Trasplante de esferoides hepáticos a la cámara anterior del ojo del ratón para estudios de imagen

Para comenzar, reúna todos los recursos necesarios y limpie la jeringa, el tubo y la cánula Hamilton con etanol al 70 %, seguido de solución salina. Después de llenarlos con solución salina, pegue la jeringa Hamilton al banco horizontalmente. A continuación, prepare la unidad de isoflurano de anestesia y caliente la almohadilla térmica a 37 grados centígrados.

Cubra las puntas de las pinzas unidas a la junta universal sólida con un trozo de tubo de polietileno para formar un bucle. Con una pipeta y una punta de 200 microlitros, transfiera los esferoides hepáticos de la placa de 96 pocillos a una placa de suspensión celular de 35 milímetros que contenga medios de mantenimiento. Después de anestesiar el mouse, transfiéralo a la almohadilla térmica e inmovilice la cabeza con los tornillos.

Luego, saque suavemente el ojo de la cavidad y asegúrelo con las pinzas. Para evitar que se seque, coloque una gota de solución salina en ambos ojos. Con la jeringa Hamilton, aspire los esferoides hepáticos bajo el estereoscopio.

Coloque la cánula horizontalmente sobre una superficie limpia. Con una aguja de calibre 23, perfore cuidadosamente la córnea y deslice la aguja hacia los lados para ensanchar la incisión. Seque el humor acuoso que se filtra con un pañuelo de papel y agregue gotas de solución salina al ojo para mantenerlo húmedo.

Coloque la cánula verticalmente para permitir que los esferoides hepáticos graviten hacia la punta y luego insértela suavemente en el orificio. Con la jeringa Hamilton, expulse lentamente los esteroides hepáticos en la ECA. Con la punta de la cánula, pinche suavemente la córnea desde el exterior para colocar los esferoides hepáticos alrededor de la pupila.

Después de 5 a 10 minutos, suelte el ojo de las pinzas. Para lubricar y curar la córnea, aplique ungüento oftálmico de vaselina sobre el ojo operado. Antes de despertar al ratón, administrar el analgésico por vía subcutánea para evitar molestias postoperatorias.