Para comenzar, indique al paciente que ayune durante la noche antes de la recolección de la muestra. Al día siguiente, abra el kit de prueba de cuerdas. Tome la cápsula y mantenga el lazo al final de la cuerda.
Pegue la cuerda en la mejilla del paciente. Luego guíe al paciente para colocar la cápsula en su lengua cerca de la parte posterior de la garganta y tragarla con un sorbo de agua. Después de que la cápsula se haya disuelto en el estómago del paciente durante una hora, indique a un asistente capacitado que saque cuidadosamente la cuerda del paciente.
A continuación, coloque el extremo empapado en el líquido gástrico en una solución de preservación de muestras de EET y corte el extremo inferior de la cuerda. Coloque la muestra etiquetada que lleva los tubos de recolección en un estante de tubos de ensayo y vórtice durante 10 segundos. Gire la placa de 32 pocillos boca abajo varias veces para resuspender las perlas magnéticas, vórtice durante 10 segundos.
Luego retire con cuidado el techo de papel de aluminio de la placa. Transfiera 200 microlitros de líquido gástrico de cada muestra y ADN de Helicobacter pylori como control positivo en los pocillos separados. Coloque la placa de 32 pocillos en la ranura de muestra correspondiente de la máquina extractora de ácidos nucleicos para la extracción automática de ADN, después de la extracción y confirmación del ADN.
Coloque el exceso de líquido gástrico y las muestras de ADN extraídas a menos 20 grados centígrados hasta su uso, descongele la mezcla de reacción de qPCR en hielo y mézclela moviendo y girando para evitar la pérdida de reactivo Para cada muestra en una placa de 32 pocillos, mezcle 20 microlitros de la mezcla de reacción de PCR con cebadores de urea hacia adelante y hacia atrás, una sonda de urea y cinco microlitros del ADN extraído. Coloque la placa en la máquina qPCR y configure el programa termociclador. Ajuste la adquisición de la señal fluorescente a FAM la adquisición de datos, al período de extensión de amplificación y comience la ejecución, al finalizar la reacción.
Guarde los datos para su análisis. Analice los datos con un software especializado para qPCR a medida que el instrumento selecciona automáticamente los umbrales de referencia. Si los resultados de la prueba para h.
pylori son positivos, reemplace el kit de reactivos con reactivos de detección para el gen 23S rRNA y la mutación del gen gyrA en el kit de h. pylori y comience la prueba de resistencia a los medicamentos en la muestra. Este estudio muestra la detección de h.
pylori y su resistencia a antibióticos en el líquido estomacal por qPCR. Entre muestras positivas de H. pylori.
S2 tuvo valores de TC dentro del rango de detección que indican doble resistencia a claritromicina y levofloxacino. Los valores de TC S3 estaban dentro de la detección de infección por H. pylori y resistencia a Levofloxacino, pero no para resistencia a claritromicina, lo que indica resistencia a levofloxacino.
Del mismo modo, S4 tuvo valores detectables de TC para la infección por H. pylori y la resistencia a la claritromicina, pero no para la resistencia a la levofloxacina, lo que sugiere resistencia a la claritromicina. El S5 tenía valores detectables de TC solo para h.
La infección por pylori indica sensibilidad a ambos antibióticos y permite el tratamiento con cualquiera de los medicamentos.
