Para comenzar, enjuague el diente extraído con una solución salina estéril para eliminar la sangre. Corte con cuidado el diente longitudinalmente en dos piezas con una fresa de fisura de carburo mientras irriga con solución salina estéril. Posteriormente, transporte el diente y su pulpa intacta en medios estériles de alfa-MEM en hielo hasta el laboratorio de cultivo de células y tejidos.
A continuación, coloque la muestra de diente extraída en una placa de Petri de cultivo estéril y enjuague bien de tres a cuatro veces con PBS estéril. Con una excavadora afilada y fórceps, retire con cuidado el tejido pulpar de la cavidad y limpie a fondo con PBS estéril para eliminar los rastros de sangre. Ahora divida la superficie del plato en cuatro partes poniendo de 1 a 2 mililitros de PBS estéril en cada parte.
Coloque la muestra de tejido pulpar en un área y córtela en trozos pequeños con una cuchilla quirúrgica. Transfiera las piezas de tejido levantándolas en áreas sucesivas con PBS. Mientras tanto, agregue aproximadamente de 0,8 a 1 mililitro de alfa-MEM que contiene aminoácidos no esenciales con 10% de FBS y un cóctel de antibióticos en un plato de seis pocillos.
Y moverlo para que los medios de comunicación se extiendan de manera uniforme. Se muestran varias etapas del desarrollo del cultivo primario de células madre de la pulpa dental. En el segundo día de siembra se observaron células redondeadas de tipo burbuja de tejido dental.
Al cuarto día se observó una red de células que salían del tejido. Sin embargo, al día 13, el número de células que emergieron del explante aumentó. Y al final de la segunda semana, la mayoría de los explantes quedaron rodeados por muchas células adherentes con morfología en forma de huso.
