Preparación, montaje e imágenes de láminas de luz de larvas de pez cebra para estudios de desarrollo cardíaco

Para comenzar, encienda el microscopio estereoscópico para registrar el desarrollo de las larvas de pez cebra entre cero y siete días después de la fertilización. Preparar agarosa de bajo punto de fusión al 0,8% con 150 miligramos por litro de tricaína. Una vez que la agarosa se enfríe a temperatura ambiente, usando una pipeta de transferencia, mueva el pez cebra anestesiado a la agarosa.

Con otra pipeta de transferencia, monte el pescado con agarosa en un tubo de etileno propileno fluorado. Conecte el tubo con la larva de pez cebra montada a la platina de muestra de microscopio de lámina de luz motorizada de seis ejes. Sumerja el tubo en la cámara de muestras llena de agua E3.

Gire las larvas de pez cebra desde el lado ventral para una mejor visualización del corazón. Conecte la platina de muestra motorizada a la estación de trabajo. Y configure todos los parámetros necesarios, incluido el modo de movimiento deseado.

Establezca una conexión entre la cámara CMOS y la estación de trabajo. Establezca el tamaño del paso en 1 micrómetro, el número total de fotogramas en 300 y el tiempo de exposición en 5 milisegundos. A continuación, defina la región de interés deseada.

Encienda el láser e inicie la obtención de imágenes microscópicas de lámina de luz de las larvas. Grabe 300 fotogramas como una secuencia de imágenes en 2D para cubrir de tres a cinco ciclos cardíacos de las larvas. Grabe otra secuencia de imágenes del nuevo corte de muestra hasta que se cubra todo el corazón.