Para comenzar, seleccione imanes rectangulares planos para ensamblar los juegos de imanes para patrones de tiras. Corta placas de silicona de 2 milímetros de grosor en rectángulos de las dimensiones 2 x 8 x 30 milímetros. A continuación, ensambla los imanes rectangulares y las placas de silicona capa por capa.
Para patrones de matriz de puntos, ensamble los imanes cilíndricos en miniatura asegurándose de que cada juego de imanes conste de 36 imanes cilíndricos dispuestos en una cuadrícula de 6 x 6. Para preparar un dispositivo de cultivo celular, emplee un perforador para crear un orificio rectangular de 1 x 1 centímetro en la placa de silicona de 2 milímetros de grosor. Recorta la placa de silicona alrededor del agujero para crear un molde redondo con el agujero en el centro.
Para la esterilización, coloque los moldes en el limpiador ultrasónico. Esterilizar los moldes con agua pura durante 10 minutos. Luego, reemplace el agua con etanol al 75% durante 10 minutos.
Secar los moldes en una caja esterilizadora a 65 grados centígrados durante 60 minutos. A continuación, coloque el molde de silicona esterilizado en un portaobjetos redondo de celda de vidrio de 25 milímetros y presione suavemente el molde para que la silicona se adhiera al vidrio. Coloque los juegos de imanes en una placa de 6 pocillos y coloque el dispositivo de cultivo celular encima del juego de imanes.
Para preparar una solución inyectable de Gd-DTPA de 30 milimolares, mezcle 30 microlitros de Gd-DTPA con 470 microlitros de medio de cultivo celular completo. Para crear los patrones de celdas, centrifugue la suspensión de HUVECs a 200G durante 5 minutos. Y vuelva a suspender el gránulo en un medio que contenga Gd-DTPA.
Después del recuento de células, ajuste la densidad celular a aproximadamente 2 veces 10 a 5 células por mililitro utilizando un medio que contenga Gd-DTPA. Mezcle suavemente la suspensión celular y agregue 200 microlitros a la cavidad del molde de cultivo celular para crear una superficie líquida llena de borde. Incubar la placa durante 3-6 horas hasta que las células se adhieran al sustrato.
Después de la incubación, reemplace el medio que contiene Gd-DTPA con un medio de cultivo completo y retire el dispositivo de cultivo celular del juego de imanes. Para preparar un dispositivo de cultivo celular para el patrón de células rayadas, reemplace las placas de silicona gruesas del dispositivo con placas delgadas. Después de modelar el primer tipo de células, como se demostró anteriormente, mueva el dispositivo de cultivo celular 1 milímetro de los imanes de abajo hacia la derecha.
Aplique el mismo procedimiento de patrón al segundo tipo de celdas. Y mueva el tercer dispositivo de cultivo celular 1 milímetro de los imanes de abajo hacia la derecha. Modele el tercer tipo de células como se ha demostrado.
Después de modelar todos los tipos de células, lave los portaobjetos de vidrio dos veces con 200 microlitros de PBS. Finalmente, reemplace el PBS con un medio de cultivo celular completo. Las pruebas de viabilidad realizadas en los HUVEC tratados con Gd-DTPA durante 12 horas no mostraron una disminución significativa en la viabilidad celular, excepto para 50 milimolares de Gd-DTPA, lo que resultó en una diferencia estadística, pero conservó una tasa de vida de aproximadamente el 90%.
