Fabricación de matriz de bazo descelularizada derivada de ratas

Resumen

La matriz de bazo descelularizada (DSM) tiene aplicaciones prometedoras en el campo de la ingeniería de tejidos hepáticos. Este protocolo describe el procedimiento para preparar el DSM de rata, que incluye la recolección de bazo de rata, la descelularización de los mismos mediante perfusión y la evaluación del DSM resultante para confirmar sus características.

Resumen

El trasplante de hígado es el tratamiento primario para la enfermedad hepática en etapa terminal. Sin embargo, la escasez y la calidad inadecuada de los órganos de los donantes hacen necesario el desarrollo de terapias alternativas. Los hígados bioartificiales (BAL) que utilizan matriz hepática descelularizada (DLM) han surgido como soluciones prometedoras. Sin embargo, el abastecimiento de DLM adecuados sigue siendo un reto. Se ha explorado el uso de una matriz de bazo descelularizada (DSM) como base para las LBA, ofreciendo una alternativa fácilmente disponible. En este estudio, se recolectaron bazos de rata y se descelularizaron utilizando una combinación de ciclos de congelación-descongelación y perfusión con reactivos de descelularización. El protocolo preservó las microestructuras y componentes de la matriz extracelular (MEC) dentro del DSM. El proceso completo de descelularización duró aproximadamente 11 h, lo que dio como resultado un ECM intacto dentro del DSM. El análisis histológico confirmó la eliminación de componentes celulares conservando la estructura y composición de la MEC. El protocolo presentado proporciona un método integral para la obtención de DSM, ofreciendo aplicaciones potenciales en ingeniería de tejido hepático y terapia celular. Estos hallazgos contribuyen al desarrollo de enfoques alternativos para el tratamiento de la enfermedad hepática en etapa terminal.

Introducción

El trasplante hepático sigue siendo el único tratamiento definitivo para la enfermedad hepática terminal ^1,2,3. Sin embargo, la escasez crítica y la disminución de la calidad de los órganos de los donantes han aumentado la necesidad de tratamientos alternativos⁴. En el ámbito de la medicina regenerativa, los hígados bioartificiales (BAL) que utilizan matriz hepática descelularizada (DLM) han surgido como soluciones prometedoras ^5,6,7. El DLM conserva la estruc....

Protocolo

Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética de los Experimentos con Animales de la Universidad de Xi'an Jiaotong y se llevó a cabo de acuerdo con las directrices para el cuidado y uso de animales de laboratorio.

1. Recolección de bazo

1. Utilice ratas Sprague Dawley macho que pesen entre 250 y 280 g. Aloje a las ratas en habitaciones con temperatura y humedad controladas, y bríndeles comida y agua ad libitum, excepto en ayunas antes de la cirugía.
2. Inyectar buprenorfina por vía subcutánea (0,05 mL/kg) como analgésico 1 h antes de la operación. Anestesiar a la rata por inhalación de isoflurano. ....

Discusión

Los LBA representan un enfoque eficaz para el tratamiento de la enfermedad hepática terminal, especialmente en los casos en que el trasplante hepático se ve obstaculizado por la escasez actual de órganos de donantes⁶. Una opción prometedora para la creación de BAL es la utilización de DLM, que preserva la MEC natural y la estructura vascular del hígado nativo. Sin embargo, la escasez de DLM humana y los riesgos potenciales de infección e inmunogenicidad asociados con la DLM animal plantean.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia Machine	Harvard Apparatus	tabletop	animal anesthesia
bubble trap	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.	pore diameter: 5 μm	prevent air bubbles
Buprenorphine	TIPR Pharmaceutical Responsible Co.,Ltd		an analgesic
Hemostatic Forceps	Shanghai Medical Instruments  Co., Ltd	J31020	surgical tool
Heparinized Saline	SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co., LTD		prevent the formation of thrombosis
Isoflurane	RWD life Science Co.		anesthetic:for the induction and maintenanceof anesthesia
Penicillin-Streptomycin	Beyotime Biotechnology Co., Ltd.	C0222	antibiotics in vitro to prevent microbial contamination
Peristaltic Pump	Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.	BT100-1L
Phosphate-Buffered Saline	Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.	4481228	phosphoric acid buffer salt solution
Silicone Tube	Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.	2.4×0.8mm
Silk Suture	Yangzhou Jinhuan Medical Instrument Factory	6-0 and 3-0	ligate blood vessels
Sodium Dodecyl Sulfate	Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.	151-21-3	ionic detergent, dissolves both cell and nuclear membranes
Syringe Pump	Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd	BeneFusion SP5	intravenous infusion
Triton X-100	Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.	9002-93-1	non-ionic detergent, disrupts lipid-lipid, lipid-protein, and DNA-protein interactions
Venous Catheter	B. Braun Company	24G	inserting the spleen artery