Comience por extirpar al menos 20 testículos de las pupas de mosquitos Anopheles en PBS estériles. Transfiera los testículos a un portaobjetos de microscopio limpio que contenga una gota fresca de PBS. Usando puntas filtradas P1000 o la punta de una aguja de disección, transfiera los testículos a una placa embrionaria que contenga 3.7% de formaldehído en PBST.
Incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente. A continuación, lave los testículos en PBST durante cinco minutos a temperatura ambiente. Transfiera los testículos a la placa de embriones que contiene RNasa A e incube durante media hora a 37 grados centígrados.
Retire la solución de ARN y agregue un mililitro de la solución penetrante. Incubar los testículos en la solución penetrante a temperatura ambiente durante 10 minutos. A continuación, lave los testículos y el PBST dos veces durante cinco minutos cada uno.
Transfiera los testículos a un tubo de 1,5 mililitros que contenga de 20 a 30 microlitros de solución de hibridación con la sonda de ADN marcada. Incubar la mezcla durante la noche a 37 grados centígrados en la oscuridad para permitir la hibridación. Con la ayuda de la punta filtrada AP 1000 de orificio blanco, transfiera los testículos a una placa de embriones, luego lávelos en dos XSSC durante cinco minutos.
Retire el SSC y luego monte los testículos en un portaobjetos de vidrio esmerilado utilizando un medio de montaje disponible comercialmente que contenga DAPI. Selle el portaobjetos con un sellador de cubreobjetos e incube a temperatura ambiente en la oscuridad durante dos horas. Un buen nivel de hibridación permitió la visualización de los cromosomas diana a lo largo de la espermatogénesis.
El emparejamiento de los cromosomas sexuales marcados se pudo ver en las etapas prebiótica y miótica. Las espermátidas portadoras de X o Y podrían seguirse a lo largo de la espermiogénesis marcada por diferentes niveles de condensación del ADN hasta el paso final de los espermatozoides maduros en forma de flecha.
