Comience por retirar la placa que contiene HIE diferenciados de la incubadora. Para sincronizar el reloj molecular de los enteroides, agregue dos microlitros de dexametasona de 100 micromolares a la placa e incube a 37 grados centígrados con 5% de dióxido de carbono durante una hora. Durante la incubación, ajuste el porcentaje de dióxido de carbono y la temperatura del luminómetro al 5% y 37 grados Celsius respectivamente.
Después de la sincronización del reloj, reponga los enteroides con tres mililitros de medio de diferenciación precalentado que contenga 200 micromolares de D-Lucifer. Coloque el plato en una mesa de ocho pocillos del luminómetro de incubación y cubra la mesa de platos de muestra con su tapa. Coloque dos cámaras humidificadoras con pañuelo húmedo o esponja en la parte superior de la mesa de platos de muestra y cierre la tapa de la máquina.
En el software de bioluminiscencia, haga clic en la pestaña de condiciones para ajustar la configuración del número de platos, el tiempo de medición, el procesamiento en segundo plano y el tipo de filtro. A continuación, haga clic en Aceptar para guardar la configuración. Para iniciar el experimento, haga clic en la pestaña Ejecutar, seguida del botón Inicio.
A continuación, haga clic en las pestañas de ruido bruto filtrado o sin tendencia en la parte superior de la pantalla para observar las señales de los datos seleccionados. Después de grabar, haga clic en el botón de parada para detener la ejecución. Vaya a la pestaña de archivo, seleccione guardar como y guarde los datos en formato Kronos.
Finalmente, haga clic en archivo y seleccione exportar como formato Excel para exportar los datos a una hoja de cálculo. El registro de la bioluminiscencia de un evaluó la ritmicidad circadiana de los HIE en condiciones enriquecidas con células madre e inductoras de diferenciación. El análisis de transformación rápida de cuatro años reveló que, en condiciones diferenciadoras, la bioluminiscencia de la luciferasa B MAL one exhibió oscilaciones circadianas robustas con una periodicidad media de 22,92 horas.
Por el contrario, los HIE demostraron ritmos circadianos alterados en condiciones enriquecidas con células madre.
