Para empezar, tritura los materiales medicinales Pheretima, Periplaneta americana e Hirudo con un molinillo de hierbas. Tamizar el polvo medicinal a través de tamices de medicamentos estándar del número dos y el número cuatro. Recoja el polvo entre los dos tamices para obtener el polvo de muestra requerido.
Tome un gramo del polvo en un tubo de centrífuga de plástico de 50 mililitros. Añadir 20 mililitros de solución de ácido tricloroacético al 5% y homogeneizar a 1.000 RPM durante un minuto con un homogeneizador de dispersión de alta velocidad. Después de la homogeneización, centrifugar el homogeneizado a 1.717 G durante cinco minutos a temperatura ambiente y filtrar el sobrenadante a través de un embudo de vidrio absorbente sumergido en algodón en un matraz aforado de 50 mililitros.
Después de repetir el proceso de extracción dos veces con 15 y 10 mililitros de solución de ácido tricloroacético al 5%, combine los filtrados y aumente el volumen a 50 mililitros con una solución de ácido tricloroacético al 5%. A continuación, agregue con precisión dos mililitros de solución de hidróxido de sodio y 0,5 gramos de parafina sólida en viales de 20 mililitros de espacio de cabeza. Luego colócalos en un horno a 70 grados centígrados durante unos 30 minutos.
Saca los viales y déjalos enfriar a temperatura ambiente para que la parafina se solidifique. Para procesar el espacio de cabeza de la muestra, agregue dos mililitros de cada solución de extracción de muestra a los viales que contienen parafina solidificada. Presione la tapa y selle el vial.
Coloque los viales de espacio de cabeza sellados en el GCMS para su medición. Para obtener la curva estándar, aspire una serie de dos mililitros de solución estándar de trimetilamina sobre la capa de parafina solidificada. Coloque los viales de espacio de cabeza sellados en la máquina para la medición de trimetilamina.
Para realizar la prueba de precisión, aspire dos mililitros de 0,1 microgramos por mililitro de solución estándar de trimetilamina sobre la capa de parafina solidificada. Realice seis pruebas paralelas en la máquina siguiendo las instrucciones del fabricante. Para el experimento de la tasa de recuperación, hornee varios lotes del polvo de muestra en un horno hasta que no se detecte trietilamina en GCMS como se demostró anteriormente.
A continuación, tome cada gramo de polvo horneado y fino en tubos de centrífuga de plástico de 50 mililitros separados. Añadir 50 microlitros de solución estándar de trimetilamina a todos los tubos y extraer con una solución de ácido tricloroacético al 5% como se ha demostrado anteriormente. Se encontró que el tiempo de retención de la trimetilamina era de 2,3 minutos con un pico agudo y sin interferencia de otras impurezas.
Las muestras de Pheretima, Periplaneta americana e Hirudo sometidas a pruebas de recuperación con picos de secado para reducir la trietilamina en las hierbas mostraron tasas de recuperación promedio de 84.49, 94.66 y 85.67% respectivamente. Se detectó trietilamina en nueve lotes de hierbas con concentraciones que oscilaron entre 13,23 y 271,63 miligramos por kilogramo.
