Para empezar, licúa las muestras de semen humano recogidas y homogeneízalas a fondo con una pipeta pasteur. A continuación, transfiera 100 microlitros de la muestra de semen a un tubo de centrífuga. A este tubo, agregue 900 microlitros de la solución de tinción.
Mezcle repetidamente pipeteando y homogeneice completamente el reactivo. Coloque el tubo en un agitador bidimensional para una agitación continua a 200 RPM durante 30 minutos a temperatura ambiente. Mientras espera la reacción de tinción, proceda al análisis de la concentración de espermatozoides utilizando el sistema CASA.
Después de encender el sistema, haga doble clic en el icono de SCAscope para abrir el software de la aplicación. A continuación, mezcle bien la muestra de semen pipeteando y transfiera hasta 10 microlitros de la muestra a la cámara de recuento de SCA. Espere 60 segundos para que la muestra de semen deje de desplazarse.
A continuación, coloque la cámara de recuento SCA en el portamuestras del sistema CASA. En el software de la aplicación, introduzca la información del paciente en el cuadro de diálogo. Haga clic en el botón de inicio para registrar la concentración de espermatozoides en el semen.
Luego, detenga la coctelera cuando se complete la reacción de tinción de 30 minutos. Antes del análisis, mezcle el contenido del tubo de centrífuga mediante pipeteo. Transfiera hasta 10 microlitros del reactivo a la cámara de recuento de espermatozoides y cúbralo con un cubreobjetos de vidrio dedicado.
Coloque la cámara de recuento de espermatozoides en la platina microscópica y encienda el microscopio óptico. Luego, espere 60 segundos para que la muestra de reactivo deje de derivar. Con una lente de objetivo de 10x, ajuste el rumbo y las perillas de ajuste fino para seleccionar un campo de visión.
A continuación, cambie a una lente de objetivo de 40x y observe los espermatozoides y los leucocitos positivos a la peroxidasa. Utilice el sistema de contador electrónico para contar al menos 200 espermatozoides y el número de leucocitos positivos para peroxidasa en marrón. Con esta técnica, se tiñeron los leucocitos positivos a peroxidasa en la muestra de semen.
Los leucocitos peroxidasa positivos mostraron un tono marrón que contrastaba con las células redondas, ordinarias y sin teñir.
