Para empezar, distribuya aleatoriamente los ratones cuya cavidad oral es negativa para el crecimiento de cándida en nueve grupos, cada uno correspondiente a una concentración diferente de curcuminoides con o sin luz. El primer día, inyectar por vía subcutánea el fármaco inmunosupresor prednisolona a todos los miembros de los grupos. Proporcionar clorhidrato de tetraciclina a una concentración de 0,83 miligramos por mililitro en el agua potable desde el primer día hasta el final del experimento.
Al segundo día, administre cloruro de clorpromazina por vía intramuscular en cada músculo del muslo para sedar al ratón para la inoculación intraoral. A continuación, sumerja un hisopo estéril en una suspensión estandarizada y recién preparada de Candida albicans. Después de colocar al ratón en posición supina, frote su lengua con un hisopo empapado durante 30 segundos.
Al quinto día, administre una inyección subcutánea complementaria de prednisolona para mantener la inmunosupresión. Al séptimo día, antes del tratamiento, coloque el ratón anestesiado en posición supina sobre un dispositivo PAD equipado con hilos. Enrolle el hilo alrededor de los incisivos para mantener la boca abierta.
Dispensar 70 microlitros del fotosensibilizador en el dorso de la lengua de cada ratón perteneciente a los grupos C+L+. Luego, mueva la lengua hacia el interior de la cavidad oral y mantenga el ratón en un ambiente oscuro durante 20 minutos como período previo a la irradiación. Después del período de fotosensibilización, coloque el dispositivo LED en el dorso de la lengua e enciéndalo durante siete minutos.
Aplique fotosensibilizador a los grupos C + L como se demuestra y mantenga a los ratones en la oscuridad durante 27 minutos. Inmediatamente después del tratamiento, frote el dorso de la lengua durante un minuto, utilizando un hisopo de algodón estéril para extraer la Candida albicans de la lengua. Coloque cada hisopo de muestra en un tubo que contenga un mililitro de solución salina estéril y vórtice durante un minuto para resuspender las células microbianas.
Sin demora, realice diluciones en serie de diez veces en PBS y coloque 25 microlitros alícuotas en placas de agar dextrosa Sabouraud por duplicado. incubar las placas aeróbicamente a 37 grados centígrados durante 48 horas. Después de 48 horas, use un contador de colonias digital para determinar los recuentos de colonias de levaduras.
Calcule la carga de candida albicans para cada animal. Al octavo día, después de sacrificar adecuadamente al animal, se procede a la extirpación quirúrgica de la lengua, se realiza la extracción de la lengua por delante de las papilas circunvaladas para asegurarse de que se extirpa toda la lengua. Finalmente, se procede al análisis histopatológico de la lengua aislada.
El modelo murino de candidiasis oral mostró manchas blancas típicas y pseudomembranas en la lengua de los ratones infectados. La terapia fotodinámica antimicrobiana redujo la viabilidad de Candida albicans a una concentración de curcuminoides de 80 micromolares. Las lenguas de los animales no infectados mostraron tejidos sanos normales, incluyendo: lámina propia, membrana basal y papilas filiformes intactas.
En el grupo C-L, se observaron levaduras y filamentos en la capa epitelial queratinizada. Se presentó una respuesta inflamatoria leve en el tejido conectivo subyacente. Por el contrario, los ratones tratados con terapia fotodinámica antimicrobiana mediada por 80 curcuminoides micromolares tenían menos células fúngicas en la capa queratinizada del epitelio de la lengua.
