Para comenzar el cultivo celular, prepare el medio de cultivo DMEM y las soluciones necesarias para el cultivo celular. Siembre de 1 x 10 a la 6ª célula HEK293 en una placa de 60 milímetros o una placa de 6 pocillos por condición de tratamiento más control. Al día siguiente, trate las células con enlaces cruzados de ADN y proteínas, o DPC, inductores de elección.
Para inducir las CPD, su ubiquitilación y SUMOilación, se deben recolectar las células a los 20, 60 y 180 minutos, o dos horas en el caso de las CPD no enzimáticas. Para inducir la parilación de TOP1-DPC, pretratar las células con 10 micromolares de poli-ADP-ribosa glicohidrolasa, o PDD00017273 inhibidor de PARG, durante una hora antes de cotratar con 20 micromolares de camptotecina durante 20, 60 y 180 minutos.
