Para comenzar, mezcle la cantidad calculada de cada cepa bacteriana para totalizar hasta aproximadamente 5 millones de unidades formadoras de colonias por mililitro. Centrifugar la mezcla a 7.000 g durante siete minutos a cuatro grados centígrados. A continuación, pipetee cuidadosamente el sobrenadante.
Vuelva a suspender el pellet en la solución salina equilibrada de Hank con baja capacidad de amortiguación y glucosa. Ahora, separe los chips de los órganos que contienen las células epiteliales vaginales humanas diferenciadas de las vainas. Enchufe la salida del canal basal del chip con una punta de pipeta.
Añada 200 microlitros de medio de diferenciación libre de antibióticos a la entrada del canal basal sin empujar hacia abajo el émbolo de la pipeta. Suelte la punta de la pipeta de la pipeta, permitiendo que el medio fluya libremente a través del canal. A continuación, pipetee 37 microlitros del inóculo bacteriano en la entrada del canal apical del chip mientras aspira desde la salida.
Tira de la punta. A continuación, enchufe tanto la entrada como la salida del canal apical con las puntas de las pipetas. Para los chips de control, pipetee 37 microlitros de solución salina equilibrada de Hank con baja capacidad tampón y glucosa en la entrada del canal apical.
Después de aspirar cualquier medio en la superficie del chip, coloque los chips en una placa de Petri de 150 milímetros. Se detectaron colonias de L. crispatus y G. vaginalis dentro de las 48 horas posteriores a la siembra, lo que confirma que tanto las bacterias sanas como las disbióticas se injertaron en los chips vaginales. El pH de los chips vaginales inoculados con L. crispatus fue similar al de los chips de control no inoculados, y cuando se cocultivaron con G. vaginalis, experimentaron un aumento significativo del pH.
