Para empezar, utilice la resonancia magnética multi o biparamétrica para localizar el tumor y su posición en la glándula prostática antes de la cirugía. A continuación, prepare al paciente con acceso abdominal, insuflación y colocación del puerto de quimioterapia. Ajuste el neumoperitoneo a 12 milímetros.
Hacer una incisión en el peritoneo para liberar la vejiga y diseccionar el espacio perirrerectal. Ahora, abra la fascia pélvica a ambos lados y realice una disección completa de los aspectos anterior y lateral de la próstata y la vejiga. Abra el cuello de la vejiga e identifique la uretra proximal.
Seccionar la uretra proximal para acceder a los aspectos posteriores de la próstata y la vejiga. A continuación, disecciona las vesículas seminales y el espacio recto, seguido de los aspectos laterales de la próstata. Disecciona el ápice.
A continuación, seccione la uretra distal. A continuación, se completa la anastomosis vesicouretral. Extraiga la próstata y luego suture la incisión para cerrarla.
Coloque la próstata recién recolectada en un recipiente seco. Para procesar la próstata para la recolección de muestras, primero seleccione las zonas objetivo en función de la información de la resonancia magnética. Con una aguja automática desechable, recupere muestras cilíndricas de las áreas seleccionadas.
A continuación, identifique la zona exterior del cilindro y sujétela con un par de pinzas de tejido. Coloque el cilindro en un portaobjetos y marque la zona exterior con tinta de seda. Coloque los cilindros recolectados horizontalmente en un disco portamuestras lleno de medio de inclusión de criostato y transfiéralos a una placa de enfriamiento de micrótomo para el corte.
A continuación, fije el disco portamuestras al portamuestras. Utilice el compuesto OCT para incrustar la muestra de tejido antes de seccionar. Utilice un micrótomo de criostato para cortar la muestra a 25 grados centígrados.
Recoja secciones delgadas de tejido en forma de cilindro en portaobjetos de microscopio tratados. Fije los portaobjetos en etanol al 96%, luego hidrátelos en agua destilada. Tiñe las secciones con hematoxilina Harris durante un minuto.
Ahora trate los portaobjetos con hidróxido de amonio al 30% para que la hematoxilina se vuelva azul. A continuación, tiñe los portaobjetos lavados con eosina durante 30 segundos. A continuación, deshidrate los portaobjetos con titulaciones crecientes de alcohol, seguido de una limpieza con xileno al 100%.
Monta los portaobjetos con GPX y coloca un cubreobjetos sobre el tejido teñido. Utilice un microscopio óptico para analizar la muestra teñida, discriminando las áreas con el carcinoma y determinando la puntuación de Gleason del tumor. Marque zonas tumorales precisas en los portaobjetos.
A continuación, con la cuchilla quirúrgica, macro-microdiseccione las áreas de muestra marcadas en el portaobjetos dentro del disco OCT. Cuando el tejido de inclusión comience a descongelarse, levante el tejido con un par de pinzas y colóquelas en criotubos correctamente etiquetados. Esta técnica se utilizó para obtener material tumoral del 61% de los casos estudiados.
De las 16 próstatas en las que la adquisición tumoral no tuvo éxito, 10 tenían menos del 10% de carga tumoral y ninguna superó el 20%Un análisis de la curva ROC mostró un área bajo la curva de 0,843, lo que indica que este método puede ofrecer resultados satisfactorios en la adquisición de tumores. La correlación histopatológica de la muestra de prostatectomía radical frente a la biopsia cilíndrica procesada se realizó mediante tinción de hematoxilina y eosina. Se encontraron diferentes patrones histológicos a lo largo del cilindro, como el patrón 3 de Gleason, que mostraba pequeñas glándulas bien formadas revestidas de células cancerosas.
Se observaron glándulas de forma irregular con células atípicas agrandadas en las secciones del patrón de Gleason 4. Las muestras con neoplasia intraepitelial prostática mostraron células apiñadas dentro de los espacios ductales.
