Comience midiendo la concentración de cardiomiocitos ventriculares de rata neonatal con un hemocitómetro. Diluir la solución de suspensión celular a 3.000 células por mililitro, con alfa MEM que contenga un 10% de FBS inactivado por calor. Distribuya 100 microlitros del cardiomiocitos ventriculares diluidos en cada pocillo de las placas no adhesivas de 96 pocillos de la célula.
Centrifugar las células durante cinco minutos a 100 G. Y cultivarlas durante dos o tres días en la incubadora de cultivos celulares, con un 5% de dióxido de carbono a 37 grados centígrados. Después de la incubación, aspire el medio de cultivo de las bolas de cardiomiocitos de rata sembradas en la placa no adhesiva de 96 pocillos. Luego, transfiera las bolas de cardiomiocitos de cada pocillo a un tubo de 15 mililitros.
Centrifugar las bolas de cardiomiocitos y aspirar el sobrenadante. A continuación, lávalos con un tampón ADS. Para facilitar el seguimiento de las células de cardiomiocitos en la rata después del injerto, tiña las células con PKH26.
Antes de centrifugar las células, realice un seguimiento del desarrollo de las bolas de cardiomiocitos bidim observándolas bajo el microscopio regularmente después de la siembra. Comience a preparar el aparato de inyección principal para una inyección neonatal en bola de cardiomiocitos utilizando una aguja de calibre 29 y 50 milímetros de largo equipada con una jeringa. Conecte una aguja de jeringa de transferencia de potencia de un mililitro de calibre 18 a un tubo delgado de polipropileno con baja capacidad de expansión de lúmenes.
Aspire el agua con una jeringa y retire todas las burbujas de la jeringa y de los tubos conectados. Repítelo para otra aguja de calibre 18. Luego, conecte el otro lado del tubo de transferencia de potencia a la aguja de calibre 18 de la misma jeringa de un mililitro.
Confirme la transición de potencia exitosa empujando un émbolo de jeringa hacia abajo y otro émbolo de jeringa hacia arriba. Una vez hecho esto, coloque la jeringa en una bomba de jeringa. A continuación, configure el sistema de enfriamiento conectando el tubo de cobre bien enrollado a la celda que contiene parte de la jeringa de inyección de celda.
Dejando 10 milímetros de exceso de tubería en ambos extremos. Conecte el tubo de cobre al tubo de plástico flexible antes de conectar los otros extremos del tubo de plástico a una bomba externa. Llene la línea con agua de enfriamiento y sumerja el exceso de tubo de cobre en hielo picado para enfriar el agua.
Este sistema de enfriamiento mantiene la solución de suspensión de celdas en el cilindro a aproximadamente 2 grados centígrados.
