Comience limpiando suavemente las cáscaras de huevo de los huevos de gallina leghorn blancos fertilizados con toallitas empapadas en etanol sin pelusa. Incubar los huevos hasta el final romo hasta la etapa deseada, generalmente HH20 a 21. Antes de comenzar el procedimiento, prepare el número requerido de nudos atando un nudo simple suelto en una sutura de 1,5 centímetros de largo y 10 ceros.
Asegúrese de que el nudo no esté apretado y que sea lo suficientemente grande como para caber sobre las aurículas. Abra la cáscara del huevo suavemente con el extremo inverso de las pinzas, sosteniendo el huevo firmemente para evitar grietas no deseadas. Abre una ventana desde el extremo romo del huevo y retira las membranas externa e interna.
Use microtijeras para quitar solo la membrana vitelina necesaria. Una vez que el embrión esté libre de la membrana vitelina, coloque la pinza de punta cerrada debajo del segmento dorsal del embrión y gírela suavemente para exponer el lado izquierdo. Retire todas las membranas inmediatamente alrededor de la yema auricular quitando primero las membranas gruesas y luego usando pinzas más finas para eliminar la membrana fina.
Coloque el nudo preparado cerca del embrión. Orientar correctamente el nudo abierto sobre la yema auricular izquierda para ejecutar el apriete del nudo. Con unas microtijeras, corta los extremos de la sutura sobrante lo más cerca posible del cogollo y retira los trozos de sutura sobrantes con unas pinzas.
Finalmente, utilizando unas pinzas cerradas, devuelve el embrión a su posición original. Después de completar la microcirugía, cubra el huevo con una doble capa de param y devuélvalo a la incubadora. Los modelos de ligadura auricular izquierda, o LAL, mostraron que se logró una estructura miocárdica más compacta con cambios morfológicos significativos en comparación con el desarrollo normal.
Se observó depósito de matriz extracelular alrededor del intersticio cardíaco, parecido a la fibrosis miocárdica. Las mediciones morfométricas de porosidad revelaron una cavidad ventricular izquierda más pequeña y compactación trabecular en los modelos LAL. En la HH 25 del modelo LAL se observó un aumento de tamaño de la cavidad ventricular derecha, alteración de la arquitectura trabecular y del volumen miocárdico.
Las imágenes de tomografía de coherencia óptica de los modelos LAL mostraron una reducción significativa en el tamaño y el diámetro del ventrículo izquierdo en comparación con el control. Los grupos LAL también mostraron un aumento en el espesor de la pared en comparación con los grupos de control en HH 25.
