Para realizar la criolesión miomérica en pez cebra, utilice una criosonda de acero inoxidable fabricada a medida. Para evitar la congelación mientras manipula la sonda durante el procedimiento, inserte el mango de la sonda en la punta de una pipeta y asegúrela envolviéndola con cinta adhesiva. Antes de comenzar con el procedimiento de criolesión, prepare un vaso de precipitados para la solución de trabajo de anestesia, una cuchara para manipular los peces, una esponja húmeda y un tanque con agua del sistema para la recuperación posterior al procedimiento de los peces.
Prepare la solución madre de anestesia siguiendo los pasos que se muestran en la pantalla. Luego agregue cuatro mililitros de la solución madre preparada a 100 mililitros de agua del sistema en un vaso de precipitados para preparar la solución de trabajo de tricaína. Para comenzar el procedimiento de criolesión, sumerja la sonda en nitrógeno líquido durante un mínimo de tres minutos.
Moje la esponja en agua del sistema y colóquela sobre una superficie plana. Luego, uno o dos minutos después de transferir un solo pez cebra adulto a la solución de trabajo de tricaine, confirme su falta de respuesta tocando el pescado suavemente con la cuchara. Coloque el pescado anestesiado sobre la esponja húmeda.
Localiza el pedúnculo caudal posterior a la aleta anal y anterior a la aleta caudal. En esta etapa, retire la criosonda del nitrógeno líquido. Agite la sonda suavemente para asegurarse de que no quede nitrógeno líquido residual en la punta.
Coloque el borde de la espátula perpendicular al cuerpo sobre el pedúnculo caudal. Mantenga la sonda en esta posición durante seis segundos sin aplicar presión, antes de liberar la criosonda del tejido. Luego transfiera los peces al agua del sistema en el tanque de recuperación.
Controle al pez mientras reanuda la respiración y la natación después de despertarse de la anestesia. Si los movimientos operculares no ocurren después de 30 segundos, estimule a los peces pipeteando agua del sistema en las branquias hasta que el animal inicie la respiración por sí mismo. La grabación de video de peces control y criolesionados un día después de la lesión o DPCI reveló que aunque los peces criolesionados nadaban menos activamente, no mostraban ningún movimiento anormal, como remolinos, circunvolución o equilibrio reducido.
En el sistema de cría, su posición en el tanque y la ingesta de alimentos era similar a la de los peces no heridos. Como se observó a 5 DPCI, el comportamiento normal seguía siendo persistente, lo que indica que el procedimiento de criolesión no afectó gravemente el bienestar de los animales.
