Comience agregando 500 microlitros del tampón de lisis al pellet de celda A2780 obtenido previamente, y mezcle suavemente con una punta cortada con un diámetro de apertura mínimo de dos milímetros. Añadir 20 microgramos por mililitro de RNasa recién preparada y mezclar por inversión suave. Incubar a 37 grados centígrados durante 30 minutos.
Al final de la incubación, agregue proteinasa K a una concentración final de 100 microgramos por mililitro e invierta suavemente 10 veces. Incubar de nuevo a 55 grados centígrados durante una hora invirtiendo el tubo cada 10 minutos. Pipetear 500 microlitros de fenol: cloroformo: reactivo de alcohol isoamílico en el tubo e invertir suavemente el tubo unas 20 veces.
Centrifugar a 9, 391 G durante 15 minutos a temperatura ambiente. Pipetear la capa viscosa acuosa superior en un tubo nuevo. Añadir un volumen igual de cloroformo y mezclar mediante una inversión suave.
Después de centrifugar el tubo una vez, recoger la capa acuosa. Agregue una cantidad apropiada de cloruro de sodio de cinco molares en el tubo para aumentar la concentración en 0.2 moles. Agregue dos volúmenes de etanol al 100% en el tubo e invierta suavemente 20 veces.
Centrifugar a 15, 871 G durante cinco minutos a temperatura ambiente. Después de desechar el sobrenadante, agregue 500 microlitros de etanol al 70%. Centrifugar de nuevo en la misma condición y luego desechar el sobrenadante.
Una vez que el pellet esté secado al aire, agregue 50 microlitros de agua estéril libre de nucleasas y deje que se rehidrate. Luego mezcle el ADN pipeteando usando la punta cortada. Utilice la espectrofotometría UV para medir la concentración de ADN.
Después de digerir el ADN, sepárelo usando 0.8% de agarosa. Sumergir el gel de agarosa en solución de ácido clorhídrico molar 0,25 durante 10 minutos a temperatura ambiente con una agitación suave. Luego enjuague el gel dos veces con agua destilada.
Para desnaturalizar el ADN, sumerja el gel en una solución de hidróxido de sodio y cloruro de sodio. Luego enjuague el gel dos veces con agua destilada. Para neutralizar el ADN como se demuestra, sumerja el gel en una solución de ácido clorhídrico molar 0,5 y cloruro de sodio tres molares a pH siete.
El ADN genómico del extractor mostró una buena integridad, lo que indica su uso para el procesamiento posterior de fragmentos de restricción de telómeros.
