Para comenzar, pesa tres gramos de polvo de Rhodiola crenulata y transfiérelo a una botella cónica de 100 mililitros. Con una pipeta de tazón grande, agregue 25 mililitros de metanol a la botella. Coloque el frasco en el instrumento ultrasónico.
Ajuste la potencia a 250 vatios, la frecuencia a 40 kilohercios, el tiempo a 30 minutos e inicie la ultrasonicación. A continuación, enjuague el exterior de la botella con agua corriente hasta que alcance la temperatura ambiente. Filtre la solución a través de una membrana microporosa de 0,22 micras.
Con una jeringa de un mililitro, aspire 800 microlitros de líquido de la botella y recoja 400 microlitros de la solución intermedia en una botella de muestra cromatográfica. Mida y agregue un miligramo de salidrósido, 0,5 miligramos de tirosol y 0,5 miligramos de ácido gálico en tres matraces aforados separados de un mililitro. Luego, llene cada matraz hasta la escala marcada con metanol.
Sonicar las muestras en el instrumento ultrasónico utilizando las condiciones descritas anteriormente. Tras la ultrasonicación, aspirar 800 microlitros de líquido del matraz. Filtre la solución a través de una membrana microporosa de 0,22 micrómetros y recoja 400 microlitros de filtrado en la botella.
Agregue triclorometano, acetato de etilo, metanol y ácido fórmico en un lado del cilindro de cromatografía de doble tanque. Agite el cilindro para mezclar el contenido uniformemente y cubra la culata superior. Coloque las soluciones estándar de ácido gálico, salidrósido, tirosol y nuestra solución de crenulata en el soporte de muestras en las posiciones A1 a A4. Coloque una lámina de silicona de 5x10 centímetros sobre la mesa de muestreo.
Encienda la máquina de muestreo automático y abra la válvula de control de aire. Presione el botón Continuar para el muestreo automático. Después de la toma de muestras, apague la máquina y la válvula de aire.
Retire la lámina de silicona de la máquina. Coloque la lámina de silicona en el otro lado del cilindro de cromatografía de doble tanque. Cubra la culata superior y sature previamente durante 20 minutos.
A continuación, use una pinza para sujetar el extremo superior de la placa de capa delgada y coloque rápidamente la lámina de silicona en el agente de revelado. Una vez que el solvente orgánico se evapore, rocíe la lámina de silicona con una solución cromogénica. El análisis cromatográfico en capa fina mostró que la muestra de R. crenulata apareció en manchas del mismo color, correspondientes a los estándares de ácido gálico, salidrósido y tirosol.
