Para empezar, mueva a los cachorros a una jaula separada lejos de la madre mientras los manipula. Antes de comenzar el procedimiento de inyección, utilizando el microscopio de disección, confirme el espacio intervertebral o, como mínimo, la línea media del canal espinal del cachorro. Cargue una jeringa de 25 o 10 microlitros con 10 microlitros de la sustancia inyectable deseada, como la formulación del medicamento, la preparación de virus o el líquido cefalorraquídeo artificial de control, etc.
Una vez que el animal esté completamente anestesiado, confirmado por la reducción o ausencia de movimiento corporal, coloque suavemente a los cachorros bajo el microscopio. Con los dedos índice y pulgar izquierdos, palpar cuidadosamente el espacio intervertebral a lo largo de la línea media, situado entre las cinturas pélvicas bilaterales. Gira suavemente la base de la cola ligeramente para ayudar a identificar la línea media de la columna vertebral.
Inserte con cuidado la aguja, inclinándola en un ángulo de 70 a 80 grados en el punto donde se cruza la hendidura mientras se asegura de que permanezca alineada con el plano sagital central. A medida que la aguja hace contacto con el hueso, disminuya gradualmente el ángulo hasta aproximadamente 30 grados y avance la aguja unos dos milímetros en el espacio intervertebral. Inyecte lentamente hasta 10 microlitros de volumen en 50 a 60 segundos.
Mantenga la aguja en su lugar durante 10 a 20 segundos después de completar la inyección. Retire la aguja con una rotación suave para evitar fugas. Después de la inyección, coloque al cachorro en una almohadilla térmica durante 10 a 15 minutos para permitir que el cachorro se recupere por completo y se vuelva a calentar.
La administración de la inyección intratecal de verde rápido en neonatos de tipo salvaje dio lugar inmediatamente a la distribución generalizada de la solución administrada. Los ratones reporteros de YFP mostraron una expresión generalizada de YFP en todo el cerebro 10 días después de la inyección intratecal de edición genética basada en CRISPR-Cas9.
