Angiografía de la radiografía bidimensional para examinar la estructura Vascular fina usando un compuesto de inyección de caucho de silicona

Resumen

Este estudio presenta un método angiográfico bidimensional simple para examinar estructuras vasculares finas utilizando un silicona caucho inyección compuesto suave tejido y sistema de rayos x.

Resumen

Es una herramienta esencial para el estudio de estructuras vasculares en diversos campos de investigación. El objetivo de este estudio es presentar un método angiográfico simple para examinar la estructura vascular fina de interpretaciones frescas de tejido utilizando un silicona caucho inyección compuesto suave tejido y sistema de rayos x. Este estudio se centra especialmente en territorios de aleta utilizados en cirugía reconstructiva. Este estudio emplea la angiografía con una inyección de caucho de silicona compuesta en distintas condiciones experimentales con ratas Sprague-Dawley. En primer lugar, se mezcla 15 mL de MV compuesto y 15 mL de diluyente. Luego, se prepara 1,5 mL de agente de curado, y un catéter 24G es canulado en la arteria carótida común de la rata. Una llave de tres vías se conecta a un catéter, y el agente radiopaco, después de ser mezclada con el agente endurecedor preparado, se inyecta inmediatamente sin derrames. Finalmente, el agente se solidifica, se recolecta la muestra, como una imagen angiográfica se obtiene mediante un sistema de rayos x suaves del tejido. Este método indica que calidad la angiografía que muestra estructuras vasculares finas puede simplemente y fácilmente obtenerse dentro en un corto periodo de tiempo.

Introducción

Examen de estructuras vasculares tales como las arterias y venas es un área importante de interés, particularmente en cirugía reconstructiva. En este campo, se realiza cirugía de colgajo. Por lo tanto, la proyección de imagen angiográfica activamente se utiliza para estudiar el territorio de la aleta, angiosome y fuente vascular de tejido fresco¹. En concreto, ha habido esfuerzos continuos para observar la vasculatura fina, incluyendo vasos finos como perforadores (vasos de los vasos profundos alcanzando la piel) y estrangulación de vasos (vasos entre angiosomes adyacente de conexión)² . Estos dos tipos de vasos son importantes en el campo de reconstrucción colgajo de perforantes y son el foco principal de la investigación^3,4.

Diversos materiales se utilizan en la angiografía. En primer lugar, hay tinta de la India, que es útil en la observación de la anatomía macroscópica de los vasos sanguíneos. Sin embargo, es radiotransparente, para que no se pueden obtener imágenes angiográficas. Los materiales radiopacos más utilizados son el óxido de plomo y bario. Sin embargo, la toxicidad es un inconveniente crucial de óxido de plomo, y es incómodo de usar cuando se mezcla con agua debido a su forma en polvo. Bario está libre de toxicidad; sin embargo, no es muy factible, ya que debe ser utilizado después de la dilusión. Ambos de estos materiales radiopacos no pueden cruzar los capilares; por lo tanto, si una estructura vascular todo debe ser analizada, es necesario inyectar en la arteria y vena por separado⁵. Además, los dos materiales causan fugas de tinte durante la disección anatómica, por lo que se debe combinar con gelatina. Plomo óxido-gelatina y gelatina de bario mezclas toman al menos un día para solidificar^1,6,7.

La angiografía de la tomografía computada (CT) es otro método ampliamente utilizado y puede ayudar en la visualización de estructuras tridimensionales (3D)⁸. Sin embargo, las venas no se puede visualizar con eficacia⁵. En esta modalidad, clara visualización de la vasculatura fina como venas de estrangulación es difícil, excepto cuando se utilizan equipos específicos. La necesidad de equipo más costoso puede ser una desventaja, por lo que la angiografía de CT no puede utilizarse en todos los laboratorios. Por el contrario, el tejido blando sistema de rayos x es relativamente barato y puede operar con más facilidad. Este sistema es óptimo para la visualización de los tejidos blandos y puede proporcionar imágenes de tejidos blandos de mayor calidad que el sistema de rayos x simple. Aunque el tejido blando sistema de rayos x sí mismo no puede mostrar imágenes en 3D, puede ayudar a visualizar más claramente que la angiografía CT estructuras vasculares finas. Por lo tanto, hemos utilizado el sistema de rayos x suaves del tejido en muchos experimentos, especialmente en varios modelos de aleta y Anatomía básica^2,9.

Por último, el uso de angiografía compuesto de inyección de caucho de silicona tiene muchas ventajas. Porque se preparan varios agentes de color, se puede inyectar y pantalla de colores distinguibles como tinta de la India. Por lo tanto, es posible estudiar simultáneamente la anatomía macroscópica y la angiografía. Puede tanto pasar a través de los capilares y permite las venas ser visualizados, haciendo exámenes de estructuras vasculares finos posible. A diferencia de la mezcla de gelatina, la inyección de caucho de silicona compuesta solidifica dentro de un corto período de tiempo, aproximadamente 15 minutos, sin ningún procedimiento adicional. Todo el proceso se resume en la imagen esquemática en la figura 1.

Protocolo

Todos los procedimientos, incluyendo temas de animales, han sido aprobados por el cuidado institucional de animales y uso comités de Seúl Universidad Hospital Nacional (IACUC Nº 10-0184). Este protocolo está optimizado para la investigación sobre la vasculatura de la aleta. En este ejemplo se basa en un modelo de cuatro-territorio aleta en nuestros informes anteriores.

1. el establecimiento de una condición de aleta

Nota: Es importante generar un cambio vascular en un modelo de ratas aleta 4 a 5 días antes de la estimación visible^6,7.

1. Utilice 7 semanas de edad hombres ratas Sprague-Dawley con 200-250 g de peso.
2. Anestesiar las ratas con isoflurano en 3-5% para la inducción y 2-2.5% para el mantenimiento. Pruebe el dedo pizca retiro reflejo para confirmar que la profundidad de la anestesia es suficiente.  Inyecte 5mg de meloxicam/kg por vía subcutánea para aliviar el dolor.
3. Afeitado del tronco utilizando un cortador de pelo y crema depilatoria (tioglicólico, ácido 80%). Preparar un campo quirúrgico estéril con povidona-yodo al 10% y un paño estéril para mantener una condición estéril durante los procedimientos. Aplicar un ungüento veterinario en los ojos para evitar la sequedad. Mantener todos los instrumentos en condiciones estériles.
4. Establecer la adecuada la condición de la aleta.
   1. La marca un diseño de aleta circunferencial de la piel de la parte inferior del abdomen en la parte posterior, mide 4 x 12 cm. Ubique el centro de la aleta a mitad de camino entre el proceso xiphoid y el pene (figura 1).
   2. Hacer la incisión como marcado usando una cuchilla quirúrgica.
   3. Disecar el colgajo con unas tijeras, incluyendo la piel y el panniculus carnosus.
   4. Diseccionar alrededor del pedicle vascular [bilateral profunda circunfleja ilíaca (DCI) los vasos y vasos epigástricos inferiores superficiales bilaterales (SIE)] en la parte inferior del abdomen y exponer el pedículo vascular utilizando una lupa quirúrgica e instrumentos de microcirugía.
   5. Mantener o ligar los vasos dependiendo de las condiciones deseadas.
   6. Dividir la aleta a lo largo de la línea media dorsal con una cuchilla quirúrgica o tijeras.
   7. Coloque la tapa en su posición original y fijar con una grapadora de la piel.
   8. Aplicar una pomada tópica de la herida quirúrgica por 3 días y proporcionar analgesia postoperatoria mediante la administración de meloxicam en dosis de 5 mg/kg por vía oral una vez al día durante 3 días.
   9. Confirmar que la rata recupera la conciencia suficiente para mantener el recumbency esternal. Volver a la rata en la jaula y mover al área de vivienda. Aplicar un isabelino collar a cada rata.

2. preparación de los instrumentos

1. Preparar un catéter 24G y una llave de tres vías.
2. Preparar pinzas de mosquito, tijeras pequeñas, un bisturí y una cuchilla quirúrgica.
3. Preparar al agente angiográfico (inyección de silicona de caucho compuesto).
   1. Mezclar al agente de color compuesto con el diluyente en la colección de muestras estériles. Asegurar una cantidad igual en peso: 15 mL de agente de color compuesto y 15 mL de diluyente de MV en una rata (rata Sprague-Dawley, 200-250 g).
   2. Agregue el agente endurecedor por 5% en peso o volumen de la solución de la mezcla inmediatamente antes de la inyección: 1,5 mL de agente en una rata (rata Sprague-Dawley, 200-250 g) de curado.

3. rata arteria preparación

1. Uso de isoflurano para anestesiar las ratas (3-5% para la inducción) y 2-2.5% para el mantenimiento. Pruebe el dedo pizca retiro reflejo para confirmar que la profundidad de la anestesia es suficiente.
2. Afeite el cuello utilizando una cortadora de pelo y crema depilatoria (tioglicólico, ácido 80%).
3. Exponer la arteria carótida común¹⁰.
   1. Haga una incisión de 2 cm de la línea media entre los omóplatos.
   2. Analizar más profundamente utilizando fórceps del mosquito y blunt tijeras hasta que quede expuesto el complejo de la glándula salival.
   3. Retraer la glándula salival y sin rodeos disecar el músculo omohioideo longitudinalmente.
   4. Disección en la arteria carótida común.
4. Enganchar las partes cefálicas y caudales de la arteria carótida común con seda negra y fijarla.
   1. Hacer un lazo de sutura proximal y mantener la tracción para mantener la hinchazón de los senos de la arteria.
   2. Preparar una sutura de seda en la parte caudal para la fijación del catéter 24G.

4. canulación

1. Canule la arteria carótida preparada usando un catéter 24G.
2. Apriete el lazo hecho de antemano en la parte caudal y tenga cuidado de no retirar el catéter durante la inyección.
3. Preparar al agente endurecedor (paso 1.3.2).
4. Conectar la llave de tres vías firmemente el catéter insertado.
   1. Confirman sangre regurgitada en el catéter mediante la adición de presión negativa usando una jeringuilla vacía.

5. inyección

1. Inyectar la inyección de caucho de silicona compuesta hasta que ha cambiado el color del ojo y pie.
   Nota: El cambio de color debe aparecer como el progresa fluido inyectado (cantidad de la inyección es aproximadamente 25-30 mL para cada rata).
2. Cerrar la llave de tres vías y espere hasta que el agente se solidifica.
   1. Tenga cuidado de no contaminar con el agente, especialmente al retirar la jeringa de la llave de tres vías. Usar una barrera protectora como gasa o vinilo para separar el espacio de la inyección de su entorno.
      PRECAUCIÓN: Cualquier tipo de contaminación es difícil analizar la imagen angiográfica porque el compuesto es radio-opaco.
   2. Confirman el cese de los latidos del corazón y la respiración. Detener la anestesia.
   3. Observar el tipo de dureza con el agente restante como referencia (aproximadamente 15 min necesitada).

6. recolección de la muestra

1. Hacer una incisión con una cuchilla quirúrgica para el panniculus carnosus 1 cm fuera de la tapa para evitar daños a alguna estructura vascular dentro de la solapa.
2. Disecar el plano previamente disecada de paso 1.4 (en el plano de panniculus carnosus) y cosechar el tejido entre la aleta y el pedículo vascular con unas tijeras (la estructura vascular está incluida en la solapa).
3. Ligar el pedículo del colgajo mediante una sutura de seda 5-0 y separar la tapa del cuerpo. Tenga cuidado de no dañar la estructura vascular.

7. captura de la imagen angiográfica

1. Extiende la muestra, garantizando que no doble y Coloque suavemente en el paño quirúrgico usando fórceps.
2. Tomar una imagen de radiografía.
   1. Transferir a la muestra en el cassette de película en la muestra espacio.
   2. Establecer el sistema de rayos x de tejido suave a 60 kVp, 5 mA y la exposición de s 5.
3. Desarrollar la película en un cuarto oscuro usando una máquina de desarrollo automático.
4. Analizar la película en la resolución más alta posible.

8. Análisis de la imagen^6,7,11

1. Distinguir las arterias y venas basadas en la continuidad de flujo y diámetro.
   1. Partir de la entrada de la arteria del pedículo y el enfoque sobre el buque objetivo siendo examinado.
   2. Medir los diámetros con el software con la primera apertura de la imagen.
      1. Haga clic en el botón derecho y trace una línea en la barra de escala que tiene la misma longitud.
      2. Abierta la analizar | Establecer la escala menú e introduzca el valor de la barra de escala en conoce a distancia.
      3. Haga clic en el botón derecho y trace una línea sobre el recipiente de que diámetro debe medirse.
      4. Abierta la analizar | Medida menú y confirmar la longitud.
2. Analizar el patrón vascular, teniendo en cuenta la zona de supervivencia de la aleta.

Resultados

Siguiendo este protocolo, se examinó la vascularización del colgajo de la rata Sprague-Dawley. Una aleta circunferencial de la piel de la parte inferior del abdomen en la parte posterior que mide 4 x 12 cm fue marcada basada en nuestros informes anteriores. Cada muestra fue en una diversa condición vascular.

Todas las aletas fueron elevadas basan en la arteria ilíaca circunfleja profunda (DCIA) y la vena y luego sobrealiment...

Discusión

Inyección de caucho de silicona compuesta angiografía se puede realizar fácilmente, no requiere de equipo costoso y ofrece muchas ventajas. En contraste con las evaluaciones preoperatorias e intraoperatorias de los pacientes, experimentos con animales y cadáveres pueden proporcionar información sobre condiciones específicas, que permiten estudios más diversos y en profundidad. El modelo de aleta con ratas es particularmente valioso para los clínicos porque se observan cambios en varios contextos antes de aplicaci...

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-112	White color agent
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-117	Orange color agent
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-120	Blue color agent
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-122	Yellow color agent
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-130	Red color agent
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-132	Clear agent
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-Diluent	Diluent
MICROFIL CP-101 For Cast Corrosion Preparations	Flow Tech Inc.	CP-101	Curing agent
SOFTEX X-ray film photographing inspection equipment	SOFTEX	CMB-2	Soft tissue x-ray system
Film	Fujifilm	Industrial X-ray Film (FR 12x16.5cm)
Automatic Development Machine	Fujifilm	FPM 2800
Rat			Sprague-Dawley rat weighing 200-250 g
Three-way stopcock
24-guage catheter
Image J	National Institutes of Health		https://imagej.nih.gov/ij/