure sensor output device |
SOPAT-VF Inline Endoscopic Probe | SOPAT GmbH | Inline endoscopy | |
Stroboscope | Drello GmbH & Co KG | Drelloscop 255-01 | Equipment for inline endoscopy |
Triton X-100 | Sigma-Aldrich | X100 | Surfactant Handle with gloves and goggles. (acute toxicity, eye irritation) |
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