Para comenzar, coloque el corte de médula espinal preparado en la cámara de grabación. A continuación, coloque el ánodo del sistema de micromanipulación cerca de la línea media dorsal en el cátodo cerca de la zona de entrada de la raíz dorsal para un posicionamiento adecuado del estimulador de la médula espinal. Ahora cambie a una lente de objetivo de 60X para identificar una neurona sana que tenga una superficie lisa y brillante sin núcleos visibles.
Disminuya ligeramente la intensidad infrarroja, encienda la fuente de luz fluorescente y ajuste el filtro de luz a la opción de excitación ultravioleta de banda ancha. Ahora, seleccione una neurona motora positiva para oro fluorado apropiada y baje gradualmente el electrodo hasta que esté cerca de la neurona. A medida que la pipeta entra en contacto con su superficie, busque una pequeña hendidura de membrana a nivel de la punta y libere la presión positiva aplicada anteriormente.
A continuación, aplique presión negativa a la pipeta con una jeringa y espere hasta que el valor de resistencia aumente a gigaohmios en la interfaz del software. Fije el potencial de membrana a menos 70 milivoltios. Presione el botón de compensación de capacitancia rápida en la interfaz de software del amplificador, luego aplique una breve presión negativa para romper la membrana celular y presione el botón de compensación de capacitancia lenta en la interfaz de software del amplificador.
Aplique la estimulación de la médula espinal durante uno o dos segundos manteniendo la amplitud entre uno y 10 miliamperios. Determinar el umbral motor aumentando gradualmente la amplitud de estimulación hasta que se observe el primer potencial de acción. Distinga las neuronas motoras de disparo retardado e inmediato utilizando una inyección de corriente despolarizante de cinco segundos alrededor de la reobase en el modo de pinza amperimétrica.
Después de apagar la estimulación de la médula espinal, continúe registrando los potenciales de membrana para capturar el disparo de los potenciales de acción espontánea. Cuando se elevó la amplitud de la estimulación de la médula espinal, se aumentó el potencial de membrana y los potenciales de acción se activaron cada 10 a 20 pulsos. Después de que se apagó la estimulación de la médula espinal, la neurona disparó una serie de potenciales de acción espontáneos durante un corto período de tiempo.
Luego, el potencial de membrana en reposo volvió a menos 65 milivoltios.
