Comience por configurar la estación de trabajo de automatización. Incorpore un dispositivo de iluminación de microplacas, como un optoPlate, que permita un cómodo acceso al brazo de la pinza del robot. A continuación, procese una hoja de cálculo con el script de MATLAB disponible para programar optoPlate.
Ejecute el programa de estimulación de luz parpadeando en la optoPlate. Para programar el robot, solucione cualquier error potencial para garantizar el correcto funcionamiento del portador y las definiciones de LabWare. Pase una placa vacía a través del bucle de script varias veces para verificar la capacidad del brazo de agarre del robot para recoger y colocar la placa con precisión.
A continuación, seleccione colonias de las placas para configurar la placa de muestra. Luego inocularlos en tres mililitros de medios sintéticos completos en tubos de cultivo de vidrio. Incube estos cultivos durante la noche a 30 grados centígrados en un tambor de rodillo en la oscuridad.
En cubeta, diluir 200 microlitros del cultivo en un mililitro de medio sintético completo. Registre su densidad óptica con un espectrofotómetro. A continuación, diluya cada cultivo durante la noche hasta una densidad óptica de 0,1 en tubos de cultivo de vidrio.
Pipetear los cultivos diluidos en una placa de 96 pocillos. Incluya pocillos con medios en blanco y celdas no fluorescentes como controles negativos. Incubar la placa de muestra en una incubadora agitadora a 30 grados centígrados durante cinco horas.
Ahora, coloque la placa de muestra en el agitador calentador. Inicie el script de automatización haciendo clic en Ejecutar. Una vez registrada la medición inicial en el lector de placas, inicie el programa de estimulación lumínica encendiendo la regleta del dispositivo de iluminación.
Los valores de fluorescencia a lo largo del tiempo para una cepa optogenética mostraron que el nivel general de fluorescencia era proporcional al ciclo de trabajo de la estimulación lumínica. Los valores de densidad óptica correspondientes fueron consistentes, lo que sugiere que el crecimiento no se vio afectado por las condiciones de luz variables. Diferentes cepas optogenéticas emplearon diferentes respuestas a la intensidad del pulso de luz, el período y las variaciones del ciclo de trabajo.
