Para comenzar, tome una película de plástico de polietileno de 16 centímetros de largo, 12 centímetros de ancho y 20 micrómetros de grosor. Utilice una herramienta de molienda de vidrio para extraer 30 protuberancias semicirculares en un diseño de PCR estándar de 96 pocillos. Exponga ambos lados de la película plástica de polietileno prensada a la luz ultravioleta durante una hora para desinfectarla.
Agregue una pequeña cantidad de alcohol polivinílico al 10% a la superficie semicircular. A continuación, coloque alrededor de 3.000 avispas hembras dendrolimi anestesiadas en una caja de recolección. Coloque el lado convexo de la tarjeta de huevo de película hacia la caja de recolección y asegure los bordes con una banda elástica.
Ahora agregue cuatro microlitros de solución de aminoácidos a cada protuberancia. Luego cúbralo con otro trozo de película plástica de polietileno. Use una banda elástica para cubrir herméticamente la caja de recolección con dos hojas de plástico.
Deje que las avispas parasiten libremente durante cuatro a ocho horas. Proporcione un 10% de agua de sacarosa a través del algodón húmedo durante la parasitación. A continuación, obtenga la solución de aminoácidos parasitados de la protuberancia interna de la tarjeta de huevo artificial y transfiérala a la tapa de tubos de 1,45 mililitros.
Cubra la tapa del tubo con una red de nailon de 10 micrómetros, con un diámetro de 25 milímetros. A continuación, fije ligeramente la red de nailon en el tubo. Centrifugar el tubo superior derecho a 1,360 g durante 10 segundos.
Recoja la solución filtrada que contiene el veneno. Almacene el veneno a menos 80 grados centígrados para realizar más análisis. El análisis de BCA de las muestras de veneno mostró que la concentración de proteína de veneno osciló entre 0,35 y 0,46 microgramos por microlitro.
El control negativo de la solución de aminoácidos solo tuvo una concentración de proteína de 0,03 a 0,05 microgramos por microlitro. El análisis del veneno de SDS-PAGE mostró un rango de proteínas que abarca desde menos de 10 kilodaltons hasta más de 130 kilodaltons de tamaño.
