Para comenzar, coloque el mouse anestesiado en la mesa de operaciones. Mantenga la temperatura corporal con una sonda rectal conectada a una almohadilla térmica. Realizar una incisión en la piel de la cabeza en la dirección de la sutura sagital, comenzando desde las orejas hasta la zona entre los ojos.
Retraiga la piel y retire el periostio del lado derecho del cráneo. A continuación, encuentra las coordenadas, 2,5 milímetros laterales de bregma. Aplique cianoacrilato al soporte doppler y fíjelo para la flujometría láser-doppler.
Después de que el pegamento se haya secado, conecte la sonda Doppler. Luego, verifique la lectura correcta de la señal para evaluar el flujo sanguíneo cerebral. Para realizar la oclusión de arterias, gire el ratón a la posición supina y fíjelo a la mesa quirúrgica con cinta médica.
A continuación, haga una incisión en la línea media del cuello. Tire de la piel lateralmente, seguido de un tirón de las glándulas salivales con retractores. Esto expone el territorio carotídeo.
Identificar la anatomía vascular de la arteria carótida común, o CCA, la ICA y la ECA, así como las diferentes arterias derivadas de ellas. Para facilitar su manipulación, separe el CCA y luego el ECA del tejido conectivo. A continuación, cauterice la arteria tiroidea superior y separe la ACI del tejido conectivo.
Revise nuevamente para asegurarse de que las arterias principales estén completamente separadas del tejido conectivo. A continuación, envuelva suturas de seda 6-0 alrededor del ECA en la bifurcación lingual maxilar. A continuación, sutura alrededor de la CCA.
Colocar un clip vascular que interrumpa la circulación sanguínea desde la ACI. Haga una pequeña incisión en el ECA cerca del área donde se encuentra el nudo apretado. Inserte el monofilamento hasta que la capa gruesa haya entrado completamente en la luz arterial.
Apriete el segundo nudo para sujetar el monofilamento dentro de la arteria y evitar que la presión ejercida por la sangre lo empuje hacia afuera. Corte el ECA por debajo del primer nudo y gire el tocón para orientarlo en la dirección del ICA. Avance el monofilamento a través del ICA hasta el punto donde se ramifica el MCA.
La oclusión se refleja en una caída abrupta del flujo sanguíneo en la lectura de LDF. Después de 40 minutos, anestesia al ratón nuevamente y colóquelo nuevamente en la mesa quirúrgica. Retira los puntos del cuello.
Después de 45 minutos de oclusión, afloje el nudo que mantiene el monofilamento en su lugar. Tire lenta y suavemente del filamento y compruebe que se produce la recanalización del tejido. A continuación, saca el filamento y aprieta el nudo para evitar la pérdida de sangre, limpia la sangre y desata el nudo CCA.
Asegúrese de que no haya daños en la pared arterial. Retire los retractores y vuelva a colocar los músculos, las glándulas y la piel. Suturar la piel con una sutura 6-0 y aplicar desinfectante.
Desconecte la sonda Doppler y separe el soporte. Por último, sutura y desinfecta la piel de la cabeza. El resultado del procedimiento de oclusión transitoria de la arteria cerebral media se evaluó mediante neuroimágenes de resonancia magnética in vivo.
La evolución de la lesión evaluada en diferentes momentos después de la reperfusión mostró que la progresión del volumen de la lesión tarda aproximadamente dos días en completarse. Las pruebas de comportamiento, como la prueba de fuerza de agarre, mostraron una pérdida de fuerza en ratones después de 24 horas de oclusión transitoria de la arteria cerebral media. Además, tras la estimulación en la prueba de la esquina, los ratones mostraron una preferencia por girar hacia el lado derecho, que era ipsilateral a la lesión, lo que indica una oclusión exitosa de la arteria cerebral media en el lado derecho.
