Para empezar, llene una jeringa de un mililitro con 500 microlitros de fase continua. Conecte el microtubo de PTFE a una aguja de calibre 27 de 0,75 pulgadas. Monte el conjunto en la jeringa y, posteriormente, en la bomba de jeringa.
A continuación, perfore un agujero con un punzón de biopsia de 0,75 milímetros en el centro de un recorte de PDMS. Tire de aproximadamente tres centímetros de tubo de PTFE a través del orificio del recorte y empuje el conjunto hacia la parte superior de una punta de pipeta de 200 microlitros. Selle el conector con pegamento curable UV en la parte superior de la pipeta y fije el otro lado del tubo a una aguja de calibre 23 de 1,25 pulgadas.
A continuación, llene dos jeringas de un mililitro con 500 microlitros de aceite mineral ligero. Coloque dos agujas de calibre 23 con los accesorios hechos a medida y móntelas en la bomba de jeringa. Utilizando el software de control de la bomba de jeringa, aspire la solución de nanopartículas y células funcionalizadas en la punta de la pipeta de las fases acuosas.
Después de limpiar la cámara de observación preparada, sujete la cámara en el soporte de cámara impreso equipado con dos imanes de neodimio a 30 grados. Ahora, abra ambos puertos y conecte una toalla de papel en el puerto superior para absorber el exceso de fase exterior durante el llenado. Conecte la fase continua a la entrada superior del chip microfluídico.
A continuación, enjuague el chip con la fase continua durante aproximadamente 30 segundos a un caudal de 1800 microlitros por hora. Fije las puntas de pipeta de las soluciones acuosas a las dos entradas centrales del chip. Inicie el flujo de la solución acuosa a 200 microlitros por hora para cada solución.
Una vez que el líquido aparezca en la salida, comience el flujo de la fase oleosa fluorada a 800 microlitros por hora. Espere hasta que se establezca una producción estable de gotas, indicada por una solución homogénea gris y brillante en la salida. A continuación, conecte el microtubo de PTFE al puerto de salida para recoger las gotas.
Usando el módulo de férula de un accesorio de una sola pieza apretado con los dedos, diríjalos a una cámara de observación. Una vez que la cámara esté llena, detenga el flujo y cierre los puertos con tapones de puerto usando una presión apretada con los dedos. Después de la producción de gotas, enjuague el chip con aceite fluorado, seguido de nitrógeno, para expulsar el líquido restante.
Monte el soporte de la cámara en el microscopio con una platina de formato de placa de pocillo. A continuación, con el objetivo 10x, cambie el microscopio al canal de campo claro. Concéntrese en las gotas inmovilizadas en el campo claro y muévase al centro de la cámara.
A continuación, active el sistema de enfoque automatizado. Ajuste el plano de medición en el canal de campo claro para que los bordes de las gotas aparezcan como círculos negros nítidos que se distinguen fácilmente de la fase oleosa y el fondo. Recorra cada uno de los canales de fluorescencia, estableciendo el plano de medición óptimo para ellos.
Para las mediciones de reubicación, concéntrese en el agregado de nanopartículas en los canales FITC, TRITC y Cyanine5.
