Para comenzar, obtenga un 80% de células de hepatocitos bovinos cultivadas y reemplace el medio de cultivo con DMEM que contenga ácido linoleico. Incubar las células a 37 grados centígrados en 5% de dióxido de carbono durante 24 horas para acumular los LD. Luego retire el medio de cultivo y lave las células de adherencia con PBS.
Agregue la sonda fluorescente neutra BODIPY en las células e incube en la oscuridad durante 30 minutos. Después de tres lavados PBS, agregue DMEM que contenga ácido linoleico a las células. Coloque la placa de cultivo en la ranura del microscopio de la estación celular viva y encienda el microscopio y la computadora.
Ejecute el software NIS-Elements. Encuentra el campo de visión con un aumento de 4x. Luego ajústelo a 40x, active PFS, vuelva a enfocar y seleccione el campo de visión apropiado.
Para la ejecución de la prueba, establezca la hora y los canales adecuados. A continuación, pulse Ejecutar ahora para disparar las muestras durante un minuto. Para el experimento, en la pestaña Tiempo, establezca el tiempo de intervalo de cinco minutos y la duración del disparo de seis horas, establezca canales fluorescentes y de campo claro, y presione Ejecutar ahora para disparar las muestras.
Luego elija Archivo seguido de Guardar como y formato de archivo de imagen AVI para exportar los datos a un video en formato AVI. Los LD grandes se formaron a través de la fusión de LD pequeños. En los primeros 15 minutos, hubo LD más pequeños.
A partir de los 20 minutos, comenzaron a fusionarse y se fusionaron completamente en LDS más grandes en 35 minutos.
