Después de la enucleación transconjuntival del ojo de conejo, coloque inmediatamente 50 mililitros de paraformaldehído al 4% y PBS en hielo. Después de 15 minutos, transfiera el ojo a un plato de disección de 100 milímetros y llene el plato con PBS para evitar que el ojo se seque. Bajo un microscopio de disección, utilizando una cuchilla quirúrgica, se comienza a hacer una incisión un milímetro por delante del limbo, manteniéndola paralela al plano del iris.
Inserte unas tijeras curvas en la incisión inicial y continúe cortando circunferencialmente, manteniendo una distancia de un milímetro del limbo. A continuación, retire la córnea con pinzas y limpie suavemente el PBS con una toallita de laboratorio. Coloque la córnea en una solución de sacarosa al 30% a temperatura ambiente para la crioprotección.
Haz un corte inicial con tijeras curvas a través del iris. A continuación, se hace un corte circunferencial alrededor del ojo, de forma similar a la extracción de la córnea, para separar el iris del resto del tejido. Retire el iris con pinzas y limpie suavemente el exceso de PBS con la toallita de laboratorio.
Coloque el iris en una solución de sacarosa al 30% a temperatura ambiente para la crioprotección. Después de extraer la córnea y el iris, coloque el ojo en 50 mililitros de paraformaldehído al 4% y colóquelo en una coctelera para una agitación suave. Deje el ojo en paraformaldehído al 4% a cuatro grados centígrados durante la noche.
Al día siguiente, coloque el ojo en una placa de disección y llene la placa con PBS. Bajo el microscopio de disección, use fórceps para agarrar cuidadosamente la cápsula anterior del cristalino. A continuación, inserte con cuidado las tijeras en la cámara posterior, orientando las cuchillas hacia atrás a lo largo de la lente.
Haz un corte inicial a través de las zonas de la lente con unas tijeras curvas. Continúe haciendo pequeños cortes en un patrón circunferencial a través de las zonas del lente. Para confirmar la extracción del cristalino, agarre suavemente la cápsula anterior del cristalino con pinzas e intente levantarla.
Tras la separación, coloque la lente en una solución de sacarosa al 30% a temperatura ambiente para la crioprotección. Coloque el ojo en 50 mililitros de sacarosa al 30% y PBS a cuatro grados centígrados durante 24 a 48 horas para la crioprotección. Para acelerar la crioprotección, reemplace la solución inicial de sacarosa por una nueva después de ocho a 12 horas.
