1 Para comenzar, transfiera el tejido tumoral2 sumergido en 25 mililitros de hibernación A 3 a una placa de Petri de vidrio esterilizada 4 bajo una cabina de flujo laminar. 5 Usando un microscopio, elimine cuidadosamente 6 todo el tejido necrótico. 7 Luego use un bisturí 8 y pinzas de tejido para diseccionar los vasos sanguíneos.
9 Corta el tejido tumoral en 10 pedazos de uno a dos centímetros cúbicos. 11 Transfiera a una placa de Petri de plástico 12 que contenga tres mililitros de medio H-GPSA, 13 y coloque la placa en hielo. 14 Para procesar manualmente el tumor, transfiera la pieza tumoral 15 a una placa de Petri de vidrio nueva.
16 Con dos bisturíes, disecciona el segmento 17 en secciones de 0,5 mililitros bajo un microscopio. 18 Para procesar mecánicamente el tumor, primero, 19 coloque la cuchilla correctamente. 20 A continuación, ajuste el grosor de la rebanada a 0,45 a 0,50 milímetros, 21 y fije la perilla de liberación de la mesa al modo de inicio.
22 Corta el bloque de agaro en un cilindro de dos centímetros de largo 23 y pégalo en el plato circular de plástico de la picadora. 24 Con un bisturí, cree un hoyo en el cilindro de agaro 25 y coloque el tejido tumoral en el hoyo. 26 A continuación, coloque el disco de plástico en el disco de montaje 27 de la mesa de corte y pulse el botón de reinicio 28 para iniciar el proceso de corte.
29 Después de la primera ronda, gire el disco de montaje 30 por 90 grados y repita nuevamente 31 para cortar el tejido en trozos rectangulares. 32 Retire el disco de plástico. 33 Y luego, con una espátula de tejido, 34 gire solo el tejido tumoral 90 grados.
35 Vuelva a colocar el disco de plástico en la mesa de corte 36 y pulse el botón de reinicio para continuar con el corte. 37 Luego, usando una pipeta de cinco mililitros, 38 transfiera el material procesado, 39 junto con el medio, a la placa de Petri. 40 Coloca el plato inmediatamente sobre hielo.
